分子实验室、细胞实验室常用配方

分子实验室、细胞实验室常用配方终浓度分子量称取Tris-HCI(pH7.4)50mM121.14605.7mgNaCI150mM58.44876.6mgTritonX-1001%1mI脱氧胆酸钠1%1gEDTA1mM292.24829.2248mgSDS0.1%0.1gPMSF(100mM)使用时每1ml加10ulWEJ目关试剂及常用缓冲液BRIPA(100mI)(最后要调pH为7.4)10姐硫酸铉溶液AP（分装保存于-20度）TOC\o"1-5"\h\zAP粉末1gddH010ml210%SDS（十二烷基硫酸钠）：SD晰末10gddH0定容到100ml注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡6X蛋白质samplebufferTris-HCl(1M,pH6.8)10g油9.3g蓝30mLSDS甘30mLDTT(154.25)漠酚0.06gddH02容至100mL10XPB噬冲液的配制：NaCl80gKCl2gNa14.4g(十二水合HPO4236g)KHPO02.4g加800mLddHO,根据开始的pH用NaOKHCL调2pH到7.4,调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度PBST(1X)PBS(1X)Tween20500ml500曰242g57.1ml37.2g1L5g0.02g(现定容到50xTris-乙酸（TAB缓冲液配制1L溶液各成分的用量Tris粉末冰醋酸NaEDTA2HO22ddH0定容到2封闭液脱脂奶粉叠氮钠配现用时可不加）PBS100mL染色液（室温）1L500ml200ml100ml甲醇500mL25010050乙酸100mL502010R250考马斯亮蓝0.5g0.250.1g0.05ggH02400mL2008040脱色液：（室温）甲醇乙酸H026.8Buffer:（调pH至6.8,4度保存）100ml200mlTris6.06g12.12g10%SDS4mL8mlddH02定容至100mL200ml165mL50mL785mL8.8Buffer:（调pH至8.8,4度保存）100mlTris18.17g10%SDS4mL200ml36.34g8mlddH02定容至200ml100mL转移缓冲液（10xtransbuffer）:（常温保存）1L2L甘氨酸144g288gTris粉末30.3g60.6ddH02定容至1L定容至2L使用时甲醇200mL转移缓冲液（10X）100mLddH0700mL2电泳缓冲液（10x）（runningbuffer）:（常温保存）1L2L甘氨酸144g288gTris粉末30.3g60.6SDS10g20gddH02定容至1L定容至2L10X)TBS:（常温保存）NaCl80.0gTris粉末24.2gddH0定容至1L2TBST(1X)TBS(1X)500mlTween20500诉1Strippingbuffer(可反复利用)温老师组配10%SDS10mlB-筑基乙醇350lTris-HCI(pH6.8)6.25ml(6.06力口到50mL水）加入ddHO2至50mLStrippingbuffer(可反复利用）郭老师给配方甘氨酸15gSDS1gTween201mlddddHO1L2作这个buffer洗20min,然后用PBS蹴3次,再重新封闭孵抗体。（二）细胞和细菌培养基、抗生素LB培养基（当天灭菌后放4度存放）1000ml500ml300ml:250ml200ml氯化钠10g5g3g2.5g2g蛋白豚10g5g3g2.5g2g酵母提取物5g2.5g1.5g1.25g1gddH02定容至1000ml定容至500ml定容至300ml定容至250ml定容至200mlLB平板：（当天灭菌后倒平板，放4度存放）1000ml500ml300ml250ml200ml氯化10g5g3g2.5g2g钠蛋白腺10g5g3g2.5g2g酵母提取物5g2.5g1.5g1.25g1g琼脂15g7.5g4.5g3.725g3gddH02定容至1000ml定容至500ml定容至300ml定容至250ml定容至200mlSOE^F养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白月东20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压火菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁割废.押播I:-D-半MJ(分子吊.(202皿滤器咽照余菌，分装成年m徵棚咨Amp+(50mg/ml)Amp^末.50mgWife分装保存,乏0度，使洲按1000：1的比例用Kana+(50mg/ml)H高角分装保存倒2堂M用时黝000：1的胰酶：抽滤，长期保存可放负20度粉末0.25gEDTA0.02-0.03g1XPBS100ml高糖DME瞄养基：抽滤保存在4度粉末全部碳酸氢钠3.7gddH0定容到1L(用盐酸2调pH值到:7.2-7.4)G418母液（100mg/ml）存于-20度粉末1gPBS10ml用0.22M滤菌，分装zeocin母液（100mg/ml）用0.22M滤菌，分装存于-20度粉末1gddH2O10mlBlasticidin（100mg/ml）用0.22M滤菌，分装存于-20度粉末0.3gPBS10ml（三）利用His-tag从细菌中纯化蛋日配方透析液配方终浓度母液浓度里取体积Tris-HCl(pH:8.0)20mM1M20mlNaCl20mM4M5mlMnC22mM1M2mliviglDTT1mM1M1ml甘油50%500mlddHOml2472ml超声裂解液(lysisbuffer):2011年做蛋白纯化时用NaPO(164)8.2g(50mM34NaCl(58.5)17.55g(300mM加800mLddHO溶解，用2MNaOHK者22MHCL调pH到8.0,再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存。洗涤液(washbuffer):2011年做蛋白纯化时用Na8.2g(50mMPO43NaCl17.55g(300mM咪哇溶解0.681g(10mM加800mLddHO，根据开始的pH用2MNaO成2者2MHCL调pH到8.0,调好pH再定容到1洗脱液(elutionbuffer):2011年做蛋白纯化时用14Na8.2g(50mMPO43NaCl17.55g(300mM咪哇17.025g(250mM溶解加800mLddHO，根据开始的pH用2MNaOH或者2MHCL调pH到8.0,调好pH再定容到1升)PrepEase?Histidine-TaggedProteinPuri?cationKits-HighSpeci?city8XLEWBuffer(Lysis-Equilibrium-WashBuffer):(室温保存)pH:8.0NaHPO.2HO6.2404g(400mM242NaCl14.0256g(2.4M)dH0定容到100mL2(调节pH:8.0)4XElutionBuffer:(室温保存)pH:8.0NaHPO.2HO3.1202g242NaC咪口坐(200mMl7.0128g(1.2M)6.81g(1MEDTA:(100mM2.923g定容到100mLEDTAdH02NiSO:4(100mMNiSO4dH0.6HO2定容到2.6285g100mL溶菌酶：2（使用时1ml溶液加入20ul）粉末50mgdH02(调节pH:8.0)定容到100mLddH201mL（四）利用His-tag从细胞中富集蛋白配方磷酸钠缓冲液按图示比例混合0.2MNaHP潴液和0.22.,4、MNaHPO浴敝，得到两种缓冲侬，p盼别调节成24为8.0和6.3.pH0.2MNaHPO积24/mL0.2MNaHPO体积24/mL6.311.2538.758.047.35T-f、、-.It,>—t灯▲U2.65细胞裂解液（最好新鲜配制，当天使用）Celllysisbuffer终浓度配10ml配15ml配20ml配40ml配30ml盐酸瓠65.738.5911.422.917.1(g)M1877636272954Tris(g)10mM0.0121140.0181710.0242280.0484560.036342pH8.0buffer(ml)100mM57.5102015（注意肌盐是有害试剂注意这里用的磷酸钠缓冲液p肥须8.0!）（注意二价阳离子螯合剂，还原剂，会导致镣从树脂上的洗脱）本实验的所有试剂中EDT麻度不得超过1mM,DTT度不超过5mM琉基乙醇浓度不超过20mMpH8.0的洗脱溶液（最好新鲜配制，当天使用）pH8.0的washbuffer终浓度配100ml配50mlr配「20ml「配:40ml「配］30mlUrea尿素(g)8M48.04824.0249.609619.219214.4144Tris(g)10mM0.10.00.020.040.0321146057422884566342pH8.0NaPO34buffer(ml)—TritonX-100(ul)100mM0.1%(vol/vol)5mM502510201510050204030b-mercaptoethanol.筑基乙醇(ul)pH6.3washbuffer(pH6.3的wash3517.1410.5终浓度100ml现配现J配50m配30m)pH6.3的washbufferUrea尿素(g)8M48.048Tris(g)100.124.0240.014.4140.0bufferUrea尿素(g)Tris(g)mM2114605736342pH6.3NaPObuffer(ml4)100mM502515pH6.3Na3PO4buffer(ml)TritonX-100(ul)0.1%(vol/vol)1005030TritonX-100(ul)注意使用pH为6.3的磷酸缓冲液，而且pH不得低于6,pH要精确配制，非常重要！Histidine的质子化，会导致镣树脂上的解离，所以要精确测定pH,并且以pH试纸校对，而不是仅仅依靠pH仪器。洗脱溶液200mMImidazole咪哇，5%(wt/vol)SDS,150mMTris-HCl(pH6.7)30%(vol/vol)丙三醇720mM筑基乙醇0.0025%(wt/vol)漠酚蓝注意wt/vol是质量/体积之比例，而vol/vol是体积：体积的比例。4.805g0.4g0.098g（现(五)双向电泳溶液配制水化上样缓冲液(I):尿素(8M)CHAPS(4%)DTT(65mM)加)Bio-Lyte0.2%(w/v)501(40%现加）漠酚蓝0.001%101（1%漠酚蓝）MilliQ水定容到10mI,分装成10小管，-20度冰箱保存上样缓冲液（II）:尿素(7M)4.2g硫月尿(2M)1.52gCHAPS(4%)50I（40%现加）10I（1%漠酚蓝）定容到10mI,分0.4gDTT(65mM)0.098g(现加)Bio-Lyte0.2%(w/v)漠酚蓝0.001%MilliQ水装成10小管，-20度冰箱保存上样缓冲液（III）3g1.52g0.2g0.2g0.098g(现加)50I(40%现加)尿素(5M)硫月尿(2M)CHAPS(2%)SB3-10(2%)DTT(65mM)Bio-Lyte0.2%(w/v)漠酚蓝0.001%101(1%漠酚蓝)MilliQ水定容到10mI,分装成10小管，-20度冰箱保存平衡缓冲液母液36g2g尿素(6M)25mI(1.5M)20mI定容到100mI,分SDS(2%)Tris-HCI(pH8.8)0.375M甘油(20%)MilliQ水装10管，-20度保存胶条平衡缓冲液I(充分混匀，用时现配)胶条平衡缓冲液母液10mIDTT0.2g胶条平衡缓冲液III(充分混匀，用时现配)胶条平衡缓冲母液碘乙酰胺低熔点琼脂糖封闭液低熔点琼脂糖0.5%Tris(25mM)甘氨酸(192mM)SDS(0.1%)漠酚蓝(0.001%)10mI0.25g0.5g0.303g1.44g1mI(10%SDS)100I(1%漠酚蓝）MilliQ水定容到100mI,加热溶解至澄清，室温保存（六）同位素实验相关试剂BERreactionbuffer（10ml,分装于-20度）分于量配10ml母液称取终浓度Hepes-KOH(pH7.8)238.311M称2.3831g0.4mI40mMKCI74.551.4M称1.0437g0.5mI70mMDTT154.251M称1.5425g10I1mMEDTA・2Na372.231M称3.7223g5I0.5mMMgCI26H2O203.301.4M称2.8462g50I7mMATP100mM0.2mI2mMddH2O8.835mI2XligaseIactivitybuffer终浓度母液配10ml取Hepes(pH7.5)(50mM1M0.6mlKCl60mM1M0.6mlMgCI-6HO16mM1M0.16mlDTT2mM1M0.02mlBSA200g/ml2mgddHO2至10ml2XAnnealingbufferTris-NaCIHCI(pH7.5-8.0)20mM100mMEDTA2mM2X同位素反应buffer(polymerasebeta聚合反应)终浓度母液10mlTris-HCl100mM(pH8.0)1M1mlMgCI•6HO2220mM1M0.2mlDTT4mM1M0.04mlNaCl40mM4M0.4ml甘油20%2mlddHO2至10ml2XAPE1活力鉴定buffer终浓度母液配10mlTrls-HCL(pH8.0)100mM1M1mlKCl60mM1M0.6mlMgCl2・6H2C10mM1M0.1ml甘油20%2mlddHO2至10ml同位素电泳上样buffer(2X)(100ml)终浓度取甲酰胺染料90%90mlEDTANa230mM111.669gX-210澳酚蓝（17kd）002%1002a•TiiLy■■）\J.Wk/nnoo/u.u=g..u=g10XTBEbufferTris0.89M26.945g硼酸（pH8.3）0.89M13.757gNa2EDTA20mM1.86115g15%DenaturedDNAPAGEgel（100ml）10TOC\o"1-5"\h\zXTBE15ml40%,19:1gelstock37.5mlddH2O16mlUrea48g存放在4度，使用前加200l10%AP和20lTEMED20%DenaturedDNAPAGEgel10XTBE15ml40%,19:1gelstock50mlddH2O3.5mlUrea（尿素）48g存放于4度，使用前取35ml混合液加140l10%A前140lTEMED硼氢化钠(1M37.83粉末0.7566gddHO10ml22XdRPbuffer(分装保存于负20度)分子重母液终浓度配10mlHepes(pH7.5):238.311M100mM1mlMgCl2・6HO203.301M20mM0.2mlKCl74.551M40mM0.4mlDTT154.251M4mM0.04mlddHO28.36mlDNAbindingbuffer终浓度母液分子量配250mlTris-HCI(pH8.0)50mM1M12.5NaCl100mM158.31.4625gMgCl-6HO2210mM203.3().51gGlycerol10%25mlNP-400.1%0.25ml(七)酶切打质谱相关配方TOC\o"1-5"\h\zNHHCO(79.06)100mM粉末0.7906gddHO定容到100ml,pH7.8-8.02DTT(154.25g)100mM粉末0.01542gddHO1ml2IAA(碘乙酰胺，184.96)200mM粉末0.036992gddHO1ml2（八）其他配方2XHEPES-缓冲液(潘老师给的配方做细胞转染，需要调pH为7.05,用0.22M滤菌，分装存于-20度)。分子重终浓度称取NaCI58.5280mM1.6gKCI74.5510mM0.074gNa2HPO4141.961.5mM0.021g匍伺糖180.0612mM0.21gHEPES238.3150mM1.19gddH02定容到80mlCaCI2•2H2O(2M)潘老师给的配147.02方做细胞转染粉末5.88gddHO20ml20.22m滤菌，分装存于-20度5XTBS(1L体系)(在利用flagtag带磁珠的抗体富集蛋白时用)Tris-HCI(250mM)30.275gNaCI(750mM)43.875gddH0定容至1L2(调节pH为7.4)MMS甲磺酸甲酯(Sigma密度为1.3g/mI,M=110.13)1M体系：液体85IddH23915IHochest母液：1mg/ml,避光存于-20度工作液：母液按1:1000稀释TritonX-100(0.2%)TritonX-1002lddH2O1ml2XHDMbuffe(II)曾用于LSD1去甲基化终浓度母液配10ml取Tris(pH8.5)10i0mM1M1mlKCl100mM1M1mlMgCI2・6H2。10mM1M0.1mlBSA!i1%0.1g甘油5%1mlddH2O6.9ml100mmol/LPMSF苯甲基磺酰氟）：分成贮存于-20C。PMS新末1.742g异丙醇/甲醇定容到10ml【注意】PMSIT重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF应立即用大景水冲洗之。凡被PMSF亏染的衣物应予丢弃。5mol/L氯化钠（NaCl）:氯化钠29.2gddH0定容到100ml22.5%X—gal（5-漠-4-氯-3-口引噪一［3-半学L糖昔）:X-gal25mg二甲基甲酰胺（DMF1ml注意：用铝箔包裹装液管，贮存-20C。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC勺体积分数为0.1%。在37C温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEP（^活。DEP会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。1mol/LCaCl2溶液在200ml蒸储水中溶解54gCaCl2?6H^,用0.22jim滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20C2.5mol/LCaCl2溶液在20ml蒸储水中溶解13.5gCaCl?6Hp用0.22lim滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20C。pH校准液通常称为标液，现在你买仪器一般厂家都会标配三小瓶粉末：邻苯二甲酸氢钾（pH=4.003）,混合磷酸盐（pH=6.864）,硼砂（pH=9.182）这需要你把它稀释，一瓶只能兑250毫升（250C）的纯净水，兑好后摇一摇直到充分溶解（三瓶要分三个瓶子装哦）NaOH（2M）8gNaOH粉末定容到100mLHCL（2M）10mL11MHCL>液定容到110mL（一）W府目关试剂常用缓冲液（1-3页）及（二）细胞和细菌培养基、抗生素（4-5页）（三）利用His-tag从细菌中纯化蛋白配方（6-7页）（四）利用His-tag从细胞中富集蛋白配方（8-9页）（五）双向电泳溶液配制（10页）（六）同位素实验相关试剂（11-13页）（七）酶切打质谱相关配方（14页）（八）其他配方（14-16页）