病毒TCID50滴度

PFU:plaqueformingunit，空斑形成单位。感染性滴度的单位一般示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。MOI:multiplicityofinfection，感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfunumber/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其为：P=1-P(0),P(0)=e-m或m=-InP（0）。其中：P为被感染细胞的百分率P(0)为未被感染细胞的百分率m为MOI值例如，如果要感染培养皿中99%的培养细胞，则：P(0)=1%=0.01m=-In(0.01)=4.6pfu/cell。TCID50Protocol：1：制备96孔板单层细胞2：将病毒做系列稀释，横向接种单层细胞板，每稀释度重复3孔3：每日观察细胞病变，记录高于50和低于50％病变孔的病毒稀释度，4：计算比距，获得TCID50计算比距：（高于50％的病变率－50％）/（高于50％病变率－小于50％病变率）＝比距；比距与接近50%病变率的病毒的稀释度的指数相加，就获得了指数。比如：比色计算或者显微镜观察病毒的TCID50在10的负7和8次方之间，那么，指数－8与比距相加，获得的新的指数，就是TCID50的指数，TCID50=10的-7.几次方TCID50与PFU换算:PFUs＝0.7×TCID50的滴度病毒TCID50滴度的计算：组织培养半数感染量是病毒感染一半组织细胞时的病毒的稀释度，一般使用Reed-Muench方法计算，详细过程见表 稀释度 阳性数目（1） 阴性数目（2） 阳性数（3） 阴性数（4） 比率（5） 阳性数百分比（6） 10～4 4 0 11 0 11/11 100 10～4.5 4 0 7 0 7/7 100 10～5 3 1 3 1 3/4 75 10～5.5 0 4 0 5 0/5 01．计算各病毒稀释度阳性孔数目（1）和阴性孔数目（2）2．计算阳性和阴性孔的累积数阳性孔累计数由下向上累积（3）；阴性孔累积由上向下累积（4）3．计算阳性孔的百分比：比率（5）=（3）/[(3)+（4）]；(6)=（5）×1004．计算距离比距离比例=（大于50%的阳性百分比-50）/（大于50%的阳性比-小于50%的阳性百分比）=（75-50）/（75-0）=0.3TCID50的对数=大于50%的阳性百分比的最高稀释对数+距离比例x稀释系数的对数=5+0.3×0.5=5.15TCID50=10-5.15/100微升100TCID50/100微升=10-3.15100TCID50/50微升=10-3.15/2=10-3.15+0.3=10-3.15=1：16315．稀释系数的对数1:10稀释为1；半对数稀释为0.5；倍比稀释为0.3；1：5稀释为0.7