抗鸡白痢益生菌株的筛选_cropped

抗鸡白痢益生菌株的筛选_cropped 摘要 :利用从健康蛋鸡和肉鸡肠道内分离的菌株以及本实验室保存菌 ,在体外分别与鸡白痢沙门菌强 毒株作用 48 h 后 ,以涂片染色镜检法和菌落计数法筛选出对鸡白痢沙门菌有抑制作用的 5 株细菌 ,即鸡粪 肠球菌 、鸡非致病 性 大 肠 埃 希 菌 、环 状 芽 胞 杆 菌 、酵 母 菌 和 乳 酸 菌 , 抑 制 率 分 别 为 9718 % 、99 % 、9919 % 、 9812 %和 78 % 。 关键词 :鸡白痢沙门菌 ;鸡粪肠球菌 ;鸡非致病性大肠埃希菌 ;环状芽胞杆菌 ;酵母菌 ;乳酸菌 中图分类号 : R378 文献标识码 :A SCREENING OF THE STRAINS A GAINST FWOL W HITE FL UX WEN Cai2xia ,XU J ian2hua , HANG Xiu2wang , et al1 ( )The Institute of Clinical Pharmacology Fujian Medical University , Fuzhou 350000 , China Abstract :Co2culture the high toxicity strain of S almonewlla gallinarum causing fwol white flux for 48 h with bacteria isolated from egg or intestinal tract of meat chicken or got from our lab presservation respectively. 5 strains ,namely Ente2 rococcus f aecalis ,fowl nonpathogenic E. coli , B acillus ,yeast and L actobacillus ,are screened by smear dyeing microscopic study and colony counting. The inhibition rate of these 5 strains are 9718 % ,99 % ,9919 % ,9812 % and 78 % ,respective2 ly. Key words :S almonewlla gallinarum ; Enterococcus f aecalis ; Fowl nonpathogenic ; E. coli ; B acillus ; Yeast ; L actobacillus 6 作 37 ?肉汤活化培养 6,8 h ,调其菌浓度为着 10/鸡白痢病是由鸡白痢沙门菌引起的一种消化道 ,常见于 3 周龄以内的雏鸡 ,呈急性败血症 ,成 ml ,分别将各受筛菌与鸡白痢菌混合培养 48 h 后 ,疾病 涂片作革兰染色 ,在显微镜下观察抑制情况 。鸡多现为慢性或隐性感染 ,可影响蛋鸡的产蛋量 , 11312 菌落计数法 取健康鸡肠内分离的鸡粪肠 球危害性较大 。目前抗生素的治疗造成了许多耐药菌 菌 、鸡非致病性大肠埃希菌以及环状芽胞杆菌 、酵 母的产生和肠道菌群的失调 , 这给治疗带来了困难 。 菌和乳酸菌作为本实验的受筛菌 ,先将受筛 菌因此 ,利用微生态制剂治疗肠道细菌性疾病日益受 和鸡白痢菌分别作 37 ?肉 汤 活 化 培 养 6 , 8 h , 到人们重视 。我们从健康蛋鸡和肉鸡肠道内分离到 () 其中乳酸菌用 PYG 液体作厌氧培养 24 h,调各菌 的菌以及本实验室保存的菌种中 ,筛选到 5 株对鸡8浓度为 10/ ml ,取 012 ml 的受筛菌液分别与 012 ml 白痢沙门菌有抑制的菌株 。 ( 鸡白痢菌液混合于 20 ml 肉汤中 其中乳酸菌用 20 1 材料与方法 ) ml PYG 液 ,做厌氧培养,37 ?培养 48 h 后 ,用无菌( 111 实验菌 鸡白痢沙门菌 079213 , 简称鸡白痢 生理盐水作梯度稀释 ,涂布在相应的选择性固体培 ) 菌的强毒株 ,由中国兽药监察所提供 ; 鸡粪肠 养基上培养后计数各种菌落 ,同时与各对应的等量 () ( ) 球菌 9803、鸡非致病性大肠埃希菌 9907b由健康 菌培养作为对照比较 ,计算出抑菌率 。鸡肠道内分离 ;环状芽胞杆菌 、酵母菌和乳酸菌均为 该菌对照生长数 - 该菌混合生长数 抑菌率 = ×100 %本实验室保存菌 。 该菌对照生长数 112 培养基及培养装置 营养琼脂 ,大肠埃希菌选2 结果 ( ) 择培 养 基 麦 康 凯 培 养 基 , 乳 酸 菌 选 择 培 养 基 211 涂片法筛选结果 采用涂片显微镜观察法初 () ( LBS,抑制革兰阳性菌培养基 含万古霉素 5 U/ ml () 步筛选出鸡粪肠球菌 9803和环状芽胞杆菌的鸡白 ) 的营养琼脂,普通肉汤 ,PYG 液体培养基 ,厌氧培养 痢菌有较为明显的抑制 。 装置用于乳酸菌的培养 。 212 菌落计数法筛选结果 采用菌落计数法筛选 113 抑菌试验出 5 株对鸡白痢菌有明显抑制作用的菌 ,即鸡粪肠 11311 涂片显微镜观察法 () ( ) 取健康鸡肠内分离的 球菌 9803、鸡非致病性大肠埃希菌 9907b、环状 多株鸡粪肠球菌和本实验室保存的环状芽胞菌作为 芽胞 杆 菌 、酵 母 菌 和 乳 酸 菌 , 抑 制 率 除 乳 酸 菌 在 78 % ,其余 4 菌均在 95 %以上 ,同时环状芽胞杆菌 、 本实验方法的受筛菌 ,先将受筛菌和鸡白痢菌分别 酵母菌 和 乳 酸 菌 也 受 鸡 白 痢 菌 的 抑 制 , 抑 制 率 在 收稿日期 :2002205224 36 %,76 %之间 ,见表 1 。 () 作者简介 :温彩霞 19582,女 ,实验师 ,从事微生态饲料添加剂研究 [ 下转第 342 页 ] 表 2 显示 , Hp 根 除 后 , DU 组 患 者 胃 酸 显 著 下 胞释放胃泌素的抑制作用减弱 ; Hp 产生的尿毒酶将 + + ( ) 降 ,与正 常 对 照 组 相 比 差 异 无 显 著 性 P > 0105 ;尿毒分解为 CO和 NH,NH与 H 结合形成 NH , 2 3 3 4 + + NH 浓度显著下降 ,DU 组与正常对照组相比差异4 使胃液中 H 浓度降低 ,胃窦部局部 p H 值增高 , 破 ( ) 坏了胃酸对胃泌素分泌的反馈性的抑制作用 ,从而 有显著性 P < 0105, CSG 组与正常对照组相比差 ( ) 使胃窦部 G 细胞释放胃泌素增加 ,反射性地引起胃 异无显著性 P > 0105。两组患者分别与 Hp 根除+ ( ) 前对比 NH 差异均有显著性 P < 0105。泌素介导的胃酸分泌增加 ,引起黏膜损伤及溃疡形 4 3 讨论成 。结论 : Hp 感染引起 DU 患者胃酸分泌增加 , 二 者间的相互作用在 DU 的发病中占有重要地位 。目前研究认为 Hp 感染及胃酸分泌增加是 DU 的主要致病因素 ,但二者之间的关系尚不十分明确 。 参考文献 : 一般认为 Hp 感染所致的高促胃泌素血症可能是引 3 4 1 尚占民 ,刘益清 ,姬新颖 1 幽门螺杆菌相关性胃炎患者胃窦黏膜 起高胃酸分泌的原因之一。Harris报道了 UC 患 及胃液中生长抑素与胃液氨含量的关系J 1 中华消化内镜杂志 ,者的基础胃酸分泌及胃泌素刺激的最大酸分泌增 () 1999 ,16 6:3661 5 加 。EL2Omar等报道 Hp 阳性的 DU 患者基础胃酸 2 刘志强 ,侯凡凡 ,张训 1 电位滴定法测定胃液氨的含量 J 1 第一 军医大学学报 ,1991 ,11 :32923301 分泌增加 3 倍 ,胃泌素释放肽刺激的酸分泌增加 6 3 叶任高主编 1 内科学 M 1 北京 : 人民卫生出版社 , 第 5 版 : 3902 倍 。本 研 究 发 现 Hp 阳 性 的 DU 患 者 空 腹 胃 酸 及4001 + NH 浓度显著高于正常对照组 ,而根除 Hp 后胃酸4 4 Harris AW , Gurment PA , Phull PS. Recurrence of duodenal ulcer arter + 及 NH 浓度明显下降接近正常水平 。我们分析 Hp4 Helicobacter pylori eradication is related to high gastric acid output J ( ) 1 Gut ,1995 ,37 suppl:81 感染导致壁细胞对胃泌素敏感性增加原因可能机制 EL2Omar EM , Penman ID ,Joy ES. Helicobacter pylori infection and ab2 5 是 Hp 感染引起的炎症和组织损伤使胃窦黏膜中 Dnormalitied of acid secretion in patients with duodenal ulcer disease J 细胞数量减少 , 影响生长抑素产生 , 使后者对 G 细1 Gastroenterology ,1995 ,109 :68126911 [ 上接第 340 页 ] 表 1 各菌相互抑菌结果 48 h 作用后各菌落数 (( ))试验菌 对照组菌落数 个/ ml 相互抑菌率 % () 个/ ml 1110鸡白痢菌加 9718 612 ×10517 ×10 1313 () 鸡粪肠球菌 9803113 ×10217 ×109鸡白痢菌加 9918 110 ×101111 () 鸡非致病性大肠埃希菌 9907b 212 ×10412 ×1049919 鸡白痢菌加 110 ×101112 环状芽胞杆菌 76 311 ×10113 ×109鸡白痢菌加 9812 418 ×101010 酵母菌36 116 ×10 215 ×108鸡白痢菌加 78 214 ×1088 乳酸菌 71 111 ×10318 ×10 3 讨论,为研制复合型菌剂 其他消化道致病菌的抑制作用 本实验筛选出的 5 株菌对强毒的鸡白痢菌均有 提供实验依据 。 明显的抑制 ,其中鸡体内分离的粪肠球菌和非致病 参考文献 : 性大肠埃希菌不被鸡白痢菌抑制 ,而非鸡体内分离1 刘蔓雯 ,车景娣 ,周坚 1 鸡白痢生物竞争菌的制备与应用 J 1 中 的环状芽胞杆菌 、酵母菌和乳酸菌却有不同程度的 () 国家禽 ,1993 , 4:5261受鸡白痢菌的抑制 ,这提示鸡体分离的 2 株菌可能 王兴龙 1 微生态学与微生态制剂的研究进展J 1 中国兽医学报 ,2 是以生长竞争或是产物形式抑制致病菌的 ,而非鸡 () 1997 ,17 1:10121031 3 体内分离的 3 株菌则可能是以拮抗形式抑制致病李志荣 ,郑立力 1 促生素用于预防鸡的沙门氏杆菌感染J 1 中国 畜食传染病 ,1992 ,67 :522561 菌 ,并使双方都有不同程度的受抑制 。今后我们将 孔健 1 盆生素生产菌2乳链球菌 SB900 分离及生物特性研究 J 14 对该组菌的抑菌机制 、相关的生物特性 、相互排斥以 () 微生物学报 ,1995 ,35 6:45024541及在宿主体内定居等方面进行测试 ,并扩大测定对