湿毒清胶囊质量标准研究

湿毒清胶囊质量研究 摘 要:目的:对湿毒清胶囊进行质量标准研究。方法:采用薄层色谱法对黄芩和当归进行鉴别。采用高效液相色谱法对苦参中苦参碱的含量进行测定，色谱柱为PhenomenexHyper Clone 5u BDS C18 130A(250×4.60mm 5 micron);流动相为甲醇-0.02mol,L磷酸二氢钠溶液(38:62);流速为1.0ml?min^-1;检测波长为220nm;柱湿为25?。结果:苦参碱进样量在0.515,5.15μg范围内，线性关系良好，r=0.99993。平均回收率为99.34,，RSD=2.2,。结论:本方法简便准确、重现性好，可对湿毒清胶囊进行质量控制。 关键词:湿毒清胶囊;薄层色谱法;高效液相色谱法;苦参碱 中图分类号:R927(11 文献标识码:A 文章编号:1007-2349(2008)01-0036-02 湿毒清胶囊是国家药品标准品种，由地黄、当归、丹参、蝉蜕、苦参、白鲜皮、甘草、黄芩、土茯苓等九味中药精制而成，具有养血润燥、化湿解毒、祛风止痒的功效，原质量标准有土茯苓和黄芩的显微鉴别以及苦参和甘草的薄层色谱鉴别，本研究对方中的黄芩和当归进行薄层色谱鉴别。结果专属性强，重现性好;用高效液相色谱法对苦参中苦参碱的含量进行测定，结果准确、重现性好。 1 仪器与试药 Agilent 1100LC高效液相色谱仪，G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1315BDAD检测器，Agilent 1100化学工作站。 黄芩苷对照品、当归对照药材、苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供;湿毒清胶囊为市售;甲醇为色谱纯;水为双蒸水;其他试剂均为纯。 2 方法与结果 2(1 黄芩薄层色谱鉴别 取湿毒清胶囊内容物2g，加甲醇20ml，超声处理15min滤过，滤液蒸干。残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录?B)试验，吸取供试品溶液5μl及对照品溶液10μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(12:7:1.5:3)为展开剂(展开，取出，晾干，喷以1,三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺黄芩的阴性样品无相同的斑点。 2(2 当归薄层色谱鉴别 取湿毒清胶囊内容物1g，加乙醚20ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录?B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺当归的阴性样品无相同的荧光斑点。 2(3 苦参碱含量测定 2(3(1 色谱条件 色谱柱:Phenomenex HyperClone 5uBDS C18 130A(250×4.60mm 5 micron);流动相:甲醇-0.02mol,L瞵酸二氢钠溶液(38:62);流速:1.0ml?min^-1:检测波长:220hm;柱温:25?;进样量:10μ1。理论板数按苦参碱峰计算应不低于2000。 2(3(2 对照品溶液的制备取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 2(3(3 供试品溶液的制备取湿毒清胶囊内容物1g，精密称定，加氨水1ml使润湿，再加氯仿50ml，超声提取30min，放冷，滤过，滤液蒸干，用氯仿一甲醇(7:3)少量溶解残渣，上于中性氧化铝柱上(内径1cm，2g，干法上柱)，用氯仿-甲醇(7:3)30ml，洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇溶解，定容于25ml量瓶中，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。 2(3(4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定。 2(3(5 空白试验 制备不含苦参的阴性样品，按2(3(3供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液，按2(3(4测定法测定，结果在液相色谱图上，在苦参碱对照品保留时间相应位置上无峰干扰，表明湿毒清胶囊的其它成份对苦参碱含量测定无干扰。 2(3(6 线性关系考察 配制浓度为1mg,ml的对照品溶液，取适量，加甲醇制成浓度0.05、O.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg,ml的系列标准溶液，分别精密吸取10μ1，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，以对照品浓度(mg,m1)为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=2864790x+7477，相关系数r=0.99993。结果表明，苦参碱进样量在0.515,5.15#g范围内，线性关系良好。 2(3(7 稳定性试验 取供试品溶液，每隔一定时间测定1次，其含量在24h内基本不变，RSD为2.5,(n=6)，表明供试品溶液中苦参碱在24h内测定基本稳定。 2(3(8 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，测定其峰面积，计算得RSD=0.8,(n=5)，结果显示精密度良好。 2(3(9 重复性试验 取同一批供试品按2(3(3供试品溶液的制备方法制备5份，分别依法测定其含量，平均值为1.75mg,g，RSD=3.1,(n=5)，表明本法重复性好。 2(3(10 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品0.5g(含量为1.75mg,g)，分别精密加入浓度为1.030mg,ml的对照品溶液0.8ml，按2(3(3供试品溶液的制备方法制备回收率实验液，测定含量，计算回收率，平均回收率为99.34,，RSD=2.2,(n=5)。结果表明，本法回收率良好。结果见表1。 2(3(11 供试品含量测定 取3批湿毒清胶囊，按2(3(3供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别测定其苦参碱含量，用外标法计算。3批供试品的含量分别为1.75mg,g、1.59mg,g、1.65rag,g(n=2)。 3 讨论 3(1 提取时间考察 分别考察了超声提取10min、30min和50min，结果表明，提取10min不完全，而提取30min和提取50min基本无差别，所以选择超声提取30min。 3(2 提取溶剂用量考察 分别考察了用氯仿20ml、50ml、80ml进行提取的结果，结果表明，用20ml提取不完全，而用50ml和用80ml基本无差别，所以选择用氯仿50ml进行提取。