全国艾滋病检测技术规范(2015修订版)

附件1全国艾滋病检测技术规范NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS（2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月I全国艾滋病检测技术规范NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS（2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月II前言艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新III发感染检测一章；（3）新增补充试验概念,其内容包括抗体确证试验（WB，RIBA/LIA等）和核酸试验（定性和定量试验）；（4）增加了第4代试剂（抗原抗体联合检测试剂）的检测流程；(5)增加核酸检测流程；(6)完善了检测。将抗体筛查和复检报告整合为HIV抗体筛查检测报告，增加HIV-1核酸检测报告和婴儿艾滋病感染早期诊断检测报告，取消了流行病检测HIV抗体检测报告单、艾滋病病毒抗体检测数和阳性人数统计报表、艾滋病职业暴露个案登记表和艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表；（7）取消实验室生物安全一章和艾滋病检测实验室质量管理一章。所有附表的检测报告仅供使用实验室参考。本《规范》由中国疾病预防控制中心批准,下发至全国艾滋病检测实验室及有关单位。本《规范》将为国家、相关部委下发的艾滋病防治工作各项政策法规的有效实施提供强有力的技术支持，并具体指导艾滋病实验室技术人员开展日常工作。本《规范》起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心。本《规范》参加编写单位：中国人民解放军军事医学科学院、上海市疾病预防控制中心、中国医科大学、北京出入境检验检疫局、云南省疾病预防控制中心、四川省疾病预防控制中心、浙江省疾病预防控制中心、河南省疾病预防控制中心、北京市红十字血液中心、卫生部临床检验中心、江苏省疾病预防控制中心、陕西省疾病预防控制中心、安徽省疾病预防控制中心、首都医科大学附属北京佑安医院、北京市疾病预防IV控制中心。本《规范》编写组人员：蒋岩、汪宁、李敬云、钟平、尚红、邵一鸣、肖瑶、朱红、邢文革、姚均、潘品良、邱茂锋、马艳玲、梁姝、郭志宏、王哲、葛红卫、王盈、李金明、徐晓琴、常文辉、吴建军、张福杰、吴昊、苏雪丽、廖玲洁。本《规范》参加编写主要国际机构：世界卫生组织（Po-linCHAN、张岚）。美国疾病预防控制中心GAP项目（ColinShepard、郝玲、齐明山）。本《规范》编写工作联系人：肖瑶。本《规范》自发布之日起实施，同时终止《全国艾滋病检测技术规范(2009年版)》。本《规范》适用于全国艾滋病检测实验室。本《规范》解释权属于中国疾病预防控制中心。致谢：感谢盖茨基金会在规范修订过程中给予技术和人力等方面的支持。全国艾滋病检测技术规范1目录第一章样品的采集和处理 ........................................................................................... 6 1范围 ............................................................................................................................. 6 2规范性文件引用 ......................................................................................................... 6 3样品种类及相应的用途 ............................................................................................. 7 4操作步骤 ..................................................................................................................... 7 4.1采样前准备 ......................................................................................................... 7 4.2样品的采集和处理 ............................................................................................. 8 4.3样品的保存 ....................................................................................................... 10 4.4样品的运送 ....................................................................................................... 11 4.5样品的接收 ....................................................................................................... 12 第二章HIV抗体检测 ................................................................................................ 13 1范围 ........................................................................................................................... 13 2规范性文件引用 ....................................................................................................... 13 3HIV抗体检测实验室要求 ........................................................................................ 13 4HIV抗体检测的目的和要点 .................................................................................... 14 4.1HIV抗体检测的目的 ........................................................................................ 14 4.2HIV抗体检测的要点 ........................................................................................ 14 5常规HIV抗体检测方法 ........................................................................................... 15 5.1试剂和样品 ......................................................................................................... 15 5.2方法 ..................................................................................................................... 15 6结果报告 ................................................................................................................... 17 6.1筛查报告 ........................................................................................................... 17 6.2WB及RIBA/LIA报告 ....................................................................................... 18 7质量控制 ................................................................................................................... 18 7.1酶免或发光法抗体检测的室内质量控制 ....................................................... 18 7.2快速法抗体检测质控 ....................................................................................... 22 第三章HIV-1新发感染检测 ..................................................................................... 24 1范围 ............................................................................................................................. 24 2规范性文件引用 ......................................................................................................... 24 3新发感染检测实验室要求 ......................................................................................... 24 4目的 ............................................................................................................................. 24 5新发感染检测方法 ..................................................................................................... 25 全国艾滋病检测技术规范25.1方法学原理 ....................................................................................................... 25 5.2方法 ................................................................................................................... 25 5.3样品的入选和排除标准 ........................................................................... 26 5.4结果处理和解释 ............................................................................................... 27 5.5数据 ........................................................................................................... 28 6质量控制 ..................................................................................................................... 30 6.1人员培训 ........................................................................................................... 30 6.2样品质控 ........................................................................................................... 30 6.3试剂质控 ........................................................................................................... 31 6.4实验过程质控 ................................................................................................... 31 第四章HIV-1抗原检测 .............................................................................................. 32 1范围 ........................................................................................................................... 32 2规范性文件引用 ....................................................................................................... 32 3HIV－1P24抗原检测的意义 ..................................................................................... 32 4实验室要求 ............................................................................................................... 32 5检测方法及程序 ....................................................................................................... 33 5.1试剂 ................................................................................................................... 33 5.2样品 ................................................................................................................... 33 5.3定性检测 ........................................................................................................... 33 5.4定量检测 ........................................................................................................... 35 5.5结果报告和解释 ............................................................................................... 35 6质量控制 ................................................................................................................... 36 6.1定性检测 ........................................................................................................... 36 6.2定量检测 ........................................................................................................... 37 第五章HIV核酸检测 ................................................................................................ 38 1范围 ........................................................................................................................... 38 2规范性文件引用 ....................................................................................................... 38 3核酸检测的意义 ....................................................................................................... 39 3.1HIV-1感染诊断 ................................................................................................ 39 3.2治疗效果监测 ................................................................................................... 40 3.3病程监控及预测 ............................................................................................... 40 3.4耐药性监测 ....................................................................................................... 40 4HIV核酸检测实验室要求 ........................................................................................ 41 4.1实验室的及工作基本原则 ....................................................................... 41 全国艾滋病检测技术规范34.2实验室人员和要求 ........................................................................................... 41 4.3实验室生物安全 ............................................................................................... 41 5HIV-1核酸检测方法及程序 .................................................................................... 41 5.1HIV-1核酸定性检测 ........................................................................................ 41 5.2HIV核酸定量检测 ............................................................................................ 43 5.3集合核酸定性检测 ....................................................................................... 45 5.4HIV核酸即时检测 .......................................................................................... 47 6质量保证和质量控制 ............................................................................................... 47 6.1实验室分区和环境 ........................................................................................... 47 6.2仪器设备质量控制 ........................................................................................... 48 6.3检测过程质量控制 ........................................................................................... 48 6.4外部质量控制 ................................................................................................... 48 第六章艾滋病病毒感染实验室检测策略 ................................................................... 49 1范围 ........................................................................................................................... 49 2规范性文件引用 ....................................................................................................... 49 3疫情监测相关的检测策略及结果报告 .................................................................... 49 3.1HIV匿名无关联检测流程 ................................................................................ 49 3.2HIV匿名关联检测流程 .................................................................................... 50 4临床诊断相关的检测策略及结果报告 .................................................................... 50 4.1使用抗体检测试剂的检测流程 ....................................................................... 50 4.2使用抗原抗体检测试剂的检测流程 ............................................................... 51 4.3补充试验检测策略 ........................................................................................... 53 5血液筛查相关的检测策略及结果报告 .................................................................... 58 6婴儿HIV-1感染早期诊断相关的检测策略及结果报告 ........................................ 61 6.1核酸检测策略（RNA/DNA） ............................................................................. 61 6.2抗体检测策略及结果报告 ............................................................................... 63 第七章HIV-1基因型耐药检测 ................................................................................. 65 1范围 ........................................................................................................................... 65 2规范性文件引用 ....................................................................................................... 65 3HIV-1基因型耐药检测的意义 ................................................................................ 66 3.1群体耐药监测 ................................................................................................... 66 3.2个体耐药检测 ................................................................................................... 66 4HIV-1基因型耐药检测实验室要求 ........................................................................ 67 4.1实验室功能分区 ............................................................................................... 67 全国艾滋病检测技术规范44.2实验室人员和要求 ........................................................................................... 67 4.3设施和设备 ....................................................................................................... 68 5HIV-1基因型耐药检测方法及程序 .......................................................................... 68 5.1样品 ................................................................................................................... 68 5.2检测原理 ........................................................................................................... 68 5.3检测方法 ........................................................................................................... 68 5.4耐药分析 ........................................................................................................... 69 6质量保证与质量控制 ............................................................................................... 70 6.1室内质控 ........................................................................................................... 70 6.2外部质控 ........................................................................................................... 71 第八章CD4+和CD8+T淋巴细胞检测 ......................................................................... 72 1范围 ............................................................................................................................. 72 2规范性文件引用 ......................................................................................................... 72 3CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的意义 ...................................................................... 73 3.1HIV感染临床分期 ............................................................................................ 73 3.2HIV感染儿童免疫抑制分级和治疗辅助指标 ................................................ 73 3.3疾病进展监测 ................................................................................................... 73 3.4机会性感染的风险评估 ................................................................................... 73 3.5抗病毒治疗适应症选择及疗效评价 ............................................................... 73 3.6CD8+T淋巴细胞为抑制性/细胞毒性T细胞 .................................................. 74 4CD4+和CD8+T淋巴细胞检测实验室要求 .............................................................. 74 4.1人员 ................................................................................................................... 74 4.2功能分区 ........................................................................................................... 74 4.3设施和设备 ....................................................................................................... 74 5常规CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的方法和程序 ................................................. 75 5.1样品采集、运输和接收 ................................................................................... 75 5.2方法 ................................................................................................................... 76 5.3试剂 ................................................................................................................... 78 5.4实验资料的记录 ............................................................................................... 78 5.5结果报告 ........................................................................................................... 78 6质量控制 ................................................................................................................... 79 第九章HIV-1的分离培养 ......................................................................................... 81 1范围 ........................................................................................................................... 81 2规范性文件引用 ....................................................................................................... 81 全国艾滋病检测技术规范53HIV-1分离的意义 .................................................................................................... 81 3.1HIV抗体不确定或HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断及诊断 ................. 81 3.2HIV表型耐药检测及其他HIV生物学特征的研究。 ..................................... 81 3.3HIV感染的辅助诊断HIV-1感染窗口期。 ................................................... 81 4实验室要求 ............................................................................................................... 81 4.1实验室 ............................................................................................................... 81 4.2设备 ................................................................................................................... 81 4.3材料 ................................................................................................................... 81 5HIV-1分离的方法及程序 ........................................................................................ 82 5.1样本 ................................................................................................................... 82 5.2靶细胞制备 ....................................................................................................... 82 5.3建立共培养 ....................................................................................................... 82 5.4监测病毒生长 ................................................................................................... 82 5.5病毒鉴定。 ....................................................................................................... 82 5.6判定结果和解释 ............................................................................................... 82 6质量控制 ................................................................................................................... 83 附表1HIV抗体筛查检测报告 ........................................................................................ 84 附表2HIV抗体确证检测报告 ........................................................................................ 85 附表3HIV-1核酸检测报告 ............................................................................................ 86 附表4HIV抗体确证检测报告（特定条件） ................................................................ 87 附表5CD4+T淋巴细胞检测报告 .................................................................................... 88 附表6HIV-1耐药基因型检测报告 ................................................................................ 89 附表7婴儿艾滋病感染早期诊断检测报告 ................................................................... 90 全国艾滋病检测技术规范6第一章样品的采集和处理1范围本章规定了用于人免疫缺陷病毒（HIV）检测的全血、血清、血浆、细胞、口腔黏膜渗出液、尿液以及滤纸干血斑（DBS）样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体、抗原、核酸、基因亚型、耐药检测、CD4+和CD8+T淋巴细胞数测定及HIV分离培养。2规范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准WS-293有效版本。《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量及保证指南》（中国疾病预防控制中心，2013年版）。《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南》（中国疾病预防控制中心，2013年版）。《HIV-1基因型耐药检测及质量保证指南》，（中国疾病预防控制中心，2013年版）。ConsolidatedGuidelinesonHIVTestingServices.WHOJuly2015.《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，卫生部第45号令,2006年2月1日。全国艾滋病检测技术规范73样品种类及相应的用途3.1全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品可用于HIV抗体检测。3.2全血、血清、血浆、病毒培养上清液可用于HIV抗原检测。3.3抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。3.4血浆、DBS可用于HIV-1病毒载量、基因型、耐药检测。3.5淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（PBMC）及全血可用于HIV核酸定性与定量、基因型检测和HIV-1分离培养。4操作步骤4.1采样前准备根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临床采血技术要求操作，遵守生物安全相关要求。检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，是否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致，并注明样品采集时间及唯一编码。采集血液样本宜选择合适的室内（外）采血空间，受检者坐（卧）于合适的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器等。口腔黏膜渗出液样本应使用试剂盒提供的专用采样工具，尿液样本建议使用可保持尿液稳定的专用采尿管。4.1.1样品的编码