从蚊子血中检测人DNA

从蚊子血中人DNA 从蚊子血中检测人DNA 从蚊子血中检测人DNA【摘要】 目的 从叮咬人后的蚊子体内血中得到被叮咬者的dna分型。 方法 chelex100法提取叮咬人后的蚊子血dna，powerplex 16试剂盒和identifiler试剂盒扩增dna。 结果蚊子血中可成功检测出被叮咬人的dna基因型。 结论可从蚊子血中检测到被叮咬人的dna数据，结果稳定性好。两种试剂盒的联合应用，可大大提高检测的准确率和可靠性，对实际检案具有很大帮助。 【关键词】蚊子;人;dna分型【中图分类号】19919(2;(175【文献标识码】b【文章编号】1007—9297(20xx)02—0138—02实践中的法医dna检验样品具有多样性、复杂性，且常为微量、已部分降解的生物物证，例如蚊子血。本文对蚊子体内血进行dna检测，成功得到被叮咬者dna数据，并进一步对dna分型结果的可靠性及如何提高检测结果的准确率进行研究。材料和方法 一、样本和试剂 (一)样本叮咬人血后不久被拍死的蚊子1只。分别取血痕和混杂有蚊子残片的部位，1名被叮咬志愿者新鲜静脉血作对照。 (二)试剂与仪器抗人血红蛋白胶体金测试剂条(e—boat dallas公司)。powerplex 16 kit(promega公司)。ampflstr identifiler kit(abi公司)。9700型pcr仪(abi公司)。abi alyzer(abi公司)。 3100gene6can— 二、方法 (一)dna提取样本于500 l纯水中浸泡30 min，抗人血红蛋白胶体金测试剂条检验后，chdex一100法提取dna。 (二)pcr扩增及检测powerplex 16 system 复合扩增试剂盒、ampflstr identifil—er system复合扩增试剂盒分别扩增样本dna，反应体系为20"l，abi 3100 genetic analyzer检测。表1 蚊子体内血扩增结果(powerp~x 16 system)* 为一个基因座中，两个等位基因峰高比值 50,。** 为一个等位基因丢失。结果与讨论从蚊子中提取的血痕抗人hb呈明显阳性反应(+ +)，混杂血与蚊子残片部位呈阳性反应(+)。dna分型结果见表 1、表2。法律与医学杂志2017年第11卷(第2期)衰2 蚊子体内血扩增结果lampflstr identifiler system)目前用于法医dna分析的遗传标记大多是人类所特有的，其他动物种类(除去与人类遗传物质极相近的猿等)dna得不到这些特异的dna 分型系统的结果。而有一些str 位点，如csf1po，动物样本的扩增产物远远超出人类在该位点的等位基因阶梯范围。本实验证明从叮咬人后的蚊子血及其与蚊子残片的混合体中，均检出人dna，与志愿者dna分型结果比对，同一认定几率 99(99,。蚊子dna不影响检测结果。dna分型结果的准确性很大程度取决于样品中模板dna? 139 ?的量和纯度。一般来讲，str基因座中由于等位基因属小片段 400 bp，两个等位基因之间差异扩增不如小卫星vntr显著，等位基因峰高基本相同。但当模板dna极微量、dna降解或有抑制剂存在时，可能导致某一个等位基因优先扩增，一个基因座的两个等位基因峰高会出现不平衡现象。由于现场提取的蚊子血一般较微量，同时蚊子体内可产生某些酶类，易引起dna降解，从而影响dna结果。本实验中，在用powerplex 16试剂盒检测时，蚊子血痕1在penta e、csf1p0、tpox基因座上，出现一个基因座中两个等位基因峰高比值 50,，d16s539基因座上出现等位基因14丢失的现象，易导致错误判型。而identifiler试剂盒则无此类现象。因此我们认为对此类样品必须: 1)重新扩增;2)另选试剂盒扩增以确定结果是否有可重复性，提高判型的准确性。本实验联合应用identifiler试剂盒对样品pcr扩增、电泳检测后，得到以上几个基因座的正确dna分型结果，提高了对微量、降解的样品dna检测的可靠性。本实验研究结果表明，通过对案件现场提取的蚊子血进行dna检测(可以得出人dna分型结果。为避免模板量微、降解引起dna分型结果的误判，在实际应用时，应用两个以上试剂盒进行扩增，对结果进行综合分析、判断，将大大提高检测的准确率。参考文献郑秀芬(法医dna分析(北京: 中国人民公安大学出版社，20xx(201伍新尧(高级法医学(郑州大学出版社，20xx(251(收稿: 20xx—09—02;修回: 20xx—11—23)