促红细胞生成素受体在慢性肾衰肾性贫血中的研究

了外周血单个核细 胞表面 EPOR的表达，旨在探讨 EPOR在 CRF肾性贫血中的变 化及意义。 1 对象与方法 1．1 研究对象：慢性肾功能衰竭(CRF)非透析患者3o例，其中 男 l9例，女 11例，平均年龄55．0 4-16．4岁，原发病为慢性肾小 球肾炎 l7例，高血压肾病 11例，多囊肾2例。3o例 CRF患者 中伴肾性贫血22例，按贫血程度分为两组，重度贫血组 7例， Hb<60’g／L；轻中度贫血组 l5例，6og／L≤Hb<120 g／L。30例 CRF按 肾功能损害程度分为两组，将血清肌酐 (Ser)大于 144umol／L但不超过442 umol／L者列为肾衰早期组 ，有 l2例； 将血清肌酐大于442 umol／L列为尿毒症组，有 l8例。 尿毒症透析组 l2例，其中男 9例，女3例，平均年龄 56．5 4-16．9岁。透析组中血透 1O例，每周平均透析2．1次；腹膜透 析2例。原发病为慢性肾小球肾炎7例，高血压肾病4例，多囊 肾1例。 对照组 l5例，男性 6例，女性 9例，平均年龄48．7±15．7 岁，为同期住院肾功能正常且无贫血的患者，原发病为慢性肾 小球肾炎9例，尿路感染 5例，高血压肾病 1例。 CRF组近两月均无使用过 EPO制剂及输血史。所有病例 均排除消化道出血及发热。 1．2 方 法 1．2．1 标本采集：血透组患者于透析间期抽取肘静脉抗凝血 1 rrd。其他各组患者与对照组均于入院后早晨抽肘静脉抗凝血 1ml。取被测者枸橼酸钠抗凝血 1ml，加磷酸盐缓冲液(PBS)混 匀，离心 1000转／min，10min，去上清，重复洗涤三次后，用终浓 度0．5％小牛血清白蛋白(BSA)调节细胞浓度至4×10 ／Jnl备 用。 ． 1．2．2 流式细胞仪检测 EPOR：流式细胞仪(FACS Calibur)购 自美国BD公司。EPOR单克隆抗体为藻红蛋白(PE)标记的鼠 ． 抗人免疫球蛋白，购自美国 BD公司。从上述处理后的4×106／ JIll浓度细胞悬液中各取 100u1分别加入测定管和对照管，其中 测定管加入2oIll PE标记的鼠抗人 EPOR特异性单克隆抗体， 对照管加入 PE标记的兔抗鼠单克隆抗体，放置入2～8℃冰箱 中避光保存 30rain后，加入 3ml溶血素放置 10min，离心 10min (1000转／rain)，去上清液，加 0．5ml PBS制成细胞悬液后上机 检测，流式细胞仪开窗于单个核细胞，以阴性对照管设置阴性 区域，检测标本。流式细胞仪检测采用 LysysⅡ软件(BD公司 提供)计算出阳性细胞百分率即标记指数(Labeling Index LI) 1．2．3 其它观察指标：包括红细胞压积(HCT)、血红蛋 白 · 394· (Hb)、红细胞计数(RBC)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平 均体积分布宽度(RDW)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、 血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Cer)等。 1．2，4 统计方法：结果以均数 4-差( 4-8)表示，两均数比 较用 t检验。相关性用线性相关回归分析。 2 结 果 2．1 重度肾性贫血患者外周血单个核细胞表面 EP0R表达显 著高于轻中度肾性贫血组。重度肾性贫血患者血肌酐水平显 著高于轻中度肾性贫血组 ，见表 l。 表1 不同程度肾性贫血者外周血单个核细胞 表面 EPOR及其它临床指标( 4-s) 与轻中度贫血组比较，AP<0．05，bp<0．Ol 2．2 慢性肾衰早期组外周血单个核细胞表面 El'OR较肾功能 正常对照组升高，而慢性肾衰早期组 Hb、HCT、RBC、MCV、 RDW、MCHC与肾功能正常对照组相比无显著差别，见表2。 2．3 尿毒症透析组外周血单个核细胞表面EPOR较尿毒症非 透析组显著降低，见表 3。 2．4 当慢性肾功能衰竭时，Hb与血肌酐成负相关，r=一0． 721，P<0．01。HCT与血肌酐成负相关，r=一0．711，P<0．Ol。 Hb与HCT成正相关，r=0．994，P<0．Ol。外周血单个核细胞 表面EPOR的表达与 CRP、血清白蛋 白、外周血红细胞计数、 MCV、MCHC均无明显相关性。 3 讨 论 CRF患者贫血发病机理，除EPO生成相对减少这一点较为 肯定，仍有不少问题有待研究。人重组 EPO(rHuEp_D)能有效治 疗 CRF相关的肾性贫血，但一些患者却对 EPO抵抗，这种抵抗 可能是由于铁或叶酸的缺乏、铝中毒、甲状旁腺功能亢进或对 EPO有 自身抗体，这些因素可能都参与了 CRF患者对外源性 EPO的低反应 】。EPOR是红细胞生成素的受体，通过与 EPO 结合来抑制红系祖细胞的凋亡，促进其存活、增殖和分化。人 的红系祖细胞表面 EPOR随着生长周期不断变化，El'OR的数 目与该细胞对EPO依赖性有关，所有晚期红系祖细胞(CFU— 维普资讯 http://www.cqvip.com 第ll卷 第5期 2005年 5月 河 ，t 医 学 Vo1．11，No．5 May，2005 E)上均有 EPOR，而只有 2o％的早期红系祖细胞(BFU—E)上 有 EPOR 。正常 CD34+细胞也有 EPOR表达，网织红细胞 和 成熟红细胞上则无 EPOR 。EPOR是一种分布极为广泛的细 胞因子受体，在内皮细胞、心肌细胞、巨噬细胞、视网膜细胞、肾 上腺皮质、髓质细胞，以及小肠、脾脏、肝脏、肾脏和肺均有分 布。EPOR广泛分布在肾皮质、髓质、乳头、系膜、近端肾小管、 髓质部集合管等细胞表面 J。 表2 两组外周血单个核细胞表面EPOR及 其它临床指标的比较(i±S) 与肾功能正常对照组比较，Ap<0．01 表3 两组外周血单个核细胞表面EPOR及 其它临床指标的比较( ±S) 与尿毒症非透析组比较，Ap<0．05。Ap