1992报春花的组织培养和植株再生
第 4期
1992年
意 北 柙 大 学 枉 自 然 科 学 版
3OUR NA~ OF NORTHEAST NORM AL UNⅣ ERS1
No.
1992
cl c:I 报春花的组织培养和植株再生
李彦舫 张亚兰 杨松涛 杨文杰 庞劲松
p7钾.77
— —
— —
北师大生物系)
摘要 用报春花叶片、花蕾作外植体。接种在含有不同浓度6BA、NAA的MS培
养基上,诱导愈伤组担形成,经惫伤组骞}增殖和反复切割后诱导其分化出芽和
根 ,然后将试管苗移植到土壤 中。
报春花...
第 4期
1992年
意 北 柙 大 学 枉 自 然 科 学 版
3OUR NA~ OF NORTHEAST NORM AL UNⅣ ERS1
No.
1992
cl c:I 报春花的组织培养和植株再生
李彦舫 张亚兰 杨松涛 杨文杰 庞劲松
p7钾.77
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北师大生物系)
摘要 用报春花叶片、花蕾作外植体。接种在含有不同浓度6BA、NAA的MS培
养基上,诱导愈伤组担形成,经惫伤组骞}增殖和反复切割后诱导其分化出芽和
根 ,然后将试管苗移植到土壤 中。
报春花 (~ ,nu/a 豳 ),是报喜花科报毒花属的二卑生草本花卉。产于云
南、广西西部,其花期长,观赏价值高。多卑来均用种子繁殖,速度较慢。如致
用组织培养法,可大大提高其生产效率。但其组织培养工作在国内外尚束见报
道,为此,我们对其进行 了愈伤组织曲诱 导和植株再生的研究,得到了初步结
果 。
关键词 报毒花,组织培养,植株再生,愈伤组织,试管苗。
1 材料与方法
从健壮植株上取未开放酌花蕾、幼嫩的叶片,用自来水冲洗数遍,洗去表面污染物,
滤纸吸干,放入70 酒精中漂冼30秒钟,然后用0.1 Hgcl滞 液消毒2分钟,再用无菌水
冲洗4—6次,在无菌条件下将叶片切成5tara 左右的小块,接种在培养基上,将花蕾直接
接种在培养基上。
选用 MS为基本培养基 ,附加不同浓度6BA、NAA和 IAA,蔗糖浓度为3 ,琼脂为
0.7 ,CH200mg/L,肌醇200mg/L,PH值为5.8。在25℃下恒温暗处培养 ,待愈伤组织发
生后,转入1500Lux光照下继续培养,温度维持在25+I'C,每天人工光照lod,时,相对
湿度为75—85 ,经诱导分化,壮苗和生根等步骤培养成苗。
2 结果与讨论
:I
1 惫伤组织的诱1导1
叶片接种后,瞎来后叶表面膨大并卷曲,7~9天后卷曲的叶片开始松开,并逐渐增厚,
半月后在切口处出琊肉眼可见的黄白色瘤状物,即愈伤组织。20天后,瘤状物增多,并逐
渐变红,经继代培养后部分呈绿色,其余则呈肉黄色。
花蕾接种后,’一周后观察,花蕾形成黄白色愈伤组织,半月后,逐渐形成绿色突起
一 9d 一
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和瘤状钧 (图1)。
诱导愈伤组织培养基基本成分为 MS,附加不同浓度的细胞分裂素及生长素,其效果
如表1。
附加不丽浓度的细胞分裂素及生长索
表l · 对叶爰花蕾愈伤组织谤导的影响
l l 叶 I 花f
6-B.*k I 、 厂 r 1形 伤【诱 率 (ms/L) ml j { J ; l I I敷(堍)I组织披(块)i
,( I敷 (块 1组荨l敷 (块’; (%
2.0
2.O
1.O
m 5
O.2
从表 1看 出,6BA2.0mgL和 NAA0.2mg/L对报舂 花幼 叶愈 伤组 织诱 导率较高,
6BA1.0mg/L和 NAA 0.5mg/L对其花蕾禽伤组织诱导率较高。当培养基中只含有6BA而
无 NAA时 ,花营和幼叶不经过愈伤组织阶段直接诱导成苗 当培养基 中其古 NAA时,花
蕾和幼叶只形成愈伤组织不能分化苗
2.2 芽的分化
将叶片及花蕾禽伤组织转入分化培养基上,20夭后便可见到不定芽从叶片禽伤组织
上分化出来,开始时仅1—2个芽,以后陆续产生,形成丛生芽,再经半月后即长出幼苗。
(图2)花蕾禽伤组织在接种l5天后由黄白色变为绿色,并分化出矮壮、暗绿色的芽,并
逐渐形成丛生芽,进而长出幼苗 (图3)。
诱导分化的基本培养基为 MS,附加不同浓度的6BA、NAA及 L'kA,其效果如表2。
表2 培养基中6BA量对芽分化的影响
6一 B^
(打喀,L)
NAA
(rag/L)
IAA
(mg/L)
叶 l 花f
植^盘骺组 化芽的愈∞ 化
织敦 (块)l组织敦 (块)1( )
O 0.0l o.o1
0 5 0.0l 0.0l
1.o o.o1 o.o1
2 0 o.0l 0.o1
0 0 5
3l 23
10 63 25
13 77 20
o
4
76
65
从表2看出,在 NAA、IAA浓度一定的条件下,6BA为2.0mg/L时叶的诱导率较高,
6BA为1.Omg/L对花蕾的诱导率较高。从表1和表2可以看出,不管是由外檀体直接诱导成
苗还是经禽伤组织阶段再分化苗,培养基中都必须有细胞分裂索6BA的存在,可见6BA在
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诱导报春花叶片和花蕾成苗中起着重要作用。另外 ,在原来诱导愈伤组织的培养基上经二
个多月的时间也有少数的芽分化出来。 .
2.3 根 的诱 导
通过对几 种培养基及生 长素的试验筛选,认为 3/2MS做 为基本培 养基,附加
NAAlmg/L生根率较高 ,且小苗基部不会产生大量的愈伤组织 ,根从基部生出,生根率达
9O 以上 ,时间大约半个月左右。至此,完整植株 已培育出来 (图4)
2.4 再 生苗的移 栽
当巳分化出的小苗长至2—3era时即可以移出室外,移栽前先打开瓶 口炼苗2天l然后
洗净根部的培养基 ,移入沙石的花盆中,栽后7一l0天要用玻璃盖盖上,’以免过分失水,
待小苗长出新叶后 ,再移到土壤中去 ,成活率达70 以上 (图5)。
TISsI E CULTURE AND PI.AN1[I.ET REGENERAT10N 0F
RIM IⅡ,A MLAC0IDES
Yang如 ,Z,'m,Ng Yalia~, 。,y唧 咄 Ptr,~-
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ade and flower bud of PrimuM wualaioide~ Wets cultured On M S Suppleme~ed
with different concentration of 6一 BA and NAA.Callus was~ rived from explant. after callus
has T:~en rapidly WaS transfered to me~um that induce Shoot and root_formation.The test--tube
plantlet WaS transplanted il1t0 soil.
Key Words 叫 mah malacoides,tis~'ure culture,plantl regeneration,callus,test— tube Plant
let. 。
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