QPCR算法（相对定量，相对标准曲线法）

QPCR算法（相对定量，相对曲线法）算法：1待测样品Ct值-对照样品Ct值，2差值的取对数，3目的基因的对数除以内参基因的对数值。公式：RQ=AssayACTBTNF1-ACTB1-TNF2-ACTB2-TNF3.00sample116.2120.260.000.001.001.001.00sample218.3821.262.171.000.250.512.06sample315.1820.49-1.030.231.940.860.44sample418.3122.402.102.140.260.240.921待测样品Ct值-对照样品Ct值，对照样品为sample1，1-ACTB为减去样品sample1基因ACTB的Ct值（16.21），1-TNF为减去样品sample1基因TNF的Ct值（20.26）2差值的负数取对数，如ACTB扩增效率为90%，则取以1.9为底的对数，Excel函数为“=power（1.9，-0.00）”。TNF扩增效率为95%，则取以1.95为底的对数，Excel函数为“=power（1.95，-0.00）”。3以2-TNF除以2-ACTB。备注：1本算法应用范围，选择1个样品，2倍或5倍梯度稀释5个点，分别检测目的基因和内参基因的Ct值，取两者的差值拟合直线方程，如果直线方程的斜率的绝对值大于等于0.1，可以用该方法计算。如果小于0.1，也可以使用2-ΔΔCt法。2由于考虑不同引物之间的扩增效率，本方法比2-ΔΔCt法算出的结果更准确，如果需要比较不同基因之间的表达差异，可以参照本方法，建议使用绝对定量，计算不同基因的拷贝数，然后进行比较。