【doc】T细胞亚群检测及其在传染病中的应用
T细胞亚群检测及其在传染病中的应用 与利福平口服相对比结果表明.接受头孢
三嚷噻肟(75侧),利福平(盯伪)及对照组
(1?恻)在用药后1周治愈率分别为97呖,
25嘶和20啼.因而认为,头孢兰嗪嚷肟1次
注射预谤有效率优于利福平.
'
参考资料
1l~ein加etalIPediatries1986~78:959 2.Ghtaella-BorradoriAetalfArchIntrnMed 1988~148:754
3.Sioho1mAGINEnglMed1988t319:3~ 4.GrlffissJMetal.j1nf州Dis1977136:
733
S.Grecnow/~odBMetaIIBrMed1976I1: 747
6.Be?t!erB'a1,E-,i1985226:869 7.WaageAe8I,1~neet1987}i:3S5 8.LeTPeta1f,ExpMed1988t167:1743 9.So,toMKetaitJInfectDs1g76133: 506--
10.P0w自rsDReta】;NEngl,Med1987t317 :571
11.EdwardsMSal:,Pediatr198l,99:54O 12.ValmariPeta1ILancet198如1:74I
13.ViladrlchPFet81lArch!nternMed19B6} 1圯38O
14.BothuP}Lanai1955I:5毛
15.ScharfmanWBetB】:NEagl,Med1979~
300:1277
16.Bjorva~aBetal,BrMed,J984~288:439 17.Sch毗ftzBetalIIatlcet1988,!:l239 _1T细脆亚群检测及其在传染病中的应用
同济医科太学附属协和医院揭直华综述仓氍鄂审校
铺薹牵,遗丁T琳巴瓤雎单克陆抗体的毒手种费亚其盍卫,蚌台了目前辑用单克体对人体组虮
与体袁中T摹廑谨行壁群撞甜曲康疆厦磐神方法?重点介绍丁免盎费光{皇.番砷醇免盘染色,免受叠妊染色,
补傩杀茜赫置多种花玮试瞻.并EI慢性话动性肝觉,梵潜痛夏其他赛痈为耐,_豳违丁刺用T钿船单克蠹抗:
体存T瓤信受群骨类在樟案相研兜中时作用.-'.'
'
-..
不{罨瓣鲍的T淋巴细胞亚群,其表面抗CD"配以其抗原序号表示,挪主要钟鼬触 原缝梅存在着一定的整异.识蹦这些表面标助/诱导T细胞的抗e,针对杀伤/挪制T 志,赢髓干区分各功能群的淋巴细胞.抗T纽胞的抗C以及针对全T细胞的抗GD 淋巴细胞单宽隆抗体的产生,使T细胞的遗等在外周血中.抗C可识另旺约6O嘶 种分类成为可能近几年来.利用单克隆抗体的T淋巴细胞群,抗CDs可识别约3O一4嘞
进行T细胞亚群分类已在基础医学及临床医的T细胞群,而抗CD.剜能同时识剥上遗两
学研究申跌得了广泛应用.尤其在肿瘤,个皿群的T细胞,约占正常凡外闶血淋巴细
移植目身免疫性疾病以及各种转染病姆诊饱的95雅以上.观察备亚群比率,全T缅胞绝
断,礁瘸l机理及治疗等方面均显示了十分重对值及抗CD/抗cDs比值,有助于了
解机
要孵作用.体细胞免疫状态.本文将分剐阐述T纲胞哑 自从Ku:等"'率先从杂交瘤细匏获得群的各种检测方法及其在持染病中的盛用 鼠抗大T潍也跚胞单克隆抗体以来,国内外.i'
已研l制_出当稗不两功静的'T淋巴细胞单克隆?:,,砸删凌,..…! 执律.;由_荸研究者及生产厂家不同,其名称(一)体液中T细胞亚释梭渊崔病 很不-二皱.现倾向于根据刺激产生该种单克理情况下,T淋巴细胞数量凌各亚群忧率变
隆抗体的白细腿分化抗原(CD),以"抗化可表现在外周血,脑脊l液,,骨髓及备种替
?1'8?
ln渡.苫体液标本中台淋细胞较多时,
可直接取上述各种标本检测,但多数情况
下需以泛影葡胺蔗聚糖等行密度梯度离心,
预先分离出富含淋巴细胞的单个核细胞
(MNC).然后选择适宜的免疫学技术,
或涂制细胞片或直接在试管帝进行检测
1.免疫荧光法0调节MNC浓度至
1×10/rnI,荧光物质(荧光索或罗丹明)
标记T细胞单克隆抗体(McAb)或标记抗
鼠IgG.T淋巴细胞直接(直接法)或间接
(间接法)同荧光抗体结合,结果在荧光显
激镜或荧光激活细胞分类器(F.^CS)下计
数
2,酶免疫染色常规分离MNC,取
细胞浓度1×10一1O./ml涂片,丙酮或戊
二醛固定淋巴细胞通过中间抗体与酶抗体
结台物或酶抗酶复台物连接,在相应J匿物作
用下显色,通过普通光镜诗数阳性率通常
所用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)与碱 性磷酸酶(AP).
(!)阅接酶免症染色",;用HRP或
AP橱记抗鼠IgG,以T细胞McAb为桥抗 体连接淋巴细胞与酶抗体结合物.在底物作 胃下,黼性细胞显色.
(21非标记酶染色技术":主要有辣 根过氧化物酶抗辣根过氧化物酶(PAP)染 色与碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶fAPAAP1 染色根据酶抗酶复台物种类不同,分别选 释不同的中间抗体,将淋巴细胞,T细胞 McAb与酶抗酶复台物连接,然后在相应底 物作用下疆色.
(0亲和索生物素酶复合物(ABC) 法:淋巴细胞通过T细胞McAb与生物 豢标记柏抗鼠lgG同ABC结合,后者经醉 j薏物作用显色
此外,还有PAP与ABC联合应用 的PAP-ABC技术等在各种酶染色中, 随簧中间抗体的增多,其放大效应随之增 大.敏感性也随之提高,但非特异性染色也 会相应增加.
0.娩瘦金银染色I,s)"'掺f
述方法制符细胞'.淋巴纲自借rr细胞克 隆抗体与标记肢体袅的抗鼠IgG结合. 予金的催化作.显影液中还原剂使银离子 还原成务弱银,并沉淀于金颗粒周嗣.呈列 癌黑色颗粒光髓下计数阳性率. 4.补体杀伤试验淋巴细胞(2×
1O"/ml1预先尉T细胞Mc作用,然后加 入免血清补体,经_辛;,体作用,T细胞细胞膜 受损或通透性增加,以台盼蓝等染色即可着 色.光镜下计数蒉龟粥胞百舟数蚍确定桶 T淋巴绍胞亚群比率
5.各种花环试验以某种细胞或细菌 作指示细胞,道过一定的连接物与淋巴细胞 形成可借观察的花环现已建立起多种花环 试验
(1)醛化托细胞花环试验:经醛基
化的红细胞与T细胞McAb连接成指示. 当淋巴细胞与之结合时,红细胞围绕淋色细 胞形成玫瑰样花环.染色后光镜下观察,凡 淋巴细胞周暾挂4个,卜钉细胞者为阳性 缃胞
(21间接抗人球蛋白花环试验:
以结合了抗鼠IgG灼醛化红细胞为指示细 胞.淋巴细胞借T细胞McAb同指示细胞 结合形成花环,光镜下检查.凡结合3个以 上红细胞的淋巴细胞为阳性
(3)SPA一红细胞花环试验':以葡
萄球菌A蛋白(SPA)取代上法的抗鼠IgG sPA上有IgG舶Fc受体,因而可与IgG 型的T细胞McAb结合,从而使红细胞同 淋巴细胞结合成花环.结果断与间接抗k 球疆白花昴试验相同.
(4)SPA菌花环试验n:以葡萄球
菌为指示细胞.SPA同T细胞McAb或抗 鼠IgG结台,然后直接或间接她与淋巴鲴胞
形成花环.染色后油镜下观察凡周围连接 1O个以上葡萄球菌的淋巴细胞为阳性细胞. (二)组织切片中T细胞矗群检测
由于T淋巴细胞表面抗原较脆弱,组织块不 ?169-
宜行常规包埋技术制片,而需采用冰冻切 片,并分别选择免疫荧光技术,酶免疫技术 及金银染色法等进行检测.
二,T细胞亚群分樊在传染病中的应用 现已阐明,多种传染病的发病除病原直 接作用外,常与免疫功能失衡有关,如慢性 活动性肝炎和艾滋病等.T细胞亚群的研究 在这些疾病的发病机理,诊断及预后判断等 方面均具有十分重要的意义.
(一)病毒性疾病
1.慢性活动性肝炎(CAH):Barnaba 等"研究发现,CAH患者外周血C细 胞增高,c细胞降低,c/cD8'细胞
比值上升.Yamads等注意到肝脏坏死 组织周围可见T细胞浸润,特别是T杀伤细 胞,常同古HBsAg与HBeAg的肝细胞接 近.通过电镜观察发现,T杀伤细胞常位于 肝窦,并移至Dise间隙与肝细胞之间.还 可见弼,含病毒抗原的肝细胞周围有r杀伤 细隐包围.进一步研究表明HBeAg帑性 的CAH患者,其CD细胞与CD8细胞 侵入门静爨与小叶内者显着多于抗-HBe阳 性的CAH患者.
2.艾滋病.免疫功能普遍低下是艾滋病 患者最明燕的特征.Schvoff等"研究了3 组临床表现不同的丈滋病患者.结果表明, 所有各组患者外周血中C细胞均显着低 于正常对照组,而CDs细胞赠在正常范围 内,CD4~/CD细胞比值下降,其中以机 会性感染者最为严重.研究证实,艾滋病 病原HTLV—I主要的攻击对象为CD细 胞,以致该类细胞的数目与功能均明显下 降.Gailton等"对HTLV—I感染者脏器 免疫病理研究表明,在其肺,淋巴结,神 经组织,胍肉,食道等处均有广泛性淋巴细 胞浸润且以C细胞为主.'
此外,在传染性单棱维胞增多症,流行 性出血热,巨细胞病毒感染及麻疹急性期均 可表现为cDt细胞下降,CDe细胞升高 ?
170?
蹦!乏CD/CD比值下降.
一
)细菌性感染
Bach等人对不同类型麻疯患者的T细 胞亚群研究发现t,瘤型麻疯病人CD,细 胞下降,CD细胞上升,而结核样型则 CD.细胞在正常范围内
Sratsch等研究表明",结校性胸膜 毙患者胸水中CD/CDs+优倒明显增加, 而重症结核病患者外周血中该比倒下降 (三)寄生虫病
Colley等研究了曼氏血吸虫病患者
外周血T细胞亚群,发现肝脾肿大的患者,其
CD.与CD细胞均较正常人显着下降,
丽肠道曼氏血吸虫感染者各T组胞亚群无明
显变他.
还有研究表明,弓j蓼体病,疟疾,利什
曼病等都表现为CD细胞上升,C细
胞及CDC比值下降.
参考瓷料
1.KungPCeLaiIScience1979J92(2):l95,
20O
2.tovatPEe【aIlJ1mmno1Me蛐1979J
(1):37圳
3.LandayAetall[bid1P85;(3)|337,347
4.G啦出lreta】IAmIClinhthol1986, 86(6):756~759
5.SchreldexHetaI:JImmuaoIMethods1986I
98(2):283~285
6.P,aradisILetal|JHistochcmCytoctlem
1984,32(3)I358,360
7.Ro=ascoFetalIAmJainPath.I15, 84t3)304,3l6
8.ranVaIiweJetaI{Immunologyl%l}42 t1):157~I64
9.阵善率辱I免接学杂志1988}4(I)-49,52
10:gzdandTetaI?JImmunolMelodI1982J 55(2):213,2l9
L1.R伽SetaI}AcHaematI985,73t3); 140~144
12.由请蒋尊;北京甚辩太学I%7J19(6)-
们9~440
13BareshVetalICII丑ImmhnolImmu~opa- thoI1983~26(1):83,90
I4.YBmad~Getn1lGastro~nfero1Jpu1985? 20(5':44I~446
IS.ScbT0ffRWetal_ClinIn~aunolImmuno—
psthol1983I27(3):300,3I4
l6.KIatzmanPeta1tSoience1984l225657):
59~64
17.GulilonJMetaltAmJMed1987?82 f3):655,fill
18.BachMAetal_ClinpImm~nol1981; 44《3):491~500
19.ShlratsuchHctal,Ib]d1984;57(2):271,
278
20.ColIcyDGetalt&and1lmmenoI1983;
17《4):297~302
巴西紫癜热:流行病学和临床
1984年首次认识巴西紫囊热(Brazilian
parpuriefeverBPF).当时在巴西圣保罗
的一个小镇有iO个儿童发生了一起严重的暴
发性痰瘾其临床特点是高热,暇痛,呕
吐,出血性皮肤损害和休克.发病后的死亡
时间中位数为so#tb时.垒黼例均无脑膜
炎.曾拙,j,镇能i恻BPF患儿和一些非
BPF曲壤噗炎患儿的瘀点中分离到埃
及嗜血杆菌(Haemophilusaegyptius,
Hae).实验室证从流行病学角度番, 有特殊质休的Hae与BPF有关.在帕拉纳 的邻州发生过一次13侧的爆发,病死7例, 起初曾认为是由脑膜炎球菌所致.在全都8 个城镇中均见散发性病例.
1986年从流行和散发的BPF患儿的血 液及出血性脑脊液(CSF)中分离蓟Hae, 因而明确了BPF的病因.随后的研究表明, Hae中的1株单一的菌株被认为是BPF的 克隆,且对全部BPF的巴西病例都起作用. BPF的诊断条件列于表1,可用于流行病学 研究.
1987~1988年,圣保罗州拟诊和确诊为 BPF者11例,其中6僦(54骺)死亡.有 若干拟诊病例获得确诊,并证明了BPF克 隆苗珠.澳太剁亚也见2倒有BPF临床表 现的散发病例,其意义不明BPF患儿的 中位数年龄为30~36个月.全部病例,包括那 些临床意义不明的患者,年龄均?10岁. 袭1巴西紫蠢热的诊断参考条件
一
,
发热.9K,-~常无菌的体馋中(如血,CSF)~Y 离判赢患,I血杆菌柏境蓝生物蹙
或
=,1.3十月,10的急瘸患几,并伴有如下特点 时_
(1)发热38.5"0或更高
《2)废窘和/或堰吐
(3)有癍赢或紫?
《4)无盛腱毙的迹象
2.窟热前30天内尊靠息过埔腱毙
3.下萝摹2神瞌膜毙球曹试毪至步有一种明性; 《1)抗生蠢靖药前的血培拌
《2'血清班最怕抗埘定
4.萁拙的蜜砬富赞辩
(1)CSF中前白衄矗擞为100或不碉10e/~,培 养无细曹生长或病原茸(班感嗜血轩菌的壤爰生物 望甥I'前抗蓐一定胃I性
《2)已知曲病席苗(蠢蒜嗜血杆菌曲'囊生帽型戗 外)培弗胃I性
(3)已蜘时府蒜苗(瘴癌嗜血杆曹莳瑰聂生唧垂啻6 外)的血醇学试验阻性(挪暴有此毒件曲请) BPF多发生于气温较高的季节,冬季少见. 圣保罗州方圆几百蠼,居民31OO万人,有很 多大城市,并已高度工业化,每一个独立小 镇都发生过BPF,但主要见于农业小慎, 有人调查了3次孤立的爆发,认为结膜 毙和BPF有着显着的统计学关系,90骺的 BPF病人都惠过结膜炎.结膜炎的发作和 BPF的出现,其间隔时阈为1—6O天,平均 为7—16天.结膜炎为化脓性,不出血,每 一17I一