灾灭最 基础医学
咔- 国组 织 工 程研 究 与临床康 复 搿
‘
73 吞 笳 79 z妒 2009 — 05 — 07 出版
J ournalofC linicalR ehabilitative T issue E ngm eering R esearch M ay7,2009 V 0 1. 13, N o 19
人胎盘与骨髓源性间充质干细胞体外培养及生物学特性对比糕
穆晓红 , 徐 林 , 赵子义 , 李小平 , 陈 江
In vitro culture and bio logicalcharacteristics ofhum an placendta m esenchym alstem cells
versus hum an bo ne m arrow m esenchym alstem cells
M u X iao— hong, X u L in, Z hao Z i— yi, L iX iao— ping, C hen J iang
A bstract
D epartm enI of
O rLhopaedics,
D ongzhim en
H ospital. B eijing
U niversity ofC hinese
M edicine, B eijing
100700 . C hina
M u X iao- hong☆ .
S tudyingfor
doctorate . A ssociate
chiefphysician .
D epartm entof
O rthopaedics.
D ongzhim en
H ospital. B eijing
U niversitvofC hinese
M edicine。 B eijing
100700. C hina
M xh
一
2004 @ 163
com
C orrespondence to:
Z hao Z i— yi. D octor.
As sociate chief
physician ,
D epartm entof
O rthopaedics.
D ongzhim en
H ospital, B eijing
U niversityofC hinese
M edicine, B eijing
100700。 C hina
zhaoziyi@ hotm ail
corn
S upportedby:the
NationaI N atural
S cience F oundation
ofC hina. N o
3060084 7’
R eceived:2009 - 03 - 27
A ccepted :2009 .- 04 - 08
3708
B A C K G R O U N D :T issue engineeringrepairforblocks oftissue defects needs a highconcentration anda large num berofcells for
jncubation. B one m arrow m esenchym alstem cells (B M S C s)are a m ain source ofseed cells, butthere are som e problem s:
Iim itation ofnum ber;celIfunctionaldegradation.
O B J E C T IV E :T o /n vitro isolate。 culture andam plifyhum an placenta m esenchym alstem cells (hP M S C s)and hum an B M S C s, and
observe theirbiologicalcharacteristics
D E S IG N 。 T IM E A N D S E T T lN G :T he cytological, /n vfro controlledstudyw as perform edatthe L aboratoryofD ongzhim en H ospital
from S eptem ber2008to F ebruary 2009 .
M A T E R IA L S :P lacenta w as supplied byD epartm entofG ynaecologyandO bstetrics。 G eneraI H ospitalofA ir F orce ofC hinese
P L A B one m arrow w as obtained from healthyadultdonors.
M E T H O D S :H P M S C s w ere isolatedfrom placenta offetation hum an bydensitygradientcentrifuge F ollow ingbone m arrow
heparin anticoagulation. hum an B M S C s w ere isolated, purified and passaged bydensitygradientcentrifuge.
M A IN O U T C O M E M E A S U R E S :C elI m orphologyand grow thw ere observed under an inverted phase contrastm icroscope . T he
5” passage cells w ere detected byflow cytom etry. D ifferentiation ofcells w as determ ined usingV on K ossa stainingandO _lredO
staining.
R E S U L T S :H P M S C s andhum an B M S C s w ere bothuniform lyspindle- shapedin appearance undera m icroscope T he
proliferative abilityofhP M S C s w ere quite stronganddeclinedw ithpassages. A ftercultured 10 passages /n vitro, cellgrowt h
becam e slow , butam plified m ultiple ofhP M S C s w as over2
— 3 orderofm agnitude com paredw ith hum an B M S C s B othhP M S C s
and hum an B M S C s expressed C D 29 。 C D 4 4 andC D l66, butdidnotexpress C D 34 , C D 4 5 and H L A _D R . B othcells hadthe
potentialofosteogenic andadipocytic differentiation, buthP M S C s hadstrongerpotential.
C O N C L U S lO N :H P M S C s and hum an B M S C s have sim ilarbiologicalcharacteristics andthe proliferative abilityofhP M S C s iS
strongerthan hum an B M S C s .
M u X H , X u L , Z hao Z Y , L iX P , C hen J . In vitro culture and biologicalcharacteristics ofhum an placendta m esenchym alstem cells
versus hum an bone m arrow m esenchym alstem cells Z hongguo Z uzhiG ongchengY anjiu yu L inchuang K angfu . 2009;13(19):
3708- 3712 . [http:llw w w . crter. cn http://en . zglckf. com 】
摘要
背景 : 组 织工 程修复大块组织缺损需要 高浓度 、 大量 的细胞接种 , 骨髓 间充质干细胞是种子细胞的主要来源 , 但存在数量上
的局 限性及 长期传代后细胞功能老 化 的 问
。
目的 : 体外分离培养 、 扩增人胎盘源性间充质干 细胞与人骨髓 间充质干 细胞 , 并对其生物学性状进行 比较 。
、 时间及地 点 : 细胞学体外对照 观 察 , 于 2008 09/2009 02 在东直门医院实验 室完成 。
: 胎盘 由解放军空 军总医 院妇产科提供 , 骨髓来源 于健康成 人献髓者 。
方 法 : 采用密度梯度离心 法 从胎 盘 中分离 、 纯化和传代培养人胎盘源性 间充质干 细胞 ; 骨髓 肝素抗凝后 , 采用密度 梯度离心
法分离 、 纯 化和传代培养人骨髓基质干 细胞 。
主要观 察指标 : 用倒置 相差显 微镜观察两种细胞形态 及 细胞 生长情况 , 流式细胞仪
检测第 5 代细 胞
面标志 的表达 ,
V on K ossa 染色及 油红 O 染色检测分化能力 。
结 果 : 镜下 两种细胞均为贴壁 生长 , 形态为均 一 成纤维细胞样 , 传 5 代后细胞 的增殖 能力随传 代 次数的增加 而有所 下 降 ,
体外培养 10 代后细胞 生长速度减慢 , 但 人胎盘源性 间充质 干 细胞扩增倍数较人骨髓基质干 细胞平均高出两三 个数量级 。 两
种细胞 具有均 一 的细胞表型 , 均表达 C D 29 , C D 4 4 , C D l66 , 不表达 C D 34 , C D 4 5 , H L A — D R 。 两种细胞都具有成骨 、 成
脂分化潜能 , 但人胎盘源性间充质干细胞分化潜能更强 。
结论 : 人胎盘源性间充质干 细胞与人骨髓基质干细胞具有相似的生物学特性 , 且 前者具有更强的增殖 能力 。
关键词 : 组织工 程 ; 人胎盘问充质干细胞 : 人骨髓 间充质干 细胞 : 生物学特性
doi:10. 3969/j. issn. 1673 - 8225 . 2009 . 19 . 021
穆晓红 , 徐林 , 赵 子义 , 李小平 , 陈江 . 人胎 盘与骨髓源性 间充质干 细胞体外培养及 生物学特性对 比 [J 】. 中国组织工 程研 究与
临床康 复 , 2009 , 13(19):3708- 3712 . 【http://w w w . crter. org http://cn. zglckf. com 】
R O . B ox 1200, S henyang 110004 cn zglckf, com
穆跷鲤 . 等 . A 稽盘s骨髓源 性惩 充磺于 缀 匏体外培养及 生 物学特性对 比
0 引言
在组 织 工 程 的研 究与应用 中 , 种 子细 胞 的
选 择 及 其规模化 扩 增研 究 一 直 是骨 组 织 工 程
面临的重 要课题 ¨J 。 骨髓 间充质干 细胞 是 目前
备 受关 注 的 一 类 具 有 多 向分化 潜 能 的组 织 干
细胞 , 在体 内外适 当的诱导环 境下可 以分化 为
骨 、 软骨 、 脂肪 、 肌 肉 、 神经 、 肌腱及韧带等
多种组 织细胞 。 该细胞群可 在体外大规模扩增
而 不丢 失多 向分化潜能 , 并且 异 体移植免疫排
斥 反应小 。 对骨髓 间充质干 细胞研 究的不 断深
入 为解决骨 、 软骨组 织工 程细胞来源 这 一 难题
带来 了前所未有 的希望 瞄
。 怕 J
。 利用骨髓 间充质
干 细 胞 进 行 骨 与 软组 织 缺 损 的修 复 也是 目前
研 究 的热 点 。
目前骨髓 间充质干 细胞主要来源 于骨髓 , 但
人骨髓 中充质干细胞 的含量极低 , 仅 占骨髓有核
细胞的十万分之 一 。 此外 , 在衰老和疾病状况下 ,
骨髓 问充质干细胞 的数量和 分化潜能下 降 , 并且
采集骨髓为创伤性过程 , 以上 原因限制 了其作为
组织工 程种子细胞的临床应用 【16
- 21 ]
o 为满足 组
织 工 程对 问充质干 细胞 的大量 需要 , 寻找 问充
质干 细胞新 的来源成 为必 然趋判 碰 它 引 。
近 年 来 不 断有 能满 足 临床 各 种 需 要 的不
同来源 的成体干,祖细胞被分离 的报 道 , 如脂肪
源性间充质干 细胞 、 外周血 源 性间充质干 细胞
等 , 而最近 报道 的胎盘源 性 问充质干 细胞更 以
其取材不受 限制 、 数量 多 、 能预先 培养储存等
优势而 成 为研 究重 点 。
另外 , 人胎盘源性问充质干细胞取材几 乎不
受限制 , 胎盘在胎儿 娩出后就完成使命 , 成为“ 废
弃 ” 物 , 只要正 常分娩的健康产妇在知情同意 的
基础 上 , 都能够提供胎盘 。 与捐献骨髓或采集动
员外周血 相 比 , 供者无痛苦 , 污染机会少 , 不涉
及社会 、 伦理 及法律方 向更多的争论 。
对 人胎盘来源 的间充质干 细胞研 究 已经 展
开 , F ukuchi掣 1bJ 已从成熟胎盘小叶中获得胎盘
源性问充质干 细胞 , 可 表达数种干 细胞标志性
基 因 。 实验拟通 过体外细胞培养的方法对 人胎
盘源 性问充质干 细胞进行分离 、 纯化 , 比较观
察其与人骨髓基质干 细胞 的生物学特性 , 为进
一 步进行组织工 程相关研 究提供实验依据 。
1 材料和方 法
设计 : 细胞学体外对照 观察 。
|S S N 1673 — 8225 C N 21 — 1 539,R coD E N :zL K H A H
时间及 地 点 : 于2008— 09/2009 - 02在东直 门
医 院实验室完成 。
材 料 : 胎 盘 由解 放 军 空 军 总 医 院妇 产科提
供 , 捐献者知情 同意 , 实验方 案经 医 院医学伦理
委 员会批准 。
骨髓 来源 于健康成人献髓者 。
试剂与仪器 来源
密度 为1 . 073 g/m L 的P ercoll分离液
低糖型 D M E M 培养基
胎牛血 清
胰酶
流式细胞仪
P harm acia公 司
G ibico公 司
H yclone公 司
P harm acia公 司
F A C S C alibur, 美 国
实验 方法 :
人胎 盘 源 性 间 充 质 干 细 胞 的 分 离和 培 养 ‘⋯ : 胎
盘 分 离 后 , 立 刻 从 脐 血 管 注 入 肝 素 (1 :250)
1 50 - 5 00 m L , 浸泡 于含有 100 U /m L 青霉 素 、
100 U /m L 链霉素 P B S 液 中保持无菌 , 常温 下带
回实验 室 。 4 - 6 h内进 行人胎盘源 性 间充质干 细
胞 分离 , 取 胎 盘小叶(去 除羊膜及 蜕膜 、 颜色鲜
艳无 瘀 血 )剪碎 , 置 入 含 0 . 1 % 胶 原酶 Ⅳ 、 O . 1%
透 明质 酸 酶 、 0 。 01 % D N asel的 D M E M 中 , 3 7 ℃
水 浴 1 5 - 25 m in 。 P B S 中和 , 120 目筛 网过 滤 ,
1 000 r/m in离 ,D 8 m in , 细胞重悬 , 1 . 073 g/m L
P ercoll分离液分离 : 先将 P ercoll分离液置 于试管
的底部 , 然后按照 1 :1 的比例缓慢滴加稀释后 的
细胞悬液 , 使两者 问形成清晰 的界面 , 2 500 r/m in
离 ,D 30 m in , 吸取 中间的 白膜层 , 即单个核细
胞层 , P B S 漂 洗 , 1 5 00 r/m in离心 1 0 m in , 弃
上 清 , 加 入 含 体 积 分 数 为 10% 胎 牛 血 清 的
D M E M 培养液 10 m L , 制成 单细 胞悬 液 , 接种
于 75 cm 。培养瓶 内 , 调 整 浓度 为2 . 0 x 1 05/cm 。 ,
置 于 37 ℃ 、 含体积 分数 为5 % 的 C 0 2培养箱 内
孵育 。 4 8 h后 除去非 贴壁 细胞 , 更 换新鲜培养
液 。 之 后 每 三 四天 换液 一 次 。 待 贴壁 细 胞 生 长
至 9 0%汇 合 时 , 用 2 . 5 g/L 胰 蛋 白酶消化 , 按 1 :
1 比例传代 , 第2代 以后 的细 胞 按 1 :2或 1 :3 的
比例传 代培养 。 于倒置 相 差显 微 镜下观 察细胞
生 长 情 况 。
人 骨髓 基质 干 细 胞 的分 离和 培养 。⋯ ’: 将采 集到
的 骨 髓 用 1 :25 0肝 素 抗 凝 处 理 , 经 L — D M E M
1 :5稀释后 , 置 于等体积 P ercoll(密度 1 . 073 g/L )
分离液上 , 1 000 r/m in离 ,D 20 m in , 吸取 中间的
白膜层 , 即单个核细胞层 , P B S 漂洗 , 1 500 r/m in
离 ,D 10 m in , 弃上 清 , 加入 含体积 分数 为 10%
胎 牛血 清的 D M E M 培养液 10 m L , 制成单细胞
北 京 中 医 药 大 学
东直 门 医 院 骨 科
中 心 , 北 京 市
100700
穆 晓 红 ☆ , 女 ,
1 972 年生 , 河 南
省 郑 州 市 人 , 汉
族 , 北 京 中医 药大
学在读博士 , 副主
任 医 师 , 主要 从 事
骨 组 织 工 程 方 面
的研 究 。
M xh 2004 @
163 . corn
通 讯 作 者 : 赵 子
义 , 博士 后 , 副主
任 医 师 , 北 京 中医
药 大 学 东直 门 医
院 骨科 中心 , 北 京
市 100700
zhaoziyi@
hotm ail. com
国 家 自然 科 学基
金 资 助 项 目
(3060084 7 ) ‘
中图分类 号:R 394 . 2
文 献 标 识 码 :B
文 章编 号:1673 - 8225
(2009)1 9 - 03708- 05
收稿 日 期 :2009 - 03 . 27
修 回 日 期:2009-0 4 - 08
(20090305006/Z S r Q )
3709
《醪疋死露~ c一 . 。母
悬 液 , 接 种 于 75 cm 。培 养 瓶 内 , 调 整 浓 度 为 2 . 0 ×
1 05/cm 。, 置 于37 ℃ 、 体积 分数 为5 % 的C 0 2培养箱 内
孵育 。 4 8 h后 除去 非贴壁 细胞 , 更换新鲜培养液 , 待
细胞 生 长至 90%融合 时 , 用2 . 5 g/L 胰 蛋 白酶 消化 , 按
1 :1 比例传代 , 第2代 以后 的细胞 按 1 :2或 1 :3 的 比
例传 代培 养 。 于 倒置 相 差 显 微 镜 下 观 察 细 胞 生 长 情
况 。
细 胞 表 面 抗 原 分 子 流 式 细 胞 仪 检测 ”
“
: 用2 . 5 g/L 胰 蛋
白酶 消化 第5 代人 胎 盘 源 性 问充质 干 细 胞 细 胞 和 人骨
髓基 质干 细胞细 胞 , 1 000 r/m in离心 5 m in , 细 胞 重
悬 。 调 整 细胞浓 度为5 × 10。 一 , 与抗 C D 29 , C D 34 ,
C D 4 4 , C D 4 5 , C D l66 , H L A — D R 单克隆抗 体室温 反
应 30 m in , P B S 洗 涤2次后 , 与 F IT C 或 P E 标 记 的二 抗
避 光作用3 0 m in , 将洗 涤 后 的细 胞 重 悬 于 P B S 中 , 待
测 。
细 胞 体 外 扩增 ”“ : 把新 分 离的人胎盘源性 问充质 干
细 胞 及 入骨 髓 基 质 干 细 胞 分 别接 种 于 含 体积 分数 为
10%胎 牛血 清 的 L . D M E M 培养液 中培养 。 当细 胞 达 到
90%融合 时 , 消化细 胞 并检测 细胞扩 增倍 数和 分化潜
能 。 剩余25 %细胞 重 新接种培养 , 直至 细胞衰老 停止
增殖 。
细胞 分化潜能检测 :
成骨分 化 ”“ ’: 将 以上 人胎盘源性间充质干 细胞和人骨
髓基 质干 细胞 以每孔 1 × 10。个细胞浓度分别接种 于 24
孔培养板 , 进行成骨细胞表型分化测定 。 成骨诱导液使
用含体积分数为 10%胎牛血 清 、 100 nm ol/L 地塞米松 、
10 m m ol,L B 一 磷酸甘油 、 0 . 05 m m oI/L 2一 磷酸 一 L 一 抗坏
血 酸的L . D M E M 培养液中 。 诱导液每周更换2次 , 3周后
去除培养液 , P B S 冲洗 , 体积分数为90% 乙 醇 固定 , V on
K ossa染色检测钙 盐沉积情况 。
成脂肪 分 化 ”“’: 将 以上人胎盘源性问充质干 细胞和人
骨髓 基 质干 细胞 分别接种 于 24 孔培养板进 行成脂肪 诱
导 , 每孔接种细胞数为4 × 1 0。个 。 脂肪细胞诱导液为含
体积分数为10%胎牛血 清 、 0. 05 m m ol/L 异丁基 一 甲基黄
嘌呤 、 200 lJ - m ol/L n~l哚美辛 、 10七 m ol/L 地塞米松 、 10 g/L
胰 岛素的高糖D M E M 培养液 , 每周换液2次 。 2周后用体
积分数为 10% 的甲醛 固定 , 油红 O 染色 。
主要 观 察指标 : ①细 胞形态观察及 生长情况 。 ②细
胞表面抗原分子的表达 。 ③细胞体外增殖特性 。 ④细胞
体外分化潜能 。
设计 、 实施 、 评估者 : 设计为第三 作者 , 实施 为第
一 作者 , 评估为第二 作者 , 均经过系统培训 , 未使用盲
法评估 。
2 结果
2 . 1 两种 细 胞形 态观 察及 生长情况
3710
人胎盘 源性 间充质干 细胞 :
密度梯度离心 法分离的人胎盘 源性 问充质干 细胞 大 多为圆 形 单核
细胞 , 混 有少量红 细胞 。
接种72 h, 培养瓶底约25% 区域 出现贴壁细胞 , 为梭形 , 胞浆丰富,
核染色质深 , 核1_ 明显 , 呈平行排列或漩涡样生长 , 形态类似 成纤
维细胞 。
贴壁细胞约2周接近 80% 一 90%汇 合 , 出现 致密 的贴壁层 , 细胞生长
旺盛 , 增殖迅 速 , 呈 集落方式生长 , 见图1 。
传代细胞 四五 天 可增殖 1倍 , 培养细胞可 稳定生长传代 , 传 至 1 0代
后细 胞 生长速度减慢 。
人骨髓基质干细胞 :
密度梯度离心 法分离的人骨髓基质干细胞大多为圆形 即核细胞 , 混
有红 细 胞数量略多于人胎盘源性 间充质干细胞 。
细胞经 换液与传代纯 化 , 24 h后 出现较多细胞贝占壁 , 贴壁细胞接近
80% - 90%汇 合后 出现 致 密 的贴壁层 。
四五 天 后开 始 以细胞集落方式生长 , 数量增多 , 细 胞 呈长梭形 , 排
列紧密 , 见 图2 。
2. 2 两种 细 胞表面抗原分子的表达 流式细胞仪分析细
胞表面抗原结果表 明 , 实验 中分离扩增 的人胎盘源性间
充质干 细 胞 与人骨髓 基 质干 细 胞都 具有 均 一 的细 胞 表
型 , 表 明细胞纯度较高; 两种细胞均表达C D 29 , C D 4 4 ,
P O . B ox 1200, S henyang 110004 cn . zglckf, com
穆晓红 . 等 。 A 黔盘 s嚣髓源 性 阃充质 干 镪 匏 体外培养及 生物学特性列 眈 W W W . C R T E R . org
C D l66, 不表达 C D 34 , C D 4 5 , H L A - D R , 见 图3 。 2 .4 两种 细 胞体 外分化 潜能 比 较
2 . 3 两种 细 胞 体 外增殖 特性 比 较 在使用含体积 分数
为10%胎牛血 清培养液 、 未添加 生长 因子 的情况下 , 人
胎 盘源 性 问充质干 细胞 与 人骨 髓 基质干 细 胞均在 体外
扩增 10周 以上 , 但人胎盘源 性 问充质干 细胞扩增倍数较
人骨髓基质干 细胞平均高出两三 个数量 级 , 见 图4 。
0 2 4 6 8 10 12
tlw k
F igure 4 G row thcurve ofhum an placenta m esenchym alstem
cells fH P M S C s)versus hum an bone m arrow
m esenchym alstem cells (H B M S C s)
图 4 人胎 盘源 性间充质 干 细 胞和 入骨髓摹质 于细胞 的生 长
曲线 比较
,S S N 1673 — 8225 C N 21 — 15 39/R C O D E N :Z L K H A H
成骨细 胞 表型 分 化 :
人胎盘 源性 间充质干 细胞 和 人 骨髓 基质干 细胞经 过 3周成骨诱导培
养 后 , V on K ossa染 色后 均有钙盐 沉积 。 与人骨 髓 基质干细胞 比较 ,
人胎盘源 性 间充质干细胞钙盐 沉积面积 明 显增加 , 并且 着色 强度增
强 。
提示 两种细 胞都具有成骨 分化潜能 , 但 人胎盘 源性 间充质干 细 胞较
人骨 髓 基 质干 细胞 具有更 强 的成骨 分化 能力 , 见 图5 。 。
脂肪 细 胞 表 型分 化 ;
在脂 肪 诱导条件下培养2周后 , 人胎盘源性 间充质干细胞分化形 成
的脂肪 细胞连接成片 , 胞浆 内形成大的脂肪液滴 : 人骨髓基质 干细
胞亦能够分化为脂肪细胞 , 胞 浆 内有脂肪液滴形 成 , 脂肪液滴相对
较 小 。
表 明两种细 胞都具有成脂 肪分化能力 , 但人胎盘源性 间充质干 细胞
较人骨髓基 质干 细胞具有更强的成脂分化 能力 , 见 图6 。
一懑麟
a:H P M S C s group b:H B M S C s group
F igure 5 A fter3 w eeks ofo~ eogenic jnduction, calcium salt
m ineralization area w as Iarger in the hum an place nta
m esenchym alstem cells (H P M S C s)than in the
hum an bone m arrow m esenchym alstem cells
fH B M S C s). andthe strengthw as greater in the
form erthan in the later(V on K ossa staining, x 200)
图 5 成骨诱导 3 周后 , 人胎盘源性 间充质干 细胞钙盐沉 积
面积 大于人骨髓基质干 细胞 , 且 前音着色强度 也 高于
后 者(Y on K ossa 染 色 , × 200)
◆ 一篡藿 。 :奄 鼍 溥 0
a:H P M S C s group b:H B M S C s group
F igure 6 A fter2 w eeks ofadipogenic induction, a greater
num berofadipocytes w ere found in the hum an
placenta m esenchym alstem cells (H P M S C s)group
than in the hum an bone m arrow m esenchym alstem
cells (H B M S C s)group(O ilred— O staining, x 200)
图 6 成脂肪诱导 2 周 后 , 人胎盘 源性 间充质干 细胞较人骨
髓 基质干 细胞 有 更 多脂 肪细胞 形成 (油红 O 染色 , ×
200)
3711
" w " " " " ” Ⅶ "
2死2 w w w . C R T E R . 0 rg 穆晓红 . 等 。 人骆盘s骨髓源性同充质干 细匏体外培养及 生物学特性对 比
3 讨论
研 究发现 , 胎盘组织 中也存在 问充质干 细胞 陋 。 引 ,
而 且 人胎盘源性 问充质干 细胞具有来源 丰 富 , 增殖 能力
强 , 体内移植引发的免疫排斥反应小 , 并可 以表达多种
造血 相关 因子等优点 。
实验采用密度梯度离心 法分离培养人胎盘源性问充
质干细胞 , 通过 P ercoll分离液(密度1 . 073 g/m L )分离人胎
盘源性 问充质干 细胞 , 以此法可 以获得 比较单 一 的细胞
群 。 从实验 中可 以看出 , 人胎盘源性间充质干细胞具有与
人骨髓基质干 细胞极为相似的细胞形态 , 均呈平行排列或
漩涡样生长 , 形态类似成纤维细胞 。 传代细胞 四五天可增
殖 1倍 , 培养细胞可稳定生长传代 , 人胎盘源性问充质干
细胞扩增倍数较人骨髓基质干 细胞平均高出两三 个数量
级 , 提示胎盘来源 的多能细胞可 能是非常原始的细胞群 ,
比成体干 细胞具有更强的 自我更新和 多系分化能力 。
此外 , 在 一 定 的诱导条件下 , 人胎盘源 性问充质干
细胞可 分化为成骨细胞 、 脂肪细胞 , 诱导体系与人骨髓
基质干 细胞没有 明显差别 , 表 明人胎盘源性 问充质干 细
胞 同样具有广泛 的分化潜能 , 对其分化 的进 一 步探索也
是今后研 究的重 点方 向 。
通 过对 人胎 盘源 性 问充质干 细 胞 的生物学特 性观
察和细胞鉴定 , 提示人胎盘源 性问充质干 细胞与人骨髓
基 质干 细 胞有相 似 的细 胞表 面标 志 , 两种细 胞均 表达
C D 29 , C D 4 4 , C D l66 , 不表达 C D 34 , C D 4 5 , H L A — D R ,
说 明两种细胞 具有相似的生物学特性 。
实验 结果证 明人胎盘源 性 问充质干 细 胞 具 有 与人
骨髓基质干 细胞媲美的生物学特性 , 并且 具有较人骨髓
基 质干细胞更优越 的潜能 , 有可 能作为组织工 程理 想种
子细胞 的重要来源 。
4 参考文献
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来 自本文课题 的更多信息 一
实验 狰舻与 之宣拗 嚣: 胎盘问充质干 细 胞和骨髓 问充质
干 细 胞 的分 离培养方 法 已经 成熟 , 但 如 何 获得合 适 载体 , 如
何使 细 胞 和栽体 充分复合 , 是 目前较 为棘手 问题 , 这 也 是干
细 胞更好 地 应用 于 临床的关键环 节 。
文 章设 计尚合 理 , 人 胎盘问充质干 细 胞与人 骨髓 间 充质
干 细 胞 体 外培 养和 生 物 学特性 的对 比 研 究有 一 定 的学术价
值 , 但人 胎盘 间充质干 细 胞 的增殖速度及 诱导分化 为戍骨细
胞 、 脂肪 细 胞 的能力是否 明显 强 于骨髓 间充质干 细 胞 , 还 有
待于进 一 步的数据 说 明 。
P . O . B ox 1200, S henyang 110004 cn. zglckf, com