试探食品沙门氏菌检测方法.doc

试探食品沙门氏菌检测方法.doc 试探食品沙门氏菌检测方法 【中图分类号】Q939.1 【文献标识码】B【文章编号】1005-0019(2013)12-0483-01 【导读】沙门氏菌病是一个重要的公共健康的人畜共患病，肠道细菌，沙门氏杆菌病，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎，伤寒和副伤寒的细菌。他们可以感染人，也可以感染多种动物，包括哺乳动物，鸟类，爬行类，鱼类，两栖类和昆虫。人类和动物感染可无症状带菌状态，也可出现致命性疾病的临床症状，它可能会增加或减少的发病率或死亡率，生殖动物的生产力。 蛋，家禽和肉类产品是沙门氏菌病的主要传播媒介，血清型感染主要取决于沙门氏菌和食品的健康威胁，是世界上最大的儿童，老人和免疫力低下的人。根据国际惯例，由沙门氏菌污染的食品，分级管理，使大部分食品的要求不含有沙门氏菌，从而有效地防止沙门氏菌病。因此，中沙门氏菌的检测方法研究人们的细菌，作出不懈的努力，进展如下，沙门氏菌和快速检测试剂盒。 1，自19世纪后期以来，沙门氏菌被发现的第一次，作为人类的病原体，检测方法的基础是基于患者的临床资料中的粪便或血液感染。在未来60年中，对沙门氏菌的方法分离出食品和临床材料的性质是相同的。但是，也有至少三个因素限制了临床材料的应用在食品工业上的应用。首先，在正常情况下，在食品原料中的沙门氏菌污染水平远低于疾病感染的患者; 第二，检测，可能会干扰病原体，如食物本身的性质，食物中的一些原生植物可能是在很高的水平，有选择的分离和鉴定特定的细菌效果;第三和临床材料不同的是，加工食品，由于加热，干燥，高盐，酸，冻结和其他因素的影响，沙门氏菌，损害或伤害不是致命的。这是一组不同的细菌的生长特性。这种现象对于那些谁希望沙门氏菌分析师隔离，媒体文化有很大的影响，因为从食物样本细菌沙门氏菌伤害往往是最后的死亡和失败的实验中选择。为了克服这些困难，人们建立了一个简单的微生物生长的步骤，特别是矢量病原体的传播和食物。虽然这些方法被证明是可靠的，但很费力，费时，需要4至7天才能完成。因此，需要确保及时，快速评估，食品中微生物，通常不使用。DNA和抗体技术，在过去的10?15年的发展，一个特定的改善方法，其中有许多是在48小时内，这是通常被称为作为一种快速的检测方法，用于检测沙门氏菌。 1培养的方法是传统的食品样品用于分析沙门氏菌的经浓缩的传统方法中，为了增加病原体的检出率，这样的一般可分为4个不同的阶段或步骤。第一步(俞增君)，样品的文化，非选择性的营养价值高，介质，温度为37?，因此，那些谁使所有微生物的生长和细菌复苏损伤。虽然推荐常规使用的缓冲蛋白胨水(因为它可以保持溶液的稳定性的pH值)，但介质的选择仍存在争议。第二，是选择性富集过程，它使沙门氏菌生长的微生物存在于同一时间肉汤减少，预培养相似，给出的选择性培养基中，有许多不同的观点。以下3种类型:甚至四硫代盐肉汤(Tetrathionatebroth)，亚硒酸盐胱氨酸肉汤(Selenitecystinebroth)和RV(拉帕波特VASSILIADIS)的介质。由于任何种类的介质的情况下， 可以充分保持所有食品基质或各种沙门氏菌血清型，因此，较为合适的做法是使用2种培养基进行了测试并行。第三步是分离步骤，即选择性的含一个或多个非沙门氏菌的生长抑制琼脂制剂连胜培养，然后在平板上可见特征菌落得到证实，则一系列的生化和血清学检测的细菌菌株，为了使鉴定。传统的检测方法，沙门氏菌的整个过程至少需要4?7天，以获得明确的诊断结果。 2.显著特异性抗体的检测方法使用的抗原抗体反应，定型鉴定和血清学细菌，超过半世纪。特异性抗体或抗原的细菌，从而使人们能够建立一些快速的方法来检测病原体的食物为载体。有多种沙门氏菌的免疫学检测方法已被建立，可以大致分为酶标抗体(ELISA)，荧光抗体染色(免疫荧光法)，同位素标记的抗体(放射免疫测定法)为基础的和许多其他基于抗体的方法，采用乳胶凝集法，免疫传感器，免疫扩散和免疫层析技术。但是，传统的，是最广泛使用的方法，以双站点基于ELISA技术的双抗体夹心ELISA。放射性同位素替代标记抗体的方法进行了改进，一般来说，是指在固定在固体基材的捕获抗体捕捉靶抗原，经洗涤除去未结合的物质，通过加入第二种酶标记的抗体，这样的组合在捕获抗原在不同的网站，洗净后第二次加入的酶的功能矩阵，其显色反应的组件，然后使用分光光度法，这是容易察觉的靶抗原。使用微孔板固体基质使反应形式的标准化，并推动自动化。 最近黎着棍等首次在国内口岸系统应用微孔板的ELISA方法检测沙门氏菌的进口和出口的动物产品(鱼粉，肉粉和骨粉等)(Salmonelletest1)。沙门氏菌使用这种方法(AE组)酶标单克隆抗体，增加细菌的预涂层处理 的样品反应后，加入一定指标的功能，经过酶的检测，以确定OD值进行校准。通过适当的浓缩处理的食物样本，你也可以使用这种方法来检测沙门氏菌。 ELISA法的范围限制在105?106个细胞/ml检测沙门氏菌，因此，要获得可靠的结果，食品样品预富集，选择性富集，通常还含有D-甘露醇浓缩肉汤(M肉汤)，首先必须为了促进发展的鞭子。在一般情况下，ELISA样品制备的标准，约经过40,48小时的潜伏期来完成。ELISA微孔板黎着滚等(Salmonellatest1)样品制备过程包括三个步骤，共耗时24小时:选择营养肉汤预富集(6H)，伤害，冷冻复苏沙门氏菌。使用选择性培养基RV富集的(14h的)，使沙门氏菌繁殖，并抑制其他细菌生长的生长。使用浓缩后的营养肉汤(蛋白胨水)(4小时)，沙门氏菌的数量大大增加。比ELISA方法的标准样品制备过程已经减少了一半的时间。ELISA方法本身，只有约2H。你需要(其中30分钟是90分钟的运行时间，为培养时间)。相比之下，黎着绲等方法就可以完成，27H，该方法可以缩短一半的时间，很值得推广应用。 沙门氏菌免疫，免疫卡到特定的抗体致敏基础。几滴样品卡，结果可以直接通过肉眼读取。免疫色谱卡，操作简便，无需专用设备，它是适用于小型实验室使用。虽然卡检测方法和ELISA方法需要样品富集处理，但(卡法)本身通常只需要不到10分钟，如果黎着棍和他人，样品制备方法，可以使手术时间更短。 3，核酸为基础的方法细胞核酸的DNA和RNA是大分子只有一个类可以进行信息的。因为所有的细胞中含有的分子，它可以被用来作为一个目标的检测。目标通常是一个特定的核酸序列， 它可以是作为用于检测的探针的核酸分子的补码。类似的免疫学方法，探头还需要附加的合适的标记，如放射性同位素，酶或荧光标记。菲茨等推出了第一代的丹-RNA杂交技术检测食品中沙门氏菌，伤寒杆菌的DNA片段包含探测应用程序放射性标记，其灵敏度高，大约是48小时浓缩步骤，检测限为108/毫升的细菌，但由于使用的放射性同位素，只在实验室中使用专门的，此方法的优点已被抵销。因此，第二代技术-比色法基于核酸杂交的压力已经研制成功。此方法依赖于沙门菌的核糖体RNA(rRNA基因)-存储在发展过程中，核糖体的核酸成分的检测。核糖体是一个细胞蛋白质合成的一部分，分别为5000,20000拷贝每个细菌细胞中，染色体DNA复制比仅为2,10。这自然丰富的rRNA靶序列，使没有辐射计的探测成为可能，同时保持放射性同位素方法或更高的灵敏度。它的另一个优点是，由于rRNA基因是一种单链(DNA链)，没有杂交前的变性步骤。得到了肯定的结果，该方法需要105/毫升的靶细胞，所以检测沙门氏菌，需要预浓缩和选择性富集，共约50小时。rRNA基因探针比沙门氏菌ELISA方法更费时，但两个成本类似。 食品的细菌检测方法的最新进展，开发在化学放大系统，即聚合酶链反应(PCR)，该系统可以是细菌的DNA扩增制备的样品，允许更容易的术语，如凝胶电泳或比色ELISA法检测。成立已经为载体的到致病PCR方法检测沙门氏菌和其他食品，这些方法的一些表现出优异的灵敏度。但这种方法难以实现自动化，而且必须经稀释的某些成分可能会干扰检测反应的选择性富集。一个完整的基于PCR的方法，需要2天才能完成，在很大程度上抵消了高敏情绪的优势，但这种方法对那些沙门氏菌或沙门氏菌严重 伤害沙门氏菌rRNA的样品，尤其是恢复和保留。 虽然目前用于检测沙门氏菌的方法都有优点和缺点，但随着科技的发展，人们探索，继续进行实践，我们可以预期，将会有更多，更高的敏感性，特异性，诊断的新方法较短。 4，快速检测沙门氏菌的方法比较，在两个种和传统的方法是费时的，昂贵的在1,2天平板检测法 4.1Transia沙门氏菌，最快的速度，操作时间可以缩短每个检测。它是基于双抗体夹心ELISA法中，使用的抗体的混合物，以确保所有沙门氏菌血清型的检测。固态反应是一种微量反应板的有形或无形的条纹。特异的单克隆抗体用于沙门氏菌，收拾锁孔。小在第一阶段(沙门氏菌特异的单克隆抗体及多克隆抗体的混合物)与复杂的样品和抗体。延时，沙门氏菌抗原和抗体包被的，以形成复合材料接头组件:单克隆抗体沙门氏菌抗原-抗体。洗涤后，每孔为底物溶液(过氧化脲)和显色溶液(四氨基甲基苯)，以显示复合酶催化氧化显色，蓝色。加入反应终止液终止催化反应后，将反应混合物酸化，从蓝色到黄色的颜色变化。 ELISA方法可用于选择性富集和热冲击的效果，沙门氏菌抗原特异的食品和环境样品的释放。如使用李Zhaogun的样品制备方法，可大大缩短检测时间，此方法可以在没有酶标仪在实验室条件下，从这个角度来看，ELISA微孔板Transia沙门氏菌板检测方法的LiZhaogun(Salmonellatest1更适合于一般实验室使用)免疫反应卡。 4.2沙门氏菌Transia单，夹心免疫反应检测方法。膜带固相反应，包括抗沙门氏菌抗体染色染料共轭垫浸泡，抗沙门氏菌抗体固定膜反应 区。浓缩，浓缩液移样孔管，其吸收，如沙门氏菌抗原的存在的样品，它们的效果和偶联物，抗体，然后移动到膜的结合被固定在膜反应区，显示在响应窗口的色带。最后，结果可以读取在5?7分钟。该方法也适用于非酶标记仪器实验室。样品的制备方法，例如作为使用李Zhaogun，可以缩短检测时间，可以在实验室条件下进行。