第08章_维生素类药物的分析nullnull第八章维生素类药物的分析null概述维生素:
是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。
人体不能合成维生素。null VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPPnull-H 维生素A醇
-COCH3 维生素A醋酸酯
-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节 维生素Anull为一个具有...
nullnull第八章维生素类药物的
null概述维生素:
是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。
人体不能合成维生素。null VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPPnull-H 维生素A醇
-COCH3 维生素A醋酸酯
-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节 维生素Anull为一个具有共轭多烯侧链的
环己烯(一) 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物null维生素A 325.5 100%
新维生素Aa 328 75%
新维生素Ab 320.5 24%
新维生素Ac 310.5 15%
异维生素Aa 323 21%
异维生素Ab 324 24% 相对生物效价nullVitA2VitA3 易发生脱氢、脱水、聚合反应null △或有金属离子存在时氧化↑null环氧化物VitA醛VitA酸nullCHCl3不溶于水
易溶于有机溶剂和植物油等null条件 无水无醇CHCl3null蓝色紫红null(BP(1998))λmax为326nm
一个吸收峰λmax为350~390nm
三个吸收峰null去水VitA(VitA3)↓VitAnullnullUSP 显色剂 磷钼酸
规定斑点颜色和Rf值BP 杂质对照品法
显色剂 三氯化锑null立体异构体
氧化产物及光照产物
合成中间体
去氢维生素A( VitA2)
去水维生素A( VitA3)UV法(一)null三点校正法
1. 条件:
(1)杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线,且随波长的增大吸收度减小;
(2)物质对光的吸收具有加和性。null2. 波长的选择:
(1) 1
VitA的max(328nm)
(2) 2 3
分别在1的两侧各选一点 测定对象 VitA醋酸酯第一法 等波长差法nullnull第二法 等吸收度法(皂化法)测定对象 VitA醇nullnull测定法
(1)基本步骤:
第一步 A选择
选择依据:
所选A值中杂质的干扰已基本消除
null注意:
C 为混合样品的浓度
第二步 求null第三步 求效价换算因数由纯品计算而得:nullnullnull第四步:求标示量%null 方法:(2) 第一法维生素A醋酸酯null 判断 是否在326~329nm之间在326~329nm之间
改用第二法是否null 规定值 差值null 判断差值是否超过规定值的有一个以上超过无超过 计算 A328(校正) 用A328计算nullnull第二法第二法null VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下(平均装量0.08262g/丸)的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀;精密量取2.0ml,置另一20 ml量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀。以环己烷为空白,测定最大吸收波长为328nm,并在下列波长处测得吸收度为nullA300 :0.354
A316 :0.561
A328 :0.628
A340 :0.523
A360 :0.216A300 /A328 :0.555
A316/A328 :0.907
A328/A328 :1.000
A340/A328 :0.811
A360/A328 :0.299 求本品中维生素A的含量?nullA300 /A328 :0.564
A316/A328 :0.893
A328/A328 :1.000
A340/A328 :0.833
A360/A328 :0.344 0.555
0.907
1.000
0.811
0.299 + 0.01
-0.01
0
+ 0.02
+ 0.04 -
-
-
-
-=
=
=
=
=nullnull(等吸收度法) 适用于维生素A醇第一法无法消除杂质干扰时用此法[ 皂化法、6/7A法 ](3)第二法null水溶性脂溶性null 判断max是否在323~327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算是否null 判断 A300 /A325 是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325(校正)nullnull03%-3%null(二)三氯化锑比色法优点 简便 快速λmax 618nm~620nm
曲线法氨基嘧啶环-CH2-噻唑环(季铵碱)氨基嘧啶环-CH2-噻唑环(季铵碱)第三节 维生素B1HClCl-null(一)溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性(二)UV共轭双键λmax = 246nmnull嘧啶环 —— 伯氨噻唑环 —— 季铵1、可与酸成盐2、与生物碱↓→↓3、含量测定 —— 非水碱量法(三)硫色素反应(四)碱性nullChPnullnull硫色素+2HnullVitB1H+H+H+nullS元素反应Cl-反应null喹那啶红-亚甲蓝
(紫红→天蓝)nullnullUV法(二)null片剂、注射剂(每片)相当于标示量的%=A = ECL规格
g/片g/100mlgChPnull(每ml)相当于标示量的%=规格
g/mlmlnull准确度高
灵敏度低
操作繁琐
设备简单nullnull2×337.273479.22null 取本品约50mg,精密称定,加水50ml溶解后,加盐酸2ml,煮沸,立即滴加硅钨酸试液4ml,继续煮沸2分钟,用80℃恒重的垂熔玻璃坩埚滤过,沉淀先用煮沸的盐酸溶液(1→20)20ml分次洗涤,再用水10ml洗涤1次,最后用丙酮洗涤2次,每次5ml,在80℃干燥至恒重,精密称定,所得重量与0.1939相乘,即得null例 精密称取本品0.0519g,加水50
ml溶解,加盐酸2ml煮沸,立即滴加
硅钨酸试液4 ml,继续煮沸2分钟,用
80℃恒重的垂熔玻璃坩埚滤过,沉淀
先用煮沸的盐酸溶液(1→20)20 ml
分次洗涤,再用水10ml 洗涤1次,后
用丙酮洗涤2次,每次5ml。在80℃干
燥至恒重,称得沉淀重量为0.2557g。
求本品的含量按干燥品计算为多少?null(本品干燥失重项下测定结果为3.73%)nullA. 取样量±50mg 提高灵敏度B. 80℃ 保持4个H2OC. HCl 增大沉淀颗粒D. 硅钨酸 :VitB1 = 8 :1
使沉淀完全E. 硅钨酸边搅拌边缓慢加入
增大沉淀颗粒nullnull激发波长365nm
发射波长435nmnull+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇
+ NaOH + 异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇
+ NaOH + 异丁醇SdAb对照液供试液null(1)灵敏度高,线性范围宽
(2)代谢产物不干扰,适用于
体液分析null第四节 维生素CL-抗坏血酸nullnull二烯醇结构二酮基结构二烯醇结构null有活性有活性无活性null糖类的显色反应结构与糖类相似nullC3-OH的
pKa = 4.17C2-OH的
pKa = 11.57一元酸nullL(+)-抗坏血酸
活性最强手性C(C4、C5)**null与碱反应nullnullnullnull1、与AgNO3反应2、与2,6 - 二氯靛酚反应(2005)氧化型(2005)null(玫瑰色)(无色)null3、与碱性酒石酸铜反应USP4、与KMnO4反应null或盐酸50℃吡咯USPnullnullnullBP0.01mol/L HCl三、杂质检查三、杂质检查(一)溶液颜色
因维生素C原料与制剂都易变色,常用比较法(和一定的吸光度比较)测定其有色杂质。
原料≤0.03 λ=420nm
片剂≤0.07 λ=440nm
注射液≤0.06 λ=420nmnull指示剂 淀粉指示液nullnull 取本品约0.2g,精密称定,加新
沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶
解,加淀粉指示液1ml,立即用碘滴
定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝
色,在30秒内不褪。每1ml碘滴定液
(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6nullnull(1)酸性环境 d . HCl (2)新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度(3)立即滴定 赶走水中O2减少O2的干扰null(4)附加剂干扰的排除片剂 —— 滑石粉 —— 过滤nullnullUSPJPnullnull(2)快速滴定 2min内 (1)酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰(3)剩余比色测定 (定量过量)(测剩余染料)null(4)缺点 需经常标定贮存≤一周干扰多 氧化力较强null1、HPLC的优点灵敏度高选择性高分离分析同步微量分析干扰少 快速null2、HPLC法分离VitC常用方法及测
定对象 对象 制剂、生物样品、果汁方法 离子交换色谱法
离子对色谱法
分配色谱法(正、反相)血、尿、组织、细胞等null例多种维生素片中VitA、 VitB1、
VitB2 、VitB6 、烟酰胺、VitC、
VitE的含量测定色谱柱 ODS
流动相 A、水 -甲醇(4 :1)
B、甲醇
(梯度洗脱)
抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠null水溶性维生素
离子对色谱法(樟脑磺酸)
内标法 + 校正因子
内标物——苯酚脂溶性维生素 外标法 苯并-二氢吡喃醇第六节 维生素Enull***null生物效价
右旋体 : 消旋体 = 1.4 :10(天然品)(合成品)dl-α-生育酚醋酸酯null结构与性质一、苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链1、易溶于有机溶剂,不溶于水2、UV3、酯键 易水解null(一)硝酸反应橙红色null(橙红色)生育红HNO3强氧化剂null 取本品约30mg,加无水乙醇10ml溶解后,加硝酸2ml,摇匀,在75℃加热15分钟,溶液应显橙红色。null三氯化铁-联吡啶反应(二)null对-生育醌弱氧化剂null红色nullλmax = 284nmλmin = 254nm0.01%无水乙醇中null维生素EUV图null薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -乙醚(4 :1)显色剂 硫酸(105℃ 5′) VitE Rf = 0.7null游离生育酚 硫酸铈滴定液(0.01mol/L)
二苯胺(亮黄→灰紫) 利用游离生育酚的还原性,
将硫酸铈还原成硫酸亚铈试剂(二)null(M生育酚= 430.8)例 取本品0.10g,加无水乙醇5ml溶解后,加二苯胺试液1滴,用硫酸铈液(0.01mol/L)滴定,消耗硫酸铈液(0.01mol/L)不得过 1.0ml。null≤2.15%null药典规定消耗硫酸铈液(0.01mol/L)≤1.0ml设:应消耗硫酸铈液≤ V ml 0.01×1.0 =实际浓度× V若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L,
应重新计算硫酸铈的消耗量null例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/LnullGC法(一)GC特点1、选择性好
灵敏度高
速度快
分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制null载气→N2
固定液→硅酮(OV-17)
担体→硅藻土或高分子多孔小球
柱温→265℃
检测器→氢火焰离子化检测器(FID)
内标→正三十二烷
n ≥ 500
R≥2内标法加校正因子nullnull内标法供试液(样品+内标)内标物对照液(对照+内标)null校正因子:null实际工作中的计算方法null例内标液 取正三十二烷加正己烷溶解
并稀释成1.0mg/ml溶液对照液 精密称取VitE对照品0.2011g
置棕色具塞锥形瓶中,精密加入内
标液10ml,密塞,振摇使溶解,取
1~3ul注入GC仪,测定,计算供试液 精密称取供试品0.1998g置棕
色具塞锥形瓶中,精密加入内标液
10ml,密塞,振摇使溶解,取1~3ul
注入GC仪,测定,计算null对照液供试液本品含C31H52O3应为96.0 ~ 102.0%nullBP GC
内标 正三十二烷
R≥1.4USP GC
内标 十六酸十六醇酯
R≥1.0JP HPLC
外标 dl-α-生育酚
R≥1.4null利用生育酚的易氧化性还原型氧化型二苯胺(亮黄→灰紫)null防止Ce(SO4)2的水解
减慢生育酚被O2氧化速度C、酸性条件Ce(SO4)2易溶于水
生育酚易溶于醇B、溶剂分子量较大,反应慢
易被O2氧化A、反应速度nullMVitE = 472null样品→ dl-α-生育酚
固定相→十八烷基硅烷键合硅胶
流动相→甲醇-水(49 :1)
检测波长→292nm
R>2.6
RSD≤0.8%null测定对象→血清中VitA和VitE
固定相→十八烷基硅烷键合硅胶
流动相→甲醇-水(96 :4)
检测波长→ 8′前330nm
8′后292nmnull108.在三氯醋酸或盐酸存在下,经
水解、脱羧、失水后,加入吡
咯即产生蓝色产物的药物应是
A. 氯氮卓
B. 维生素A
C. 普鲁卡因
D. 盐酸吗啡
E. 维生素Cnull99:77. 下列药物的碱性溶液,加入
铁氰化钾后,再加正丁醇,
显蓝色荧光的是
A. 维生素A
B. 维生素B1
C. 维生素C
D. 维生素D
E. 维生素Enull97:77.既具有酸性又具有还原性的
药物是
A. 维生素A
B. 咖啡因
C. 苯巴比妥
D. 氯丙嗪
E. 维生素Cnull99m:132.维生素C的鉴别反应,常采
用的试剂有
A. 碱性酒石酸铜
B. 硝酸银
C. 碘化铋钾
D. 乙酰丙酮
E. 三氯醋酸和吡咯null99m:84. 测定维生素C注射液的含量
时,在操作过程中要加入
丙酮,这是为了
A. 保持维生素C的稳定
B. 增加维生素C的溶解度
C. 使反应完全
D. 加快反应速度
E. 消除注射液中抗氧剂的干扰null98:85. 能发生硫色素特征反应的药物
是
A. 维生素A
B. 维生素B1
C. 维生素C
D. 维生素E
E. 烟酸null97:81.使用碘量法测定维生素C的
含量,已知维生素C的分子量
为176.13,每1ml碘滴定液
(0.1mol/L) 相当于维生素C
的量为
A. 17.61mg B. 8.806mg
C. 176.1mg D. 88.06mg
E. 1.761mgnull97:[121—125](99:[121—125])
可发生以下反应或现象的药物为
A.维生素B1 B.维生素C
C.两者均能 D.两者均不能
121.与碘化汞钾生成黄色沉淀
122.麦芽酚反应
123.在乙醚中不溶
124.与2,6-二氯靛酚反应使颜色消失
125.硫色素反应ADCBAnull115.维生素A的鉴别试验为
A. 三氯化铁反应
B. 硫酸锑反应
C. 2,6-二氯靛酚反应
D. 三氯化锑反应
E. 间二硝基苯的碱性乙醇液反
应null77.中国药典(2000年版)规定维生
素A的测定采用紫外分光光度法
(三点校正法),此法又分为
A.等波长差法
B.等吸收度法
C.6/7 A法
D.差示分光法
E.双波长法null78.维生素E的鉴别试验有
A.硫色素反应
B.硝酸氧化呈色反应
C.硫酸-乙醇呈色反应
D.碱性水解后加三氯化铁乙醇
液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反
应null80. 下面哪些描述适用于维生素A
A. 分子具有长二烯醇侧链,易被氧化
B. 具有较长的全反式共轭多烯结构
C.含酯键,经水解后产生苯并二氢吡
喃衍生物,易被氧化
D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳
定兰色,很快转变为紫红色
E.样品用无水乙醇溶解后,加硝酸加
热后,呈橙红色 null 维生素A与 反应即显蓝色,渐变成紫红色;反应需在
条件下进行。
( ) 维生素A分子中由于具有共轭多烯侧链,因而其性质很稳定,不易被氧化变质。三氯化锑无水×null 维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离 ,当有氧或其他氧化剂存在时,则进一步被氧化成醌型化合物,尤其在碱性下更易发生。生育酚null 维生素B1 的噻唑环在 介质
中可开环,再与嘧啶环上氨基缩合
环合,然后经 等氧化剂氧
化生成具有荧光的 ,加 荧
光消失,加 荧光又显出;此反应
称为 反应。碱性铁氰化钾硫色素酸碱硫色素null 维生素C是 元弱酸,具有强
性,易被氧化剂氧化,常用
作其它制剂的 剂。 一还原抗氧null 维生素E中游离生育酚的检查时
规定消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)
不得过1.0ml,现硫酸铈滴定液的实
际浓度为0.01053mol/L,应不得超过
多少ml?
A. 0.95 B. 0.97
C. 0.99 D. 0.92
E. 1.05null 中国药典维生素C的含量测定
取本品约0.2g,精密称定,加新
沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶
解,加淀粉指示液1ml,立即用碘滴
定液(0.1mol/L)滴定,至溶液显蓝色,
在30秒内不褪。每1ml碘滴定液
(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。
已知:取样量为0.2084g,消耗碘滴
定液(0.09981mol/L)22.75ml。 null
:(1)解释划线部分
(2)计算本品的含量是否符合
规定
(规定本品含C6H8O6应不低于99.0%)nullVitB1片UV法含量测定 取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于VitB1 25mg),置100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)约70ml,振摇15分钟,加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度。用干
燥滤纸滤过,精密量取续滤液5.0ml,置
另一100ml量瓶中,再加盐酸溶液
(9→1000)稀释至刻度,摇匀,在246nm
处测定吸收度,按C12H17ClN4OS·HCl的
吸收系数( )为421计算,即得。null已知 20片重 = 1.4070g A246=0.461
取样量 = 0.1551g
规格 = 10mg/片
求 本品含量是否符合药典规定?
(应相当于标示量的90.0~110.0%)null
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