应用23SrRNA对禽波氏杆菌分离株的进化分析

应用23SrRNA对禽波氏杆菌分离株的进化 应 用对禽波氏杆菌分离株的进化分析 ,,,,,:, , ，，，，，，，,，谭 燕 玲 朱 瑞 良 马 荣 德 王 慧 魏 凯 王 新 建 郭 文 龙 朱 明 华 山 东 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 山 东 泰 安 ,,:,:,, ,、摘 要 通 过 扩增分离保存的 株 禽 波 氏 杆 菌 株 兔 支 气管败血波氏杆 菌 及 株猪支气管败血波氏杆菌菌株 ,,, , , , ,,，。,的 基 因 的 片 段 分别克隆到载体 利 用 工具进行同源性搜索 用 后 测 序 ,,,,,:, ), ,,,,, ,,,,:,:,,, 分析软件进行同源核苷酸序列的多重比较分析 并 构 建 禽 波氏杆菌菌株的系统生物进化树 。 结 果 显 示 ，,:,,,,,, ，,株禽波氏杆菌核苷酸序列之间同源性为 与 中 收 录 的 株 禽波氏杆菌核苷酸 :,,,:, ,,,,,,, :,:,:,,, ,,,,, ，序 列 同 源 性 为 与兔支气管败血波氏杆菌 和猪支气管败血波氏杆菌的核苷酸序列同源性均为 ,,,,, :,,,,, 。 国内分离的禽波氏杆菌菌株和 支气管败血波氏杆菌菌株均与国外分离菌株在遗传基因上有一 ,,,,, :,,,,, 定 的 差 异 。 结 果 明 ，序列分析可以作为鉴定禽波氏杆菌的一种快速简便的方法 。,,,,,:, 关 键 词 ,禽 波 氏 杆 菌 ,,,核 苷 酸 序 列 ,基 因 分 析,,,,,:,,,, ,,,,,中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 文 章 编 号 ,,,,,:,,:,:,,,:,,,,,,,,,,::,))) ,,:,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,:,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,,, ,, , ，，，，，，,,: ,,,,,,:,, ,,,,,,,,, ,:,,,,,:, ,,,,,,,,,,,:, ,,,,,,,,: ,,,),),,)),) ，,，,:,:,, ,,,,,, ,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,),, ,,,,) ，，，,’,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,:,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,:,:,,:,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,:, ,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,:,,,,,,:,,,,, ,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,:, ,,,,,:,,,,,,:,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,) ,,,:,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,:,,,,, ,,,,,,,,,,:,,:,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,, ,,,,,,:,,,,,,: ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,:,:,:,,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,, :,,,,,,),,,,,,,,,,,:,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,, ,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,,, ,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,, ,,,,,,,,,, ， ,,,:, ,,,,,,,,,),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,:,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,， ,,,,:,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,, :,,,)),, ,,,,,,,,,, ,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,, , ,,,,,,,,,,,,,,,,), ,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,, ,,, ,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,:,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,, ,,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,:,,,,:,,,,,,,,:, , ,, ，，,据 报 道 该 病在不同地区的感染率为 禽 波 氏 杆 菌 病 是 由 禽 波 氏 杆 菌 ,:, ,:,,:,,,,,,,,: ，,。，，引 起 的 一 种 高 度接触性传染病 患 病 鸡 群 生 长 迟 缓 饲 料 报 酬 低 给 养 鸡 业 造 成 了 ,,,,, ,,,,,,, 较 年 加 拿 大科学家首次报道由波 氏 杆 菌 属 的 细 ,,,:,,,,) ,,,。,大 的 经 济 损 失,,),。 菌 引 起 的 火 鸡 鼻 炎我国最早是由 朱 瑞良等 、传 统 的 病 原 菌 检 测 方 法 如 细 菌 培 养 形 态 学 观 ，在 年 初 分 离 获 得 的 该 菌 主 要 引 起 禽 的 胚 胎 死 ,,,:、。 察 生 化 鉴 定 等 费 时 费 力 近年来发展起来的聚合 、亡 孵 化 率 降 低 和 雏 禽 急 性 死 亡 及 成 年 鸡 的 眼 炎 ,,，酶 链 式 反 应 和 碱 基 序 列 测 定 技 术 在 ,,,,:, 。等 收 稿 日 期 , :,,,,:,:、。 ))细 菌 的 分 类 和 鉴 定 方 面 更 加 快 速 准 确 在 细 菌 ,,，，基 金 项 目 国家自然科学基金资助项目 ,:,:,,,,,:,::,,,的 ,,,,山东省自然科学基金资助项目 ,::,::::,,::,,:,，，进 化 过 程 中 基 因 的 进 化 相 对 保 守 被 认 为 ,,:, ,,,，，。作 者 简 介 谭 燕 玲 女 在 读 研 究 生 ,,,,)，是 衡 量 生 命 进 化 历 史 最 理 想 的 标 尺 其 ,,,,,:, 通 讯 作 者 , 的 ,,):,，，显 特 别 是 亲 缘 关 系 近 的 种 系的 可 变 区 内 多 态 性 购 自 大 连 宝 生 物 工 程 公 司 细 菌 提 取 试 剂 ,:, 、,,盒 ,，。 位 点 较 多 不 同 细 菌 间 差 异 相 对 较 大研 究 表 ,、、、反 应 所 用 试 剂 ,,, ,,,,,, ,:,, ,:,,,×,,, ， 明 ,，均 购 自 北 京 全 式 金 公 司 胶 回 收 试 剂 盒 购 ,,,,,, ,,自 , ，其 在细 菌鉴别诊断中的优越 性 高于 ,,,,,:,。,,,:,,: 。 更 适 合 临 床 常 见 致 病 微 生 物 的 鉴 别 诊 断 本 试 验 拟基 因 引 物 的 设 计 与 合 成 用 ,,, ,,,,,:, ,,, 选 取 禽 波 氏 杆 菌 基 因 的 部 分 序 列 进 行软 件 对 已发表的禽波氏杆菌的 ,,,,,:, ,:,,,,,,,,,,,, ，，，扩 增 比 较 波 氏 杆 菌 种 属 间 的 差 异 用 于 禽 基 因 序 列 进 行 比 对 用 从,,,,,:, ,,,,,,,,,: ,,, 波 。基 因序列的相对 保 守 区 设 计 对 引 物 扩 氏 杆 菌 的 鉴 别 诊 断 ,,,,,:, , 材 料 与 方 法 ,，增 其 多 变 区 通 过 比 对 扩 增 的 基 因 序 ,,, ,:, 列 ,,, ,,、菌 株 株 禽 波 氏 杆 菌 株 兔 支 气 , ,,,,:, ) 。 的 差 异 确 定 细 菌 的 亲 缘 关 系 ,,管 败 血 波 氏 杆 菌 均 为 山 东 农 业 大 学 预 防 ,,,,,,),上 游 引 物 ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,′)，兽 医系 实验室分离鉴定并保存 株 猪 支 气 管 败 血 , ,,,下 游 引 物 ,,,,,,,,,,,,,,,′′) ):),,,波 氏 杆 菌 为 哈 尔 滨 兽 医 研 究 所 馈 赠 表 ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,′) ):,，, ,，由 南 京 金 ，斯 瑞 科 技 有 限 公 司 合 成 预 期 扩 增 的 ,。为 本 院 传 染 病 实 验 室 惠 赠 、、工具酶与主要试 剂 均,,,:,,,,,,,, α,,,,,,,:,,,,,)??。小 为 片 段 大 :,:,,:, , 表 波氏杆菌菌株的来源及其分离时间 , 编 号 菌 株 器 官 地 点 年 份 ’ ,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,’,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,, , ,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,, ,’,, ,, ,: ,::: ,,,,,,, ,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,,:,,,,,,,, ,, ,::, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,, ,,,,,,,, ’,,,,,,: ,,,, ,,,,,,, ,,,,,:,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,::, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,::, :,,,,,, , , ,,, ,::, :,,: ,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ，反 应 及 产 物 纯 化 取 过 夜 培 养 的 菌 和 双 酶 切 鉴 定 产 物 用 琼 脂 糖 电 泳 检 ,,, ,,, ,:?,,,:,,, ? ，。液 按 照 试 剂 盒 说 明 书 提 取 细 菌 基 因 组 ,:,,,, 。测 鉴 定 的 阳性 克隆 由南京金斯瑞科技有限 公 司 测 ,, ，、反 应 体 系 为 即 ,,,,,,: ,,,,,,,,。序 μμ 、、、,,: , ,:×,,,,,,,,,, ,:,,,,:,μμμ 序 列 同 源 性 比 较 及 系 统 进 化 树 构 建 将 上 述 ,,, 、、上 下 游 引 物 各 模 板 酶 ,,:,,,:,:,,μμμ、、株 禽 波 氏 杆 菌 株兔支气管败血波氏杆菌 株 ,, , 。,，反 应 条 件 为 预 变 性 然 后 进 入 ,,,, ,,? , ,,,,猪 支 气 管 败 血 波 氏 杆 菌 与 中 收 录 的 ,,,,,,, :,、，变 性 退 火 和 延 伸 ,,? ,: ,,,,,?,:,:,? ,,,,,株 禽 波 氏 杆 菌 美 国 发 表 通 过 分 :,:,,,,:,,,,,，。 个 循 环 最 后 延 伸 取 产 物 ,: :,?,: ,,,,,, ,，析 软 件 进 行 序 列 同 源 性 比 较 并 绘 制 系 统 进 化 发 ，于 ,:,,, μ，。树 同 时 测 定 其 含 量 生 ,,, ，琼 脂 糖 凝 胶 上 电 泳 在 自 动 凝 胶 成 像 仪 上 检 测 结 ， 果 结 果 , 。剩 余 产 物 于 保 存 反 应 产 物 的 纯 化 根 据 胶 ),:?连 接 转 化 与 测 序 回 收 的 产 物 连 接 于 ,,,,,, 不 同 菌 株 的 扩 增 结 果 株 禽 波 氏 ,,, ,,, , 回 。收 试 剂 盒 的 操 作 说 明 进 行 ，上 并 转 化 到 感 受 态 细 ,,,,, ,,,,:,,,,,)α 杆 胞 、、菌 株 兔 支 气 管 败 血 波 氏 杆 菌 株 猪 支 气 管 败 ,, ，。 中 同 时 设 立 阴性空载体和阳性 质 粒对照 在 含 有 血 波 氏 杆 菌 的 产 物 在 琼 脂 糖 凝 胶 电 ,,, :,,, ,,,氨 苄 青 霉 素 抗 性 的 平 板 培 养 基 上 培 ,:: ,,,泳 中 ,,，均 显 示 约 条 带图 与 预 期 的 片 段 :,:,,,， 。养 挑 取 阳 性 克 隆 菌 落 提取质粒经 鉴定及 ,,, ,,，。大 小 相 符 而 阴 性 对 照 则 没 有 特 异 性 条 带 出 现 图 扩 增 株 波 氏 杆 菌的 电 泳 结 果 , ,,, ,,,,,:, ,,,, 图 株波氏杆菌的阳性克隆质粒 的酶切鉴定结果 ,, ,,, ,,,,阳 性 对 照 水 ,,,:::,,,,,:, ,,,,,,,,,,,,, :,,, ,,,:::,,,, ,:, ,,,,,,,,,,,,:,,,,,)::,,,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,:,:::) ,,,,, ,,,:,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,, ,, ,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,目 的 克 隆 鉴 定 挑 取 重 组 质 粒 单 菌 落 扩 ,,, ,:, ,株 禽 波 氏 杆 菌 核 苷 酸 序 列 同 源 性 为:,:,:,,, ，菌 并 提 取 质 粒 用 引物对所提取的 ,:,,,,,,:, ， ，。 与 兔 支 气 管 败 血 波 氏 杆 菌 和 猪 支重 组 质 粒 进 行 鉴 定 可 扩 增 出 目 的 条 带 重 组 ,,,,, ,,,,,,,, : ，气 管 败 血 波 氏 杆 菌 的 核 苷 酸 序 列 同 源 性 均 为 质 粒 用 和 双 酶 切 可 得 到 约 ,,,:,,,,,:::,??, ,,,,。。,,。图系 统 发 育 进 化 树 见 图和 个 片 段图 ,, ,,,,,,,,,,:,:,,,:), ,中 收 录 的 株 禽 波 氏 杆 菌 含 ,,,,:,:,:,,, ,,, 禽 波 氏 杆 菌 序 列 分 析 与 系 统 发 育 ,,, ,,,,,:, ，量 为 本 实验室波氏杆菌分离株其 ,,,:,,,,, 分经 比 较 上 述 株 禽 波 氏 杆 菌 核 苷 酸 序 列 之 间 析 , 同 。含 量 经 测 定 在 之 间 ,,,:,,,,,,,,:，源 性 为与 中 收 录 的 ,,,,, ,,,:, ,,,,,,,: ,,,中 参 考 株 图 株禽波氏杆菌核苷酸序列 同 源 性 :,:,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ::,,,:,,:,,,,,,,,,,:,:,, ,, ) ,,,。中 参 考 株 下 同 ,,,,,,,, ,,,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,, 图 株 波 氏 杆 菌 核苷酸的系统进化树 , ,, ,,,,,:, ，用的序列分析方法 检 测 禽 波 氏 杆 菌相 对 ,,,,,:, 讨 论 ,、，于其他方法更 具 有 快 速简 便 的 特 点从 而 为 禽 波 氏 ,,、。杆菌病的流行病学调查快速诊断提供了技术保证 ,,，在 构 建 基 因 序 列 有 个 高 变 区,,,,,:, , 菌 株 系 统 进 化 树 及 鉴 定 环 境 和 临 床 病 例 中 的 细 菌 有 ,参 考 文 献 ,,,,,,,,，重 要 作 用但 等在 研 究 细 菌 ,,,,,,,,:, ,,,，，， ,,,,,:,, ,,,:,,,,,,,,,,,,,, , ,,,,,,,,,,,,,:,，基 因 进 化 时 发 现 对某些属的细 菌 不 易达到 鉴别至 ,,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,) 。种 和 血 清 型 的 水 平 是 细 菌 中 进 化 相 对 ,,,,,:, ,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,:,:,,,, ,,, ，，,,,,,,,,,:,,,,,,,,,，，) 保 守 的 基 因 其 变 异 性 高 于 该 特 点 使 其 ,,,,,:, 朱 瑞 良 ，张 绍 学 ，唐 珂 心 ，等 鸡波氏杆菌病 的 研 究 初 ,，在 细 菌 鉴 定 诊 断 上有一定优越性 更适合临床常见 ,, , 报,,,,。致 病 微 生 物 的 鉴 别 诊 断 ,,，，,,,山东农业大学学报 :,,,,,,,,,,),,,,, ， ,细 菌 全 长 片 段 中 有 个 保 守 序 列 ,,,,,:, ,,朱 瑞 良 ，牛 钟 相 ，张 绍 学 ，等 病鸡眼中禽波 氏 杆 菌 的 分 ,，其 间 分 布 有 多 个 高 度 变 异 区 在 保 守 区 和 部 分 变 异 ,,，，,,,离 与 鉴 定 中 国 兽 医 科 技 :,,,,,,,,,,),,,,, ,“”，区 内 存 在 大 量 马 赛 克 变 异 序 列 高度保守的周 东 顺 ，朱 瑞 良 我国部分地区禽波氏杆菌 病 的 血 清 学 ,,,,,。基因 序 列 并 不 多本 试 验 综 合 考 虑 扩 增 片 段 长 ,,，，,,,调 查 中 国 兽 医 科 技 :,,::,,,,,,),,,,, ,，，基 组 成 及 退 火 温 度 等 因 素 设 计 了 对 引 物 、庄 国 宏 ，朱 国 强 ，周 继 红 ，等 禽波氏杆菌病 病 原 性 的 研 度 碱 ,, ,,，,,,究 中国畜禽传染病 :,,,,,,:,):,,结 果 表 ，明 株 波 氏 杆 菌 均 能 扩 增 出 约 的 ,, :,:,, ,, ,董 关 萍 基因在临床诊断细菌性感染中的 ,,,,,,:, 扩 增 的 株 禽 波 氏 杆 菌 基因片段。 片 段 ,,,,,,:, 应 用 ,,国外医学流行 病 学 ,传 染 病 学 分 册 ，，:,,::,, ，的核苷 酸 序 列 同 源 性 最 高 可 达 表 明 分 离 到 ,,,:,,,, ,,,:,,:,,),, ，， :,,,:,, ,,,:,,,:,,,,,, , ,,,,,,,,,,:,,,,,,。的 禽 波 氏 杆 菌 的 同 源 性 较 高 该 株 禽 波 氏 杆 菌 核 ,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,:,:,,, ,,,苷 酸 序 列 与 中 收 录 的 株 禽 波 ,,,,,,,:,:,:,,, ,:,,:,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,:,,:,,:,,,,,:,,,, ,,,,氏 杆 菌 ,,，，,，核 苷 酸 序 列 之 间 同 源 性 为 ,,,:,:,,,, ,,,,:,,:,,:::,,:,,:,,,,) ,,,,, ,,,,,: 、支 气 管 败 血 波 氏 杆 菌 株 猪 支 气 管 败 血 波 株 兔 , , ,,，，， 林 东 昉 徐 晓 刚 朱 德 妹 等 基 因 在 常 见 病 ,,,,,,,:, 原 菌 鉴 定 中 的 应 用 ,,中华检验医学杂志 ，，,氏 杆 菌 与 收 录 的 株 同 源 性 为 :,,::,,, ,,,,,,,:,::,,,:, ,,,,,:, ,:,,,,) ，,,,,,,, ,,,,,,,,,, , ,,:,, ,,:,,,,,,:,,,,,,,, ，表 明 国 内分离的禽波 氏 杆 菌菌株 和支气 ,,,,,:,, ,,,,,,,,,,,,,,,,:, :, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,:, ,, )管 败 血 波 氏 杆 菌 菌 株 均 与 国 外 分 离 菌 株 在 遗 传 基 ,,，，,,,,,,,,:,:,,,,,:,,:,:,,,,,,,,,,,,,,,) ，、因 上 有 一 定 的 差 异 这 可 能 与 地 域 气 候 的 影 响 而 ，，， 刘 红 芹 朱 瑞 良 胡 晓 娜 等 禽波氏杆菌分离株的 ,,, ,:。 ，基 因 的 差 异 有 关 但 其 含 量 较 接 近 说 造 成 ,,, 基 因 序 列 分 析 ,,中 国 兽 医 学 报 ，，,,,,,:, :,,::,,, ,,,,,,,,,明 波 ) 氏 杆 菌 在 进 化 过 程 中 虽 然 由 上 述 因 素 造 成 核 ，明 显 突 变 但 是 含 量 仍 可 以 作 为 一 种 苷 酸 的 ,,, ,, ，，， ,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,)鉴 定 波 ,,,,,,,:,,,,,,,:,:,,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,, ,氏 杆 菌 的 手 段 与 兔支气管败血 波 氏 杆菌和 ,,, ,,,,,:,,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,:,: ,,,,:,,:,:,,,, ,,,,,猪支气 管 败 血 波 氏 杆 菌的核苷酸序列 同 源 性 为 ,，，,,,,:,,,:::,,,,:,,,,) ,,,, : ,,， ,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,,，,,,表 明 国 内 分离的禽波氏 杆 菌 株与波 氏杆菌 ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,:,:,,,,,,,,,,,,:,:,,,,),) 。属 的 其 他 波 氏 杆 菌 序 列 间 存 在 差 异 ，，,，:,,:,:,,,,,,,,:,,,::,,:,:,,,,, ,,,,:,,,,), ,， 禽 波 氏 杆 菌 在 自 然 界 广 泛 存 在 可 以 通 过 消 化:,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,, ,,,,、，道 呼 吸 道 等 途 径 传 播该 病 在我国部分地区已 ,,,,,,,,:,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,:,,,,,,) ,, ,,,,,,,,,:,,:,,,,,:, ,,,, ,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,，。 经 普 遍 存 在 平 均 阳 性 率 为 近 年 来 禽 波 ,,,,:,,,，,,,:,,,,,:,,,,,:,,:,:,,, ，氏 杆 菌 感 染 在 我 国不同地区呈上升趋势 该 病 已 成 ，, ,:::,,,,,,,,,,,,),),为 危 害 我 国 养 禽 业 的 一 种 新 的 细 菌 性 传 染 病 ,,。 ，，，、,,李 鹏 马 艳 娇 赵 云 等 及 ,,,,,,:,,,,,,:, ,,,,,,,,,:、杨 春 晓 等胡 晓 娜 等提取 了 禽波氏杆菌外膜蛋 基因在细菌分离 与鉴定中的应用 ,,,,,,,,:, : ,,，，白并证实其有良 好 的 免疫原 性 制 备 了 兔 ,,，,,,现 代 畜 牧 兽 医 :,,:,,::,:,,,,,) ，抗 禽 波 氏 杆 菌 高 免 血 清 建立了快速检测禽 ,,:,, 下 转 页 ,:,波 氏 杆 菌 病 原或抗体的间接 和 间 接 免 疫 荧 ,,,,, ,:,,,,,,,,,,:,:,,,,,,,,,,,,,,,,,:, ,,,,,,,,,,,具 备 不 要 求 模 板 序 列 已 知 而 直 ,,,,,,, ,,,, )，:,,:,,,, ,:, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,) ，接 进 行 扩 增 的 优 点 因 此 更 适 合 嗜 水 ,,,,,,, )，,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,。气 单 胞 菌 的 快 速 分 型 ,,，， ,:,,,,,,,,,,,,,, ,,, :,,,,, ,,,,:,,:,,::,, ,参 考 文 献 , ,,,,:,,,,) ，，:,,,, :,,,,,: ,,,,,:, , ,,,,,,,,,,,,,,,:,:, , ,, :，，，,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, , :,,,,,, , ,,, ,,,,,,,:,:,,, ,,:,:,,,,,, ,,,,,,,,:, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,:,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,:,,::,), :,,,,,,) :,,:,,,,,:,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,:, ,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:, ,,,，，,,,:, ) , ,,,,,,,:,:,,,,,,,,,,:,,,,,,:,:,,,,,,,，,,,) ,,,,,,,,,,,,::,:,,,,，，:,,:,,,,,,,,,,,,, , ,,,,,, , :,,,,,,,:, ,,,，，，,, ,,,: ,,,,: :,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,:,:, ,,,,,,,,,,,,,,,) ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 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