血清谷丙转氨酶活性的测定

血清谷丙转氨酶活性的测定实验题目实验目的掌握谷丙转氨酶活性测定的原理和方法血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱性溶液中成醌型显棕红色。实验原理本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。本法以lml血清与基质液在37℃，保温30分钟生成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位求酶活性单位的方法：1、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。2、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。一、标准品对照法取试管4支，标号，按下表加试剂：基质液血清丙酮酸水4个管同时放入37℃水浴中。准确保温30分钟，呈色试剂基质液A（检品）0.50.1——0.5—B（检对照）—0.1——0.50.5S（标准）0.5—0.1—0.5—S’（标对照）———0.10.50.5实验操作56℃放置5分钟。加0.4NNaOH液5.0ml慢慢加入（约1分钟），边加边混匀。室温放置30分钟，测OD值，波长520nm，用蒸馏水调零点。计算二、标准曲线法配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，作成标准曲线。具体做法如下表。管号12345空白标准丙酮酸（50μg/ml）基质液ml蒸馏水ml丙酮酸含量μg相当GPT单位0.050.50.452.5100.10.50.45.0200.20.50.310400.30.50.215600.40.50.12080-0.50.5-0。各管混匀，放37℃水浴5分钟加0.4NNaOH液5.0ml慢慢加入（约1分钟），边加边混匀然后各加呈色试剂0.5ml，混匀56℃放置5分钟。室温放置30分钟测定OD值,波长520nm，用蒸馏水调零点。ABSS’OD值一标准对照法１.原始数据记录2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果）二、标准曲线法１.原始数据记录12345空白OD标准OD标准–OD空白(纵坐标)--------标准GPT单位(横坐标)1020406080---------2、绘制标准曲线，（要求作图）3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位实验结果注意事项操作中加0.4NNaOH液时，需以较慢速度加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二酸引起的发色增强。本实验中各试剂加量都需要准确，并且要注意控制条件，保温时间要严格本法测定SGTP正常值为40单位以下。分析实验误差产生的原因血清GPT活性测定的意义实验讨论