卵泡抑制蛋白对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响_cropped

卵泡抑制蛋白对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响_cropped 卵泡抑制蛋白对大鼠睾丸间质细胞 分泌睾酮的影响 李江源, 邵迎红, 窦京涛, 李明 ( )解放军总医院内分泌科, 北京 100853 () (【摘要】 目的: 探讨卵泡抑制蛋白 , 对离体大鼠睾丸间质细胞 fo llista t in F SL eyd ig ) () 分泌睾酮的影响。: 用 梯度分离法分离和培养雄鼠 220, 250 ce llP e rco ll W ista r g 2+ 2+ ( ( ) 睾 丸的 细胞。 分别观察 2288、以及 加 在基础状态 不加L eyd ig F S rh F SC aF S C a () ) 和刺激状态 1. 0 ƒ对 细胞分泌睾酮的影响。结果: 抑制基础和 hC GhC G IU L L eyd ig F S 2+ 刺激状态的睾酮分泌, 并与剂量相关。亦有抑制作用, 但在 100 ƒ时出现逸脱 C amm o lL 2+ 现象。加 表现为与剂量相关的抑制作用。 结果: 呈剂量依赖性抑制睾酮分泌,F S C aF S 2+ 2+ 可能是 的第二信使, 单独高浓度 出现抑制逸脱的机制未明。C aF S C a 睾丸间质细胞 【关键词】 卵泡抑制蛋白;睾酮; () 【中图分类号】11 【文献标识码】588 【文章编号】100423845 20020120016204 R A Ef f ec ts of f o ll ista t in on te sto steron e secre t ion of ra t L eyd ig ce lls in v itro 2, 2, 2, L I J ia n g y u a n S H A O Y in g h on g D OU J in g ta oL I M in g 100853 D ep a rtm en t of E n d oc rin ology , G en e ra l H osp ita l of PL A , B e ij in g 【】A bstra c t ( ) (): 2288 O bjec t iveT o in ve st iga te th e effec t s o f fo llista t in rh F So n te sto ste ro n eT .sec re t io n o f ra t’ s L eyd ig ce lls in v it ro M e thod s: L eyd ig ce lls w e re iso la ted f rom W ista r ra t’ s te ste s b y a d isco n t in uo u s 5 ( . 242ƒ10P e rco ll g rad ien t p ro cedu reP u r if ied ce lls w e re d isp en sed in to w e ll p la te ce lls 2+ ) ƒ2288 24 . m lw e llan d m a in ta in ed fo r h in a CO 2 in cu b a to rrh F San d C aw e re added to () th e w e lls in dep en den t ly o r jo in t ly in bo th b a sic co n d it io n w itho u t hC G an d st im u la t in g () 1. 0 .ƒco n d it io n hC G IU L th en o b se rved th e ch an ge s o f T leve ls in m ed ia : 2288 2Re sultsrh F Sshow ed a do sedep en den t in h ib it in g effec t o n T re lea se in b a sic 2+ C aan d st im u la t in g co n d it io n s. a lso p re sen ted in h ib ito ry effec t e ith e r, w h e rea s, e scap e 2+ 100 ƒ. p h enom eno n em e rged w h ile C aco n cen t ra t io n reach ed to mm o lLA com b in a t io n 2+ 2288 2.o f rh F Sw ith C ad isp layed a do sedep en den t in h ib it io n o n T sec re t io n : 2288 2. Con c lus ionrh F Sin h ib it s T sec re t io n in a do sedep en den t m an n e rC a lc i2 . umw a s tho u gh t to b e th e seco n d m e ssen ge r o f F S ac t io nT h e e scap e m ech an ism o f in h i2 2+ .b it io n a t h igh co n cen t ra t io n o f C aa lo n g w a s u n k now n Key word s: Fo llista t in; T e sto ste ro n e; L eyd ig ce lls (( ) )2002, 11 1: 16219 J R ep rod M ed 【收稿日期】 2001205221; 【修回日期】 2001208202 ( ) 【作者简介】 李江源 1939, , 男, 广东电白人, 解放军总医院军医进修学院内分泌科主任医师, 教授, 博士生导师 1 () 卵泡抑制蛋白 , 是 1987 年 fo llista t in F S下, 收集 24 h 培养液测定 T 水平。 2+ 51和 共同作用对细胞分泌首先从猪和牛的卵泡液中分离出来的一种单链 F S C aL eyd ig 蛋 白, 并 发 现 它 具 有 抑 制 垂 体 卵 泡 刺 激 素 的影响: 设 010 和 10. 0 种浓度, ƒ2 T F S n g m l 1, 2 2+ () 释放活性, 此后有关 对垂体激素 设 0、110 和 10010 ƒ种浓度, 加入3 F SH F S C amm o lL 分泌的影响进行了广泛的研究, 但是 对睾 F S 细胞培养孔中, 每组 4 个孔。 在加和不L eyd ig ( 丸内分泌功能的影响方面的研究尚不多, 我们) 1. 0 ƒ两种条件下, 分别收集 24 加 hC G IU L 观 察 到 对 体 外 培 养 的 大 鼠 睾 丸 间 质 细 胞 F S h 培养液测定 T 水平。 () 分泌睾酮有抑制作用, 现如 L eyd ig ce ll61 睾酮测定: 采用化学发光仪自动分 下。 () 析, 批 内 变 异 系 数 5. 3%, 515% , 批 间CV 12%, 617% , 最低检出浓度 011 。5ƒCV nm o lL 材料和方法 θ 71 统计学处理: 全部数据用 ?表示, 组 xs 11细胞分离: 雄性 大鼠, 体 间比较采用 2检验处理。L eyd ig W ista r F Q 重 220, 250 , 断头处死, 迅速分离睾丸, 置于 g结果 冷磷酸缓冲液中, 去除白膜和血管、剪碎, 在含 0103% I 型 胶 元 酶 的 5培 养 基 中11 不同浓度 对 细胞分泌 的 M cCo y’ s A F S L eyd ig T ( ) 37?震荡 15 。细胞混悬液用 300 目不锈钢 影 响 图 1: 在 基 础 状 态 下, 浓 度 为 10 和m inF S ( 网 过 滤, 滤 液 200 离 心 10 , 沉 淀 物 用g m in 100 时 分 泌 显 著 受 抑 制 均 < ƒ n g m l T P ) () 培养基洗 2 遍备用。 以培养基将50105; 在 ƒ刺激条件下, 对照组 1. 0 M cCo y’ s A hC G IU L (() ) 等渗 细胞分离液配制成 13 个浓度梯度P e rco ll = 0. 0 水平由 1188?018 ƒƒF Sn g m lT nm o l ) ( ) (20%, 80% , 分别加入离心管中, 将 1 睾 上 升 至 15103? 0149当 浓 度 ƒ, m l L nm o lL F S 8 ( ( ) 水 平 下 降 至 13100 ? 丸 细胞混悬液 约 10个细胞置于分离液 顶 达到 100 n gƒm l 时, T ( ) 端, 1 000 离心 30 , 细胞位于第 6 g m in L eyd ig 0135ƒ与 对 照 组 比 较 差 异 显 著 < , nm o lL P ) 密度层, 吸出 细胞, 培养基洗涤 2 次, 最 L eyd ig 0. 05。 后用 2 培养基悬浮细胞并进行计数。m l 21细胞培养: 用含 1% 胎牛血清的L eyd ig ’5培养基将 细胞浓度调整 M cCo y s A L eyd ig 5 至 10个细胞接种于 24 孔板, 每孔 1 ,ƒ, m lm l 在 5% 2 37?条件下温育。CO () 31对细胞分泌睾酮 的影响: F S L eyd ig T ( 2288 为基因重组 288 个氨基酸的 美 rh F SF S ) 国 , 馈 赠 配 制 成 010、011、110、1010、N IH 10010 ƒ种浓度加入 细胞培养孔 5 n g m l L eyd ig 中, 每种浓度 4 个孔。在加和不加人绒毛膜促性 () 腺激素 1. 0 ƒ的情况下, 收集 24培 hC G IU L h 图 1 对大鼠 细胞分泌的影响。基础状 F S L eyd ig 养液测定 水平。T 态在 浓度为 10 和 100 时, 水平显著低于 0ƒF S ngm l T 2+ 41对 细 胞 分 泌 的 影 响: 将 C aL eyd ig T 3 () , 1. 0 ƒ各组 < 0. 05; 刺激后, 在 浓 ngm l P hC G F S 钙配制成 010、011、110、1010、和 100. 0 ƒn g m l ( 度为 100 ƒ时, 分泌水平显著低于低浓度 0ngm l T F S ?5 种浓度, 加入 细胞培养孔中, 每种浓 L eyd ig () ) , 10 ƒ各组 < 0. 05ngm lP () 度 4 个孔, 在加和不加 ƒ的情况1. 0 hC G IU L 2+ ( 21对 细胞分泌 的影响 图 C aL eyd ig T 2+ ) 2 : 在基础状态下, 浓度 为 1010 ƒC amm o lL ( ) 时, 分 泌 明 显 受 抑 制 < 0. 05; 浓 度 达 到T P ( 10010 ƒ时, 分泌反而显著升高 论文

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