孕妇外周血胎儿有核红细胞与妊娠并发症变化分析（可编辑）

孕妇外周血胎儿有核红细胞与妊娠并发症变化（可编辑） 孕妇外周血胎儿有核红细胞与妊娠并发症变化分析 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师或指导小组的指导下,由本人独立完成。本学 位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医 科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发与学位论文主要 内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试验材料、原始数据、 申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应法律责任。 ??’‘ 一.’ 研究生签每:王乞钕导师签章霸恸二级学院领导盖章: 劫,年占月,日 河北医科大学 学位论文独创性声明 , 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中 特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究 成果,指导教师对此进行了审定口本论文由本人独立撰写,文责自负? 研究生签名: 导师签章:参糯 刃年歹月日『?洲目 录 中文摘要?“ 英文摘要研究论文 孕妇外周血胎儿有核红细胞与妊娠并发症变化分析 前言? 月舌’ 材料与方法? 结果? 附图??.... 附表 讨论?、 结论? 参考文献?“ 综述 孕妇外周血有核红细胞检测与优生优育? 致谢...个人简历中文摘要 孕妇外周血胎儿有核红细胞与妊娠并发症变化分析 摘 要 目的:探讨妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、妊娠合并血小板减少 症三种不同妊娠并发症及合并症发生时,母血中胎儿有核红细胞数量 的变化,以及与胎儿脐血流速度变化是否有相关性。 方法:选取临床确诊的妊娠期高血压疾病患者例其中子痫前期 轻度例,子痫前期重度例,子痫例;妊娠期糖尿病患者例其 中血糖控制理想无低血糖或酮症发生的患者例,血糖控制不理想曾发 生低血糖或酮症的患者例;妊娠合并血小板减少患者例,另外选 取例正常孕妇做为对照,分别取外周血进行单密度梯度离心,瑞士一 姬姆萨染色和细胞计数:对以上各组孕妇取血同时做胎儿彩超检查,分别 测定胎儿脐血收缩期与舒张期血流速度比值/比值。 结果: 外周血中检测到的数量如下:例正常孕妇数量 .?.个/,例子痫前期轻度.?.个/,例子痫前 期重度?.个/,例子痫患者.?.个/,例血糖 控制理想无低血糖或酮症发生的患者.?.个/,例血糖控制 不理想曾发生低血糖或酮症的患者.?.个/,例妊娠合并血 小板减少患者.?.个/。 胎儿脐血/比值结果如下:例正常孕妇.?.,例 子痫前期轻度患者.?.,例子痫前期重度患者.?., 例子痫患者.?.,例血糖控制理想无低血糖或酮症发生的患者 .?.,例血糖控制不理想曾发生低血糖或酮症的患者 .?.,例妊娠合并血小板减少患者.?.。 经单因素方差分析,妊娠期高血压疾病子痫前期轻度、子痫前期重 度和发生子痫组的患者母血中数量和胎儿脐血/比值与对照组比 较均有显著性差异伊现』夕。且子痫前期轻度、重度和发生子痫的三组 患者之间母血中数量和胎儿脐血/比值比较均有显著差异伊 现;妊娠期糖尿病患者母血中数量与对照组比较有显著性差异中文摘要 伊笏,血糖控制理想不伴低血糖或酮症发生的患者胎儿脐血/ 比值与对照组比较无显著性差异伊现笏,血糖控制不理想伴低血糖或 酮症发生的患者胎儿脐血/比值与对照组比较有显著性差异伊 现们,血糖控制理想不伴低血糖或酮症发生的患者母血中数量和 胎儿脐血/比值与血糖控制不理想伴低血糖或酮症发生的患者比较有 显著性差异伊现.。妊娠合并血小板减少组母血中数量和胎儿 脐血/比值与对照组比较无显著性差异伊现掰/。 经相关检验,各组母血中数量和胎儿脐血/比值 , 呈正相关耐照组尸现口,以加,妊娠期高血压疾病组尸 严现舛,妊娠期糖尿病组尸现』,瑚必;妊娠合并血小板减少组尸 。,. 结论:以上研究显示妊娠期高血压疾病子痫前期和发生子痫的患者以 及妊娠期糖尿病的患者母血中数量增加,而且患者病情加重,胎儿英文摘要 。一??????????????????????????????????????????????一 、 . : : 也 , , ”;觚帆够. :铲,锄,,, 肌.此弧 .姗 . , 估时他. : .士. /,:士./, .士./, 锄 .士./,.士./, .士./ .士./. ? 一??????????????????????????????。???????????????。一英文摘要 / : 姗.士., .士., 锄 .士., .士., , 锄 .士., .土. .土.. 池妇/锄 , ? 们. ., /锄 妒. . 全釉 江五印趴 ../印 尸.. 如 / 妒. . / ?出 , . 尸.. 啪 枷 /也” 铲尸..之 访/ . .,产.; ,.; 舒 .,间.;‰。”。 ., :... : 】咖 锄 ,锄 ; 、 ?’’ 啦湾 聊诹 恤. .伽.僚 ? , .’ . ; , 缸;: 啪/ 研究论文 孕妇外周血胎儿有核红细胞与妊娠并发症变化分析 ?“叁’ 刖 吾 孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞,这一现象经国内外学者 的大量研究已得到证实,利用母血中胎儿有核红细胞进行胎儿 遗传疾病的产前筛查是近年来国内外新发展的一项非创伤性产前诊断技 术,因为正常孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量极少,母血中胎儿有核细 胞的分离和富集以及与母源性红细胞的鉴别一直是学者们在积极探索的 问题。在不断的临床试验研究过程中,学者们发现有些病理妊娠如妊娠高 血压疾病子痫前期刊、慢性胎儿宫内窘迫?刊发生时母血中胎儿有核红细 胞数量增加。因此母血中胎儿有核红细胞增加在产前预测病理妊娠的发生 及发病机制方面的研究引起广大产科临床医师的关注。 早在年口研究发现子宫胎盘血流阻力指数增高的孕妇 胎儿脐血有核红细胞数量增加,而且与胎儿缺氧、高碳酸血症、酸中毒及 高乳酸血症有关。年研究发现子痫前期患者外周血中 数量较正常孕妇增加。年阳研究发现孕?周子宫胎盘 血流阻力指数增高而且外周血有核红细胞数量增加的孕妇,以后发展为子 痫前期和胎儿生长受限的风险增加。年研究发现中孕期外 周血数量的增加的孕妇,以后发展为子痫前期风险增加四。年 研究提示早期妊娠母血中胎儿有核红细胞计数及子宫动脉血流阻 力指数变化与中孕期子宫动脉血流阻力指数变化及子痫前期发生无关伽。 年研究发现妊娠期糖尿病孕妇外周血有核红细胞数 量增加。以上研究发现提示有些妊娠并发症可以引起孕妇外周血有核红细 胞数量增加,而且和子宫动脉血流阻力指数变化有关,但孕妇外周血胎儿 有核红细胞数量增加的数值以及胎儿有核红细胞的分离和纯化有待于进 . 一步研究。 妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、妊娠合并血小板减少症是常见的 威胁围产期母儿健康的妊娠并发症及合并症,本研究目的是探讨以上不同 妊娠并发症发生时,母血中胎儿有核红细胞数量的变化,以及 与胎儿脐血流速度变化是否有相关性。为母血中胎儿有核红细胞计数在产研 究论文 前预测病理妊娠和无创性产前诊断中的应用提供理论基础和实验依据。 材料与方法 研究对象 选取年月至年月我院产科门诊或病房住院的确诊的妊 娠并发症或合并症患者例,根据病种不同分为、、三组,组为 妊娠期高血压疾病患者例,组为妊娠期糖尿病患者例,组为妊 娠合并血小板减少患者例。每组根据患者疾病程度分为不同的亚组, 其中组分为三个亚组:,组为子痫前期轻度例,组为子痫前期重 度例,。组为曾发生子痫例;组分为两个亚组:其中。组:血糖控 制理想无低血糖或酮症发生的患者例,:组:血糖控制不理想曾发生低 血糖或酮症的患者例;另外选取例正常孕妇做为对照组。 .对照组: 随机选取门诊妊娠?周、年龄在?岁的正常孕妇例作为对照 组,经严格体检、监测血压、进行血尿常规、肝、肾功能、电解质、心电 图及超等检查均为正常且排除其他器质性疾病。 ..病例分组: ..妊娠期高血压疾病患者例,妊娠?周,年龄在?岁,诊断 标准及分期标准依照人民卫生出版的第七版《妇产科学》,其中子痫前期 轻度例,子痫前期重度例,子痫例。除外其他并发症及合并症。 ..妊娠期糖尿病患者例,妊娠?周,年龄在?岁,诊断标准 及血糖控制标准依照人民卫生出版的第七版《妇产科学》,其中血糖控制 理想无低血糖或酮症发生的患者例,血糖控制不理想曾发生低血糖或酮 症的患者例,除外其他并发症及合并症。 ..妊娠合并血小板减少患者例,妊娠?周,年龄在? 岁。血小板计数×/,血常规检查其他项目正常,除外其他器质 性疾病以及其他并发症及合并症。 以上各组患者的年龄和孕周无统计学上差异。所有患者均被告知且同 意抽取静脉血。 材料与方法研究论文 .材料: ..试剂:淋巴细胞分离液型人上海研拓生物科技有限公司生产、 瑞氏一姬姆萨曲?染液西化仪北京科技有限公司生产 ..仪器:一次性无菌试管,吸管,离心机,光学显微镜日本产 ?。?一型高分辨彩超仪。 ..方法: ..标本采集 各组患者在治疗前及正常孕妇分别取外周静脉血,置于 抗凝管,室温保存,小时内检测。 ..细胞提取:取两个无菌试管,分别加入淋巴细胞分离液,将 静脉血加等倍.%盐水稀释,用吸管轻轻吸吹混匀后用吸管吸出并沿 试管壁缓慢注入到两个含淋巴细胞分离液的试管内,以/离心 分钟,用吸管小心吸出中层界面细胞,用.%盐水洗涤次,制成涂片。 ..瑞氏一姬姆萨曲.染色和细胞计数用瑞氏姬姆萨染液 染色分钟后,在高倍显微镜下分辨有核红细胞并计数。 ..多普勒彩超 对以上各组孕妇取血同时做胎儿多普勒彩超检查,分别测定胎儿脐动脉收 缩期峰值与舒张末期血流速度比值/比值。 ..统计学分析:结果用.软件包做统计学分析,用单因素方 差分析各病理妊娠组母血中数量和/比值与正常对照组比较是否 具有显著性差异。.认为差异有统计学意义,.认为差异有显 著统计学意义。用相关检验各组母血中数量变化与/比值 变化是否有相关性。 结 果 各组孕妇外周血中均检测到,见.位于图中央的单个有 核细胞即为有核红细胞。 各组孕妇外周血计数结果如下:例正常孕妇.?.个 /,例子痫前期轻度.?.个/,例子痫前期重度 ?.个/,例子痫患者.?.个/,例血糖控制理研究论文 想无低血糖或酮症发生的患者.?.个/,例血糖控制不理 想曾发生低血糖或酮症的患者.?.个/,例妊娠合并血小 板减少患者.?.个/。各组孕妇外周血计数结果及 。 与对照组检验尸值见 各组胎儿多普勒彩超检查/比值结果如下:例正常孕妇 .?.,例子痫前期轻度患者.?.,例子痫前期重度 患者.?.,例子痫患者.?.,例血糖控制理想无低 血糖或酮症发生的患者.?.,例血糖控制不理想曾发生低血糖 或酮症的患者.?.,例妊娠合并血小板减少患者.?.。 。 各组胎儿脐血/比值及与对照组检验尸值见 各组之间单因素方差分析结果,妊娠高血压组各组,、:与。组 母血中数量和胎儿脐血/比值与对照组比较值均.。 各组之间比较,。与,。与。,,与。组母血中数量和胎儿 脐血/比值检验值均.;妊娠期糖尿病组。组和:组母血中 数量和对照组比较值均.。,组胎儿脐血/比值与对照 组比较值.,:组胎儿脐血/比值与对照组比较值., 。组和。组之间比较,母血中数量和胎儿脐血/比值检验 值均.。妊娠合并血小板减少组母血中数量和胎儿脐血/ 比值与对照组比较无显著性差异伊现晒/。 经相关检验,各组母血中数量和胎儿脐血/比值相关 系数及值结果如下:对照组尸姐口』,现加,妊娠期高血压疾病 组.,.:妊娠觏裢尿病组..。:妊娠合并 。 血小板减少组尸现们,,铂舛』见 结果分析: .妊娠期高血压疾病子痫前期轻度、子痫前期重度和发生子痫组的 患者母血中数量和胎儿脐血/比值与对照组比较均有显著性 差异伊现口/。且子痫前期轻度、重度和发生子痫的三组患者之间母 血中数量和胎儿脐血/比值比较均有显著差异伊姐口。 .妊娠期糖尿病患者母血中数量与对照组比较有显著性差 异伊现晒,血糖控制理想不伴低血糖或酮症发生的患者胎儿脐血 /比值与对照组比较无显著性差异伊现别,血糖控制不理想伴低研究论文 血糖或酮症发生的患者胎儿脐血/比值与对照组比较有显著性差异 沪现口『,血糖控制理想不伴低血糖或酮症发生的患者母血中 数量和胎儿脐血/比值与血糖控制不理想伴低血糖或酮症发生的患 者比较有显著性差异伊现。 .妊娠合并血小板减少组母血中数量和胎儿脐血/比值与 对照组比较无显著性差异伊口舾夕。 .各组母血中数量和胎儿脐血/比值呈正相关。研究论文 附 图 佗 . 研究论文 一一?????????????????????????????????????????????????????一 附 表卜 . ???????????????????????????????????????????????????一 ?氇计数个/与对照组检验尸值 例数 分组 一一??????????????????????????????????????????????一 .士. 对照组 .? .士. 组子痫前期轻度 .? 士. 组子痫前期重度 .? .士. 组子痫 ..士. 组血糖稳定 .? .士. ,组血糖不稳定 :鱼 :圭: 组妊娠合并血,堑堡尘墨 ?????????????????????????????????????????????????????????一??一一 术宰 ..奉 .,/】 ,山. 一一????????????????????????????????????????????????????一 与对照组检验值 /比值 例数 分组 一一???????????????????????????????????????????????????一 .士. 对照组 .幸木 .士. 组子痫前期轻度 .?宰 .士. 组子痫前期重度 .木宰 .士. 组子痫 . .士. 组血糖稳定 .木幸 .士. 组血糖不稳定 :塑兰 墨 .三:兰圭: 组妊娠合并血小堡堡尘 ???????????????????????????? ????????????????????????????????????????一。 .. 宰枣 宰 ., /啪锄 一????????????????????????????????????????????????????????一 值 值 分组 尸. . 对照组 尸. . 妊娠期高血压疾病组 . . 妊娠期糖尿病组 墨: :竺兰 妊娠合并血小板蕉尘塑 一 ?二??????????????????????????????‘?。???????? ‘????’?。。。??????????????一一 一一??????????????????????????????????????????????????????????一 研究论文 讨 论 孕妇外周血胎儿计数与胎儿缺氧 胎儿是胎儿造血系统建立和发育过程中胎儿血液循环中出现的 特征性细胞,缺氧刺激胎儿促红细胞生成素增加以增加携氧能力,因此血 液中不成熟红细胞增加,通过胎盘屏障进入母血中的计数增加,因 此孕妇外周血胎儿可作为胎儿缺氧的一个指标?。张国荣等研究幻 提示胎儿窘迫组新生儿脐血百分数和绝对值均显著增加,可以作为胎 儿宫内窘迫的辅助诊断指标。陈莉娟等研究慢性胎儿窘迫孕妇外周血 中数目明显增高。王江玲引报道例慢性胎儿窘迫孕妇外周血 计数.?.个/,明显高于正常妊娠组的计数.?.个 /。 胎儿脐血/比值与胎儿缺氧 胎儿脐血/比值指胎儿脐动脉收缩期峰值流速与舒张末期流速比 值,是目前较常用的反映脐动脉血流阻力的指标。严重的妊娠并发症或合 并症引起胎盘一胎儿血供减少,胎儿脐动脉舒张末期血流速度减小,胎儿 缺氧,/比值增高。等得出/比值?.的围生儿预后不良。 郑秀芬等报道,例/?围生儿死亡例,病死率.%,胎儿生长 受限、围生儿死亡、新生儿窒息、脐带异常及胎儿窘迫的发生率明显增高。 习斌蓉报道妊娠高血压组胎儿脐动脉血/比值较正常组增高,且胎儿 脐动脉血/比值与胎儿体重呈负相关。 孕妇外周血胎儿计数与妊娠高血压疾病 妊娠高血压疾病基本的病理变化是全身小动脉痉挛,全身各系统各脏 器灌流减少,因为子宫胎盘血流灌注减少引起胎儿缺氧,因此孕妇外周血 胎儿计数较正常增加。杨晓菊等报道 例重度子痫前期孕妇外周 血胎儿计数.?.个/,同时研究提示子痫前期可能存在 着某种胎一母细胞传输紊乱机制,从而导致胎儿细胞漏入母体并与胎盘植 入缺陷及滋养细胞不能有效侵入蜕膜层重铸母体螺旋动脉有关,表明侵入 母体的数量与子痫前期的发生发展存在密切的联系。仇妹等?报道 名轻度妊高征孕妇外周血胎儿计数.?.个/, 名中度妊高征孕妇外周血胎儿计数.?.个/,研究论文 名重度妊高征孕妇外周血胎儿计数.?.个/,各 妊高征组孕妇外周血胎儿计数比对照组明显增高。本研究和以上研究 结果相似,提示随着孕妇外周血胎儿计数明显增加,妊娠高血压疾病 程度加重,胎儿缺氧程度加重。 孕妇外周血胎儿计数与妊娠期糖尿病 年一研究发现?妊娠期糖尿病孕妇外周血有核红细胞数 量比正常孕妇明显增加。报道引孕妇外周血和胎儿脐血中的 促红细胞生成素和胎儿计数比非孕妇外周血中明显增加。 报道鲫妊娠期糖尿病孕妇胎盘退行变明显,其外周血胎儿 计数及胎儿缺氧情况比正常孕妇明显增加。由于孕妇空腹血糖较非孕 时低,患有妊娠期糖尿病的孕妇如不及时监测并控制血糖,容易出现低血 糖或酮症酸中毒。本研究提示妊娠期糖尿病患者母血中数量增加, 而当患者外周血中数量明显增加时,提示患者血糖不稳定而且已并 发低血糖或酮症酸中毒,胎儿已经有缺氧存在。 孕妇外周血胎儿计数与妊娠合并血小板减少 妊娠合并血小板减少最常见的原因是妊娠合并特发性血小板减少性 紫癜和妊娠期血小板减少症,妊娠后发病的与因临床 症状不明显而不易鉴别,常表现单纯血小板减少,患者孕期一般无临床症 报道眩们 状,如无其他合并症或并发症,胎儿一般无缺氧表现。 与患者胎儿早产率无显著差异,而其他严重疾病继发血小板减少患者新 生儿异常增加。本研究提示患者外周血中数量无明显变化。 孕妇外周血胎儿计数与胎儿脐血/比值 ? 研究表明晗?,产前多普勒监测舒张期脐血流速度减 慢的胎儿,出生时脐血胎儿计数增加并持续存在于新生儿血循环中。 本研究得出孕妇外周血胎儿计数与胎儿脐血/比值两者呈正相关。 提示患有妊娠合并症或并发症的孕妇外周血胎儿计数明显增加时,存 在胎盘一胎儿血供减少,胎儿缺氧,需采取积极治疗措施,必要时终止妊 娠。研究论文 结 论 以上研究显示妊娠期高血压疾病子痫前期和发生子痫组的患者母 血中计数和胎儿脐血/比值均比正常孕妇增加,提示当母亲患有 子痫前期和子痫时,胎儿存在不同程度的缺氧。当动态检测母血中 计数明显增加时,提示疾病程度加重,需及时采取干预措施,必要时终止 妊娠。 妊娠期糖尿病患者母血中计数比正常孕妇增加,动态监测到 孕妇外周血中计数明显增加时,提示血糖控制不理想,患者可 能出现低血糖或酮症等并发症,而且出现胎儿窘迫,需及时采取有效治疗 措施,减少母儿并发症。 妊娠合并特发性血小板减少性紫癜和妊娠期血小板减少症 时,因表现单纯血小板减少,临床症状不明显,胎儿一般无缺氧表 现。但当患者患有一些严重并发症或合并症继发血小板减少时,孕妇外周 血中数量是否增加与合并症或并发症是否影响胎儿胎盘血液供应 有关。 孕妇外周血中数量增加和脐动脉血流阻力增加有关,当孕妇 合并或并发其他可能影响胎儿胎盘血液供应的疾病时,其外周血中 数量增加。分离纯化方法复杂,经济成本昂贵,使利用孕妇外周 血中胎儿细胞进行产前诊断的技术目前只停留在阶段。因此寻找一 种简便、准确、经济的分离纯化孕妇外周血中胎儿细胞的技术是优生遗传 学者们一直在积极研究的问题。 一孕妇外周血中的胎儿成分 目前已发现的孕妇外周血中胎儿细胞有合体滋养细胞、胎儿淋巴细胞、胎儿 粒细胞、胎儿有核红细胞 ,综 述 等。其中胎儿粒细胞因不易于和母体粒细胞鉴别,在产前诊断中应用很 少。 滋养细胞 早在世纪,德国病理学家在死于子痫的孕妇肺中首先发现 滋养层细胞。滋养层细胞形态较大比其他细胞易于鉴别,但其在早期多分 布于肺组织中,于体循环中常难以发现,又由于妊娠妇女滋养层细胞缺 乏特异性抗体,因此孕妇外周血中的滋养细胞难以分离及富集。国外学者 有报道瞄用介电泳和芯片实验技术可将滋养层细胞从母血中分离 出来,该研究被认为是非侵入性产前诊断的新趋势。 胎儿淋巴细胞 淋巴细胞比滋养细胞容易分离,并可在体外培养,易于收集,但由于淋 巴细胞在孕妇产后卜年内都有可能存在,不适合用于第二次及以上的妊 娠妇女的产前诊断,其应用有一定局限性。 胎儿有核红细胞 经过几十年的大量的研究,胎儿有核红细胞是目前被认为最理想的孕 妇外周血中胎儿遗传物质来源的细胞怕。 胎儿有核红细胞是胎儿造血系统建立和发育过程中胎儿血液循环中 出现的特征性细胞,胎儿有核红细胞含有胎儿基因的全部遗传信息,可直 接进行遗传学分析,其平均寿命较短,适合用于第一次及多次妊娠妇女的 产前诊断,而且能表达多种相对稳定特异性抗原,如转铁蛋白受体、 受体、多种胎血红蛋白肽链 毛,这些都有利于对细 胞进行分类、鉴别和富集。 二孕妇外周血胎儿有核红细胞的检出时机 孕早期胎儿血液中有核红细胞含量丰富,但通过胎盘屏障进入到母血 中的有核红细胞的含量很少,而且随着孕周的增加,胎儿造血系统逐渐发 育和完善,胎儿血液中有核红细胞逐渐减少,到孕足月时进入到母血中的 有核红细胞的含量更是微乎其微。因此选择合适的时机采集孕妇外周血进 行胎儿有核红细胞的的提取是实验成功的重要前提。 研究发现早在孕周时就可以从母体外周血分离到胎儿有核红细胞 订,其数量在孕?周最多,以后随孕周增长逐渐减少哺。 研究表明?孕周是挑选胎儿有核红细胞进行无创产前诊断的最佳时期。综 述 近年来的研究显示,在胎儿和胎盘发生病理性改变时,孕妇外周血中 数量较正常妊娠增加们。研究显示妊娠高血压重度子痫前期孕妇外 、’ 周血中数量较对照组明显升高?。劓。国内外研究资料显示 可作为胎儿缺氧及胎儿窘迫的一个指标。国外研究资料显示乳?妊娠期 糖尿病孕妇外周血有核红细胞数量增加。因此检测一些病理妊娠孕妇外周 血胎儿有核红细胞的数量可以评估预测疾病发展程度,同时其数量的明显 增加又可以更容易地获取,为孕妇外周血胎儿有核红细胞在产前诊断中作 用的研究提供更方便的实验条件。 三孕妇外周血胎儿有核红细胞的检测方法 孕早期胎儿血液中有核红细胞含量丰富,但透过胎盘进入到孕妇外周 血中的胎儿有核红细胞数量很少,与母血中有核细胞之比为 /一/眩?,需特殊的方法才能检测得到。目前已知主要的检测方法有 荧光激活细胞分选法、磁激活细胞分选法、免疫磁珠分离 法、密度梯度离心法、流动分离、选择性红细胞裂解、凝集素和其他方法。 目前没有确定有一种简便经济的、准确度较高的用于分离纯化孕妇外周血 胎儿有核红细胞的方法。 荧光激活细胞分选法即流式细胞计数法原理是用荧光染 料标记特异性的单克隆抗体,与相应的抗原识别,然后通过细胞分 选器将从整个细胞群体中分离出来。常用的有核红细胞表面抗原有: 转铁蛋白受体、血型糖蛋白、血栓敏感素受体及 、。由于至今尚未发现任何一种特有的表面抗原,故常运 用多种表面抗原进行综合筛选。这种方法分离出的胎儿有核红细胞纯度高, 但价格昂贵,操作复杂,临床不宜推广。 磁激活细胞分选法原理是用特异性的单克隆抗体与 抗原识别,将抗体用磁珠标记,在外加磁场的作用下,磁激活细胞分选器 可将样品中带磁与不带磁的细胞分开,以达到分离纯化的目的。此种方法 简便、省时,而且可在短时间内分离大量及多个样品,但分离效率不及 。报道眩 取名产前唐氏筛查高危的孕妇外周血,用分 离富集%卜三体综合征胎儿细胞准确性高于用%,与“金 标准”核型分析相比敏感性为%。 密度梯度离心法该方法是根据胎儿细胞与母体细胞在体积、密综 述 度、沉降系数、渗透压等方面不同,通过离心分离出胎儿细胞。这种方法 经济简便,获取细胞比例高,容易在临床推广,但精确度稍差,可作为实 验前的筛选方法,然后结合其他方法如、或显微操作,才能较好 的获得胎儿有核红细胞。当前应用较成熟的密度梯度离心法主要有一倍密 度梯度离心法、二倍密度梯度离心法及不连续三倍密度梯度离心法。文献 表明,二倍密度梯度离心法效果最佳,配以适宜的浓度可大幅度提高胎儿 有核红细胞分离率心引。 四检测孕妇外周血胎儿有核红细胞在优生优育中的应用 孕妇外周血胎儿计数与高危妊娠 胎儿是胎儿造血系统建立和发育过程中胎儿血液循环中出现的 特征性细胞,缺氧刺激胎儿促红细胞生成素增加以增加携氧能力,因此血 液中不成熟红细胞增加,通过胎盘屏障进入母血中的计数增加,因 此孕妇外周血胎儿可作为胎儿缺氧的一个指标副。早在年 乜们研究发现子宫胎盘血流阻力指数增高的孕妇胎儿脐血有核红 细胞数量增加,而且与胎儿缺氧、高碳酸血症、酸中毒及高乳酸血症有关。 研究表明瞳引,产前多普勒监测舒张期脐血流速度减慢的 胎儿,出生时脐血胎儿计数增加并持续存在于新生儿血循环中。张国 荣等研究提示胎儿窘迫组新生儿脐血百分数和绝对值均显著增加, 可以作为胎儿宫内窘迫的辅助诊断指标。陈莉娟等研究慢性胎儿窘迫 孕妇外周血中数目明显增高。胎儿脐血/比值指胎儿脐动脉收缩期 峰值流速与舒张末期流速比值,是目前较常用的反映脐动脉血流阻力的指 标。严重的妊娠并发症或合并症引起胎盘一胎儿血供减少,胎儿脐动脉舒 张末期血流速度减小,胎儿缺氧,/比值增高。等心旬得出/比 值?.的围生儿预后不良。郑秀芬等心报道,例/?围生儿死亡 例,病死率.%,胎儿生长受限、围生儿死亡、新生儿窒息、脐带异常 及胎儿窘迫的发生率明显增高。习斌蓉报道心胡妊娠高血压组胎儿脐动脉血 /比值较正常组增高,且胎儿脐动脉血/比值与胎儿体重呈负相关。 .孕妇外周血胎儿计数与妊娠高血压疾病 妊娠高血压疾病基本的病理变化是全身小动脉痉挛,全身各系统各脏 器灌流减少,因为子宫胎盘血流灌注减少引起胎儿缺氧,因此孕妇外周血 胎儿计数较正常增加。杨晓菊等报道? 例重度子痫前期孕妇外周综 述 血胎儿计数.?.个/,同时研究提示子痫前期可能存在 着某种胎一母细胞传输紊乱机制,从而导致胎儿细胞漏入母体。仇妹等 报道名轻度妊高征孕妇外周血胎儿计数.?.个/, 名中度妊高征孕妇外周血胎儿计数.?.个/, 名重度妊高征孕妇外周血胎儿计数.?.个/, 各妊高征组孕妇外周血胎儿计数比对照组明显增高。以上研究结果提 示随着孕妇外周血胎儿计数明显增加,妊娠高血压疾病程度加重,胎 儿缺氧程度加重。 .孕妇外周血胎儿计数与妊娠期糖尿病 年卜 研究发现鲫妊娠期糖尿病孕妇外周血有核红细胞数 量增加。报道引孕妇外周血和胎儿脐血中的促红细胞生成素 和胎儿计数比非孕妇外周血中明显增加. 报道乜?妊娠期糖尿病孕妇胎盘退行变明显,其外周血胎儿计数及胎儿 缺氧情况比正常孕妇明显增加。由于孕妇空腹血糖较非孕时低,患有妊娠 期糖尿病的孕妇如不及时监测并控制血糖,容易出现低血糖或酮症酸中 毒。以上研究提示当患者外周血中数量明显增加时,患者血糖控制 不稳定而且已并发低血糖或酮症酸中毒,胎儿已经有缺氧存在。 .孕妇外周血胎儿计数与妊娠合并血小板减少 妊娠合并血小板减少最常见的原因是妊娠合并特发性血小板减少性 紫癜和妊娠期血小板减少症,妊娠后发病的与因临床 症状不明显而不易鉴别,常表现单纯血小板减少,患者孕期一般无临床症 报道盟朝 状,如无其他合并症或并发症,胎儿一般无缺氧表现。 与患者胎儿早产率无显著差异,而其他严重疾病继发血小板减少患者新 生儿异常增加。孕妇外周血胎儿计数与妊娠合并血小板减少的关系,目前国 内外文献未见有报道。 以上研究提示当检测到有合并症或并发症的孕妇外周血胎儿有核红细 胞明显增加时,提示患者病情加重且存在胎儿宫内乏氧,需及时采取干预 措施,必要时及时终止妊娠,因此可以推测母血中胎儿计数可作为判 定妊娠并发症或合并症严重程度以及评价临床治疗效果指标。 胎儿染色体异常的筛选 国内有研究报道臼训,胎儿异常时,母血中胎儿平均数是正常胎儿的综 述 倍,例三体胎儿母血中胎儿平均数是正常胎儿的?倍。 报道?妇名怀卜三体患儿的孕妇外周血中数目胎儿数量为 ?/脚:比正常孕妇明显增多。提示如果把母血中胎儿计数增加作 为三体胎儿筛查的一项指标,结合唐氏筛查三联生化检查及超检查, 可能会减少三体产前筛查结果的假阳性率。 产前诊断 目前,常用的产前诊断胎儿染色体异常的方法如羊水穿刺、绒毛穿刺 及脐静脉穿刺均为有创伤性检查,检查的确诊率高,但宫内感染和流产是 其主要并发症,这些并发症的出现成为医患纠纷的潜在因素,从而阻碍有 创产前诊断技术的进一步发展。近年来,随着聚合酶链反应、荧光 原位杂交技术和引物介导原位标记术等分子技术的建 立和完善,利用孕妇外周血胎儿细胞进行无创产前诊断成为优生遗传研究 的热点,等?用法成功诊断出了一三体和卜三体 胎儿。任景慧等口应用磁激活细胞分选法从母血中分离胎儿有核红细胞做 监测判定胎儿性别,结果提示判定男胎的敏感度为%,特异度为 .%,判定女胎的敏感度为.%,特异度为%。相文佩等研究?提 示血清三联筛查、超声检查结合病史筛选出高危孕妇,然后利用母血中胎 儿有核红细胞进行多重引物原位杂交监测细胞染色体,可作为快 速、无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式,并可为其他胎儿染色体基因 异常或者宫内感染的无创性产前诊断提供参考。 问题与展望 众多国内外学者研究提示,利用分子技术检测孕妇外周血胎儿有核红 细胞的基因及染色体,有望成为无创产前诊断胎儿基因及染色体异常的新 的方法之一,但由于孕妇外周血胎儿细胞含量很少,其分离和纯化技术复 杂,价格昂贵,这些检测技术目前只处于实验室研究阶段,尚不能在临床 推广普及。因此寻找一种经济、简便、准确的外周血胎儿有核红细胞分离 及纯化方法是学者们仍在积极探索的问题。 国内外学者的研究显示,孕妇外周血中数量增加和脐动脉血流 阻力增加有关,当孕妇合并或并发其他可能影响胎儿胎盘血液供应的疾病 时,其外周血中数量增加。动态监测一些病理妊娠母血中 计数可以评估预测疾病发展程度,指导临床治疗。同时其数量的明显增 加’’’’’。。。。。’。。。。’。。。。。’。。’。。。。’。。。。。。。。。。。。。。。’。。。。’。。。’。’。。。。。。。。。’ 。’’?’一??~综 述 又可以更容易地获取,为孕妇外周血胎儿有核红细胞在产前诊断中作用的 研究提供更方便的实验条件。 参考文献 乐杰主编.妇产科学.第七版,北京:人民卫生出版社,: 刘昱,乔福元.孕妇外周血胎儿有核红细胞及其对胎儿宫内窘迫预测研 究进展.中国优生与遗传杂志,,: , ,?, , ,,:卜 .?, ,,,: ,? , , : ,,:? ,。 , ,?】啊 .,,:?, ,:?, , 马旭,王毅,王琳.经母血采集胎儿细胞进行产前诊断的的最佳时机探 讨.中华妇产科杂志,,:?, ,? , : 综 述 ,:一 杨晓菊,徐金娥,赵金霞.孕妇外周血胎儿有核红细胞数与胎儿及胎盘 异常关系.青岛大学医学院报,:? 杨晓菊,赵金霞.重度子痫前期病人血清体液免疫状况与外周血 水平关系.青岛大学医学院学报.,:一 ,, ,,,:? 仇姝,李芹,王建军.孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量与妊娠高血压 综合征的关系.中国优生与遗传杂志,,:卜 , , 锄 ; :?.: , , , ,,: 张国荣,刘昕,董洪美 .脐血乳酸及有核红细胞测定与围产期母 儿缺氧的关系.中国优生与遗传杂志,,: 陈莉娟,朱剑文,邹丽.孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量与胎儿窘 迫的关系.实用医学杂志,,: ,,, ,. ::?., , ,, , :: 综 述. , , ,,::? :, , ,:. , , ,. :. ,,:, , , .,,:?, , ,,.?,,, .::? , ,.,:, , ,/ :? ,,: 郑秀芬,姚云芝,史丽娟.结合评估脐动脉血流/?围产儿预 后.中国优生与遗传杂志,,:一 习斌蓉,黄淑晖,陈小青, .妊娠期高血压疾病患者脐动脉/ 综 述 比值与围生儿结局分析.中国妇幼保健,儿, , , .,,::一 祝琳,陈汉平.母血中胎儿有核红细胞数量与胎儿异常的关系.现 代妇产科进展,,:. , , , ,,:? ,?.,,: .应用磁激活细胞分选法从母血中分 任景慧,赵跃宏,徐宏里, 离胎儿有核红细胞做行无创性产前诊断的研究.中国妇幼保 健,,:? 相文佩,温子娜,水丽君 .利用母血中胎儿有核红细胞结合血清 筛查和三维超声无创性产前诊断唐氏综合征.中国妇幼保 健,,:一 致 谢 致 谢 在研究生学习即将结束之际,向给予我帮助与支持的老师,朋友及同 仁们致以最诚挚的感谢与问候。 首先,感谢我的导师李陈莉教授的悉心指导。陈老师渊博的知识,严 谨的治学态度给我留下了深刻的印象,使我受益匪浅。您热情,细心,从 本论文的选题,科研设计到修稿成稿,都凝聚了您的心血和汗水。谨向陈 老师表示最诚挚的敬意和最忠心的感谢,祝您工作顺利,全家幸福。 感谢导师组成员的各位老师,在您们的帮助下,使我顺利完成了课题 的研究。 感谢承德医学院附属医院中心实验室的邢恩鸿等老师在我标本的处 理及留存上给予的无私帮助。 感谢承德医学院检验科张茉莉、武英伟等老师在细胞计数过程中给予 的无私帮助。 感谢承德医学院附属医院产科的同事们在留取标本时给予的帮助。 最后祝愿所有帮助过我的老师、同事、朋友、同学,祝你们天天快乐, 事事如愿。个人简历 个人简历 一、一般情况 姓名王志宏 性别女 民族汉族 出生年月日年月日 籍贯河北省景县 二、个人经历: 年月毕业于河北医学院临床医疗系; 年月一年月承德医学院附属医院妇产科临床医疗; 年月至今承德医学院附属医院产科临床医疗; 三、发表论文: 年围绝经期睡眠障碍《中华妇产科杂志》第一作者。 应用激素替代治疗的围绝经期妇女抑郁焦虑症状调查,《中国妇幼 保健》。第二作者。 绝经期与抑郁、焦虑障碍的关系。《中国妇产科临床杂志》第一作 者。 ,.围绝经期门诊患者抑郁焦虑症状调查。承德医学院 学报。第一作者。 年月 带器妊娠人工流产例分析承德医学院学报。 四、承担或主研课题情况 年承德市科委课题《预防人工流产不全方法探讨》。