【doc】T细胞亚群检测及其在传染病中的应用

【doc】T细胞亚群检测及其在传染病中的应用 T细胞亚群检测及其在传染病中的应用 与利福平口服相对比结果表明.接受头孢 三嚷噻肟(75侧),利福平(盯伪)及对照组 (1?恻)在用药后1周治愈率分别为97呖, 25嘶和20啼.因而认为,头孢兰嗪嚷肟1次 注射预谤有效率优于利福平. ' 参考资料 1l~ein加etalIPediatries1986~78:959 2.Ghtaella-BorradoriAetalfArchIntrnMed 1988~148:754 3.Sioho1mAGINEnglMed1988t319:3~ 4.GrlffissJMetal.j1nf州Dis1977136: 733 S.Grecnow/~odBMetaIIBrMed1976I1: 747 6.Be?t!erB'a1,E-,i1985226:869 7.WaageAe8I,1~neet1987}i:3S5 8.LeTPeta1f,ExpMed1988t167:1743 9.So,toMKetaitJInfectDs1g76133: 506-- 10.P0w自rsDReta】;NEngl,Med1987t317 :571 11.EdwardsMSal:,Pediatr198l,99:54O 12.ValmariPeta1ILancet198如1:74I 13.ViladrlchPFet81lArch!nternMed19B6} 1圯38O 14.BothuP}Lanai1955I:5毛 15.ScharfmanWBetB】:NEagl,Med1979~ 300:1277 16.Bjorva~aBetal,BrMed,J984~288:439 17.Sch毗ftzBetalIIatlcet1988,!:l239 _1T细脆亚群检测及其在传染病中的应用 同济医科太学附属协和医院揭直华综述仓氍鄂审校 铺薹牵,遗丁T琳巴瓤雎单克陆抗体的毒手种费亚其盍卫,蚌台了目前辑用单克体对人体组虮 与体袁中T摹廑谨行壁群撞甜曲康疆厦磐神方法?重点介绍丁免盎费光{皇.番砷醇免盘染色,免受叠妊染色, 补傩杀茜赫置多种花玮试瞻.并EI慢性话动性肝觉,梵潜痛夏其他赛痈为耐,_豳违丁刺用T钿船单克蠹抗: 体存T瓤信受群骨类在樟案相研兜中时作用.-'.' ' -.. 不{罨瓣鲍的T淋巴细胞亚群,其表面抗CD"配以其抗原序号表示,挪主要钟鼬触 原缝梅存在着一定的整异.识蹦这些表面标助/诱导T细胞的抗e,针对杀伤/挪制T 志,赢髓干区分各功能群的淋巴细胞.抗T纽胞的抗C以及针对全T细胞的抗GD 淋巴细胞单宽隆抗体的产生,使T细胞的遗等在外周血中.抗C可识另旺约6O嘶 种分类成为可能近几年来.利用单克隆抗体的T淋巴细胞群,抗CDs可识别约3O一4嘞 进行T细胞亚群分类已在基础医学及临床医的T细胞群,而抗CD.剜能同时识剥上遗两 学研究申跌得了广泛应用.尤其在肿瘤,个皿群的T细胞,约占正常凡外闶血淋巴细 移植目身免疫性疾病以及各种转染病姆诊饱的95雅以上.观察备亚群比率,全T缅胞绝 断,礁瘸l机理及治疗等方面均显示了十分重对值及抗CD/抗cDs比值,有助于了 解机 要孵作用.体细胞免疫状态.本文将分剐阐述T纲胞哑 自从Ku:等"'率先从杂交瘤细匏获得群的各种检测方法及其在持染病中的盛用 鼠抗大T潍也跚胞单克隆抗体以来,国内外.i' 已研l制_出当稗不两功静的'T淋巴细胞单克隆?:,,砸删凌,..…! 执律.;由_荸研究者及生产厂家不同,其名称(一)体液中T细胞亚释梭渊崔病 很不-二皱.现倾向于根据刺激产生该种单克理情况下,T淋巴细胞数量凌各亚群忧率变 隆抗体的白细腿分化抗原(CD),以"抗化可表现在外周血,脑脊l液,,骨髓及备种替 ?1'8? ln渡.苫体液标本中台淋细胞较多时, 可直接取上述各种标本检测,但多数情况 下需以泛影葡胺蔗聚糖等行密度梯度离心, 预先分离出富含淋巴细胞的单个核细胞 (MNC).然后选择适宜的免疫学技术, 或涂制细胞片或直接在试管帝进行检测 1.免疫荧光法0调节MNC浓度至 1×10/rnI,荧光物质(荧光索或罗丹明) 标记T细胞单克隆抗体(McAb)或标记抗 鼠IgG.T淋巴细胞直接(直接法)或间接 (间接法)同荧光抗体结合,结果在荧光显 激镜或荧光激活细胞分类器(F.^CS)下计 数 2,酶免疫染色常规分离MNC,取 细胞浓度1×10一1O./ml涂片,丙酮或戊 二醛固定淋巴细胞通过中间抗体与酶抗体 结台物或酶抗酶复台物连接,在相应J匿物作 用下显色,通过普通光镜诗数阳性率通常 所用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)与碱 性磷酸酶(AP). (!)阅接酶免症染色",;用HRP或 AP橱记抗鼠IgG,以T细胞McAb为桥抗 体连接淋巴细胞与酶抗体结合物.在底物作 胃下,黼性细胞显色. (21非标记酶染色技术":主要有辣 根过氧化物酶抗辣根过氧化物酶(PAP)染 色与碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶fAPAAP1 染色根据酶抗酶复台物种类不同,分别选 释不同的中间抗体,将淋巴细胞,T细胞 McAb与酶抗酶复台物连接,然后在相应底 物作用下疆色. (0亲和索生物素酶复合物(ABC) 法:淋巴细胞通过T细胞McAb与生物 豢标记柏抗鼠lgG同ABC结合,后者经醉 j薏物作用显色 此外,还有PAP与ABC联合应用 的PAP-ABC技术等在各种酶染色中, 随簧中间抗体的增多,其放大效应随之增 大.敏感性也随之提高,但非特异性染色也 会相应增加. 0.娩瘦金银染色I,s)"'掺f 述方法制符细胞'.淋巴纲自借rr细胞克 隆抗体与标记肢体袅的抗鼠IgG结合. 予金的催化作.显影液中还原剂使银离子 还原成务弱银,并沉淀于金颗粒周嗣.呈列 癌黑色颗粒光髓下计数阳性率. 4.补体杀伤试验淋巴细胞(2× 1O"/ml1预先尉T细胞Mc作用,然后加 入免血清补体,经_辛;,体作用,T细胞细胞膜 受损或通透性增加,以台盼蓝等染色即可着 色.光镜下计数蒉龟粥胞百舟数蚍确定桶 T淋巴绍胞亚群比率 5.各种花环试验以某种细胞或细菌 作指示细胞,道过一定的连接物与淋巴细胞 形成可借观察的花环现已建立起多种花环 试验 (1)醛化托细胞花环试验:经醛基 化的红细胞与T细胞McAb连接成指示. 当淋巴细胞与之结合时,红细胞围绕淋色细 胞形成玫瑰样花环.染色后光镜下观察,凡 淋巴细胞周暾挂4个,卜钉细胞者为阳性 缃胞 (21间接抗人球蛋白花环试验: 以结合了抗鼠IgG灼醛化红细胞为指示细 胞.淋巴细胞借T细胞McAb同指示细胞 结合形成花环,光镜下检查.凡结合3个以 上红细胞的淋巴细胞为阳性 (3)SPA一红细胞花环试验':以葡 萄球菌A蛋白(SPA)取代上法的抗鼠IgG sPA上有IgG舶Fc受体,因而可与IgG 型的T细胞McAb结合,从而使红细胞同 淋巴细胞结合成花环.结果断与间接抗k 球疆白花昴试验相同. (4)SPA菌花环试验n:以葡萄球 菌为指示细胞.SPA同T细胞McAb或抗 鼠IgG结台,然后直接或间接她与淋巴鲴胞 形成花环.染色后油镜下观察凡周围连接 1O个以上葡萄球菌的淋巴细胞为阳性细胞. (二)组织切片中T细胞矗群检测 由于T淋巴细胞表面抗原较脆弱,组织块不 ?169- 宜行常规包埋技术制片,而需采用冰冻切 片,并分别选择免疫荧光技术,酶免疫技术 及金银染色法等进行检测. 二,T细胞亚群分樊在传染病中的应用 现已阐明,多种传染病的发病除病原直 接作用外,常与免疫功能失衡有关,如慢性 活动性肝炎和艾滋病等.T细胞亚群的研究 在这些疾病的发病机理,诊断及预后判断等 方面均具有十分重要的意义. (一)病毒性疾病 1.慢性活动性肝炎(CAH):Barnaba 等"研究发现,CAH患者外周血C细 胞增高,c细胞降低,c/cD8'细胞 比值上升.Yamads等注意到肝脏坏死 组织周围可见T细胞浸润,特别是T杀伤细 胞,常同古HBsAg与HBeAg的肝细胞接 近.通过电镜观察发现,T杀伤细胞常位于 肝窦,并移至Dise间隙与肝细胞之间.还 可见弼,含病毒抗原的肝细胞周围有r杀伤 细隐包围.进一步研究表明HBeAg帑性 的CAH患者,其CD细胞与CD8细胞 侵入门静爨与小叶内者显着多于抗-HBe阳 性的CAH患者. 2.艾滋病.免疫功能普遍低下是艾滋病 患者最明燕的特征.Schvoff等"研究了3 组临床表现不同的丈滋病患者.结果表明, 所有各组患者外周血中C细胞均显着低 于正常对照组,而CDs细胞赠在正常范围 内,CD4~/CD细胞比值下降,其中以机 会性感染者最为严重.研究证实,艾滋病 病原HTLV—I主要的攻击对象为CD细 胞,以致该类细胞的数目与功能均明显下 降.Gailton等"对HTLV—I感染者脏器 免疫病理研究表明,在其肺,淋巴结,神 经组织,胍肉,食道等处均有广泛性淋巴细 胞浸润且以C细胞为主.' 此外,在传染性单棱维胞增多症,流行 性出血热,巨细胞病毒感染及麻疹急性期均 可表现为cDt细胞下降,CDe细胞升高 ? 170? 蹦!乏CD/CD比值下降. 一 )细菌性感染 Bach等人对不同类型麻疯患者的T细 胞亚群研究发现t,瘤型麻疯病人CD,细 胞下降,CD细胞上升,而结核样型则 CD.细胞在正常范围内 Sratsch等研究表明",结校性胸膜 毙患者胸水中CD/CDs+优倒明显增加, 而重症结核病患者外周血中该比倒下降 (三)寄生虫病 Colley等研究了曼氏血吸虫病患者 外周血T细胞亚群,发现肝脾肿大的患者,其 CD.与CD细胞均较正常人显着下降, 丽肠道曼氏血吸虫感染者各T组胞亚群无明 显变他. 还有研究表明,弓j蓼体病,疟疾,利什 曼病等都表现为CD细胞上升,C细 胞及CDC比值下降. 参考瓷料 1.KungPCeLaiIScience1979J92(2):l95, 20O 2.tovatPEe【aIlJ1mmno1Me蛐1979J (1):37圳 3.LandayAetall[bid1P85;(3)|337,347 4.G啦出lreta】IAmIClinhthol1986, 86(6):756~759 5.SchreldexHetaI:JImmuaoIMethods1986I 98(2):283~285 6.P,aradisILetal|JHistochcmCytoctlem 1984,32(3)I358,360 7.Ro=ascoFetalIAmJainPath.I15, 84t3)304,3l6 8.ranVaIiweJetaI{Immunologyl%l}42 t1):157~I64 9.阵善率辱I免接学杂志1988}4(I)-49,52 10:gzdandTetaI?JImmunolMelodI1982J 55(2):213,2l9 L1.R伽SetaI}AcHaematI985,73t3); 140~144 12.由请蒋尊;北京甚辩太学I%7J19(6)- 们9~440 13BareshVetalICII丑ImmhnolImmu~opa- thoI1983~26(1):83,90 I4.YBmad~Getn1lGastro~nfero1Jpu1985? 20(5':44I~446 IS.ScbT0ffRWetal_ClinIn~aunolImmuno— psthol1983I27(3):300,3I4 l6.KIatzmanPeta1tSoience1984l225657): 59~64 17.GulilonJMetaltAmJMed1987?82 f3):655,fill 18.BachMAetal_ClinpImm~nol1981; 44《3):491~500 19.ShlratsuchHctal,Ib]d1984;57(2):271, 278 20.ColIcyDGetalt&and1lmmenoI1983; 17《4):297~302 巴西紫癜热:流行病学和临床 1984年首次认识巴西紫囊热(Brazilian parpuriefeverBPF).当时在巴西圣保罗 的一个小镇有iO个儿童发生了一起严重的暴 发性痰瘾其临床特点是高热,暇痛,呕 吐,出血性皮肤损害和休克.发病后的死亡 时间中位数为so#tb时.垒黼例均无脑膜 炎.曾拙,j,镇能i恻BPF患儿和一些非 BPF曲壤噗炎患儿的瘀点中分离到埃 及嗜血杆菌(Haemophilusaegyptius, Hae).实验室证从流行病学角度番, 有特殊质休的Hae与BPF有关.在帕拉纳 的邻州发生过一次13侧的爆发,病死7例, 起初曾认为是由脑膜炎球菌所致.在全都8 个城镇中均见散发性病例. 1986年从流行和散发的BPF患儿的血 液及出血性脑脊液(CSF)中分离蓟Hae, 因而明确了BPF的病因.随后的研究表明, Hae中的1株单一的菌株被认为是BPF的 克隆,且对全部BPF的巴西病例都起作用. BPF的诊断条件列于表1,可用于流行病学 研究. 1987~1988年,圣保罗州拟诊和确诊为 BPF者11例,其中6僦(54骺)死亡.有 若干拟诊病例获得确诊,并证明了BPF克 隆苗珠.澳太剁亚也见2倒有BPF临床表 现的散发病例,其意义不明BPF患儿的 中位数年龄为30~36个月.全部病例,包括那 些临床意义不明的患者,年龄均?10岁. 袭1巴西紫蠢热的诊断参考条件 一 , 发热.9K,-~常无菌的体馋中(如血,CSF)~Y 离判赢患,I血杆菌柏境蓝生物蹙 或 =,1.3十月,10的急瘸患几,并伴有如下特点 时_ (1)发热38.5"0或更高 《2)废窘和/或堰吐 (3)有癍赢或紫? 《4)无盛腱毙的迹象 2.窟热前30天内尊靠息过埔腱毙 3.下萝摹2神瞌膜毙球曹试毪至步有一种明性; 《1)抗生蠢靖药前的血培拌 《2'血清班最怕抗埘定 4.萁拙的蜜砬富赞辩 (1)CSF中前白衄矗擞为100或不碉10e/~,培 养无细曹生长或病原茸(班感嗜血轩菌的壤爰生物 望甥I'前抗蓐一定胃I性 《2)已知曲病席苗(蠢蒜嗜血杆菌曲'囊生帽型戗 外)培弗胃I性 (3)已蜘时府蒜苗(瘴癌嗜血杆曹莳瑰聂生唧垂啻6 外)的血醇学试验阻性(挪暴有此毒件曲请) BPF多发生于气温较高的季节,冬季少见. 圣保罗州方圆几百蠼,居民31OO万人,有很 多大城市,并已高度工业化,每一个独立小 镇都发生过BPF,但主要见于农业小慎, 有人调查了3次孤立的爆发,认为结膜 毙和BPF有着显着的统计学关系,90骺的 BPF病人都惠过结膜炎.结膜炎的发作和 BPF的出现,其间隔时阈为1—6O天,平均 为7—16天.结膜炎为化脓性,不出血,每 一17I一