【word】 金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的影响

【word】 金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的影响 金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的 影响 贵州农业科学2011,39(2):148,150 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号]1001—3601(2011)02—0114—0148—03 金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的影响 邹堂斌,解庆林 (贺州学院化学与生物工程系,广西贺州542800) [摘要]为探索金樱根的抗炎作用及对炎症因子一氧化氮(NO)的调控作用,建立小鼠二甲苯耳廓肿 胀模型,琼脂肉芽组织增生模型,并通过测定金樱根对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的影响观察金 樱根的抗炎作用及其与NO的关系.结果表明,金樱根能抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,琼脂肉芽组织增 生,能抑制炎症因子N0的释放.认为,金樱根具有较好的抗炎作用,这种作用与抑制NO等炎症因子释放 有关. [关键词]金樱根;抗炎;巨噬细胞;一氧化氮(NO) [中图分类号]$567.9[文献标识码]A Anti—inflammatoryEffectofCherokeeRoseRootandIts EffectonNOReleaseofMacrophage ZOUTang—bin,XIEQing—lin (DepartmentofChemistryandBiologicalEngineering,HezhouCollege,Hezhou,Guangxi542800,China) Abstract:Theantiinflammatoryeffectofcherokeeroserootwasobservedbybuildingmice dimethylbenzeneauricleswellingmode1andagargranulationhvDerb1astosismodelandtheeffectof cherokeeroserootonNOreleaseofmicecoeliacmacrophagewasdeterminedtostudytheanti— inflammatoryeffectofcherokeeroserootandadjustingeffectofcherokeeroserootonNOrelease (inflammatoryfactor).Theresultsshowedthatcherokeeroserootcouldinhibitmiceauricleswelling causedbydimethylbenzene,agargranulationhyperblastosisandNOrelease.cherokeeroserootisofgood anti—inflammatoryeffectanditsanti—inflammatoryeffectmayberelatedt oinhibitionofNOrelease. Keywords:cherokeeroseroot;anti—inflammatory;macrophage;NO 金樱根(CherokeeRoseRoot,CRR)又名金樱 荔,脱骨丹,为蔷薇科植物金樱子的根或根皮,性味 酸涩,有固精涩肠作用.临床报道可用于治疗子宫 脱垂,细菌性痢疾,4,JL脱肛等症.该植物为广西优 势植物资源之一,化学成分中以鞣质类报道居多,而 鞣质在抗炎,抗氧化,抗病毒及抗癌等方面均有报 道[.一氧化氮(NO)是一种不稳定自由基,既是 一 种信使分子,又是一种细胞毒性分子,NO表现为 生理性或病理性作用,主要取决于量的多少.为探 索金樱根的抗炎作用及对炎症因子NO的调控作 用,提高其临床应用价值,特进行金樱根的抗炎作用 及对巨噬细胞释放NO的影响试验. 1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1试剂与器具金樱根注射液(1mL相当于 0.4g药材),二甲苯(广州化学试剂厂),水杨酸钠 (陕西汉江药业集团),大黄(贺州桂东大药房),NO 试剂盒(南京建成生物工程研究所),巯基乙醇钠(上 海宝瑞化工有限公司),新生牛血清(Gibco),脂多糖 (Sigma),RPMI一1640培养基(Gibco),二氧化碳培 [收稿日期] [基金项目] [作者简介] 养箱(Thermo),电子天平等. 1.1.2试验动物BALB/c小鼠(舍),体重(2O? 2)g,清洁级,由中山大学实验动物中心提供. 1.2试验方法 1.2.1二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验将30只小 鼠随机分为3组,每组10只,分为金樱根组,水杨酸 钠(2)组和对照组.药物组以0.2mL/10g体重 腹腔注射药液,对照组注射生理盐水,每日1次,连 续3d.末次给药3Omin后,均匀涂抹二甲苯50#L 于各组小鼠左耳两面致炎,右耳作对照.1h后脱颈 椎处死,沿耳廓基部剪下两耳,用直径5mm打孔器 取下相同部位耳片,称重.以对照耳重量为100, 计算药物对致炎耳的肿胀抑制率]. 1.2.2小鼠琼脂肉芽组织增生试验选取小鼠3O 只,于乙醚浅麻醉下,无菌操作,在鼠背中线皮下注 射2%琼脂液0.5mI/只.24h后分组,方法同小鼠 耳廓肿胀试验.药物组以0.2mI/10g体重剂量腹 腔注射药液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续 7d.第8天脱颈椎处死小鼠,取肉芽肿称重,比较 各组问的差异.计算药物对肉芽肿的抑制率: 肉芽肿抑制率/一[(对照组肉芽肿湿重一药 2O1O一08—31;2011-01-08修回 广西教育厅科研项目”金樱根提取物药理活性及作用机制研 究”(200808MS017);广西桂东特色资源开发与利用实验室资助项 目”通泉草VI服液药理活性研究”[2009SYS(2)07] 邹堂斌(1980一),男,讲师,从事天然产物研究与开发. 第2期邹堂斌等金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的影 响?149? 物组肉芽肿湿重)/对照组肉芽肿湿重]×100 1.2.3小鼠腹腔巨噬细胞分离培养及分组每只 小鼠腹腔注射0.3巯基乙醇钠0.6mL,3d后脱颈 椎处死,浸于75酒精中消毒.然后用注射器吸取 PBS液4.0mL注入小鼠腹腔,轻揉小鼠腹部,用无 菌吸管吸取腹腔PBS液,重复3次后离心,所得细 胞重悬于RPMI一1640培养基中,对细胞进行记数并 调整浓度至2×10个/mL.台盼蓝染色证实细胞 存活率达95以上,然后接种于12孔板,每孔加细 胞悬液I.0mLl4.分为正常组,金樱根组和空白 对照组,每组3个复孔,金樱根组每孔加入金樱根注 射液和脂多糖(LPS,100/~g/mI)各0.1mI,对照组 每孔加入LPS(100/~g/mI)和PBS各0.1mI,正常 组每孑L加入PBS0.2mL.置37?,5CO培养箱 中孵育.采用Griess法测定NO的稳定代谢产物 NaNO来反应NO的浓度,操作按试剂盒说明 书进行. 2结果与 2.1抑制小鼠耳廓肿胀试验 二甲苯具有较强致炎作用,涂抹在小鼠的耳廓 可引起耳部皮肤毛细血管扩张,通透性增高,引起耳 部肿胀.从表1可以看出,金樱根注射液对二甲苯 引起的小鼠耳廓肿胀有一定的抑制作用,抑制率达 9.86%. 表1不同处理对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用 Table1Inhibitioneffectofdifferenttreatmentsonmouseauricleswellingcaus edbydimethylbenzene 注:*表示与对照组相比,差异显着(P<O.05)(下同). Note:*indicatethesignificantlevelat5comparedwithCK,thesamebelow 表2不同处理对琼脂致小鼠肉芽组织增生的抑制作用 Table2Inhibitioneffectofdifferenttreatmentsonmousegranulationhyperbl astosiscausedbyagar 2.2小鼠琼脂肉芽组织增生试验 琼脂注射到小鼠皮下后,因其体积较大,无法被 巨噬细胞吞噬,从而使巨噬细胞形成多核巨细胞,附 着于异物颗粒上形成肉芽肿.从表2看出,金樱根 对琼脂引起的小鼠肉芽组织增生有很强的抑制作 用,肿胀抑制率可达22.39,明显优于2水杨酸 钠组. 2.3对巨噬细胞分泌NO的影响 巨噬细胞经IPS刺激后,会释放出大量的炎性 因子NO.从表3看出,对照组释放的NO浓度为 0.142mmol/L,金樱根组释放的No浓度为 0.056mmol/I,与对照组相比差异显着(Pd0.05). 培养巨噬细胞时分别在2h,6h,12h测定培养 基中的N()含量.从图示可知,正常组在2h时NO 含量为0.016mmol/I,6h时含量为0.017mmol/ L,12h时含量为0.020retool/I;对照组在2h时 NO含量为0.039mmol/L,6h时含量为0.059mmol/ L,12h时含量达0.065mmol/L,NO含量上升趋势 比较明显.而金樱根组的NO含量介于两者之间, 说明,金樱根对巨噬细胞分泌炎性细胞因子NO有 较好的抑制作用. 霎Z 07 O6 05 04 03 O2 O1 — ._-空白对照组十金樱根组 时问,h Time 图示不同处理对巨噬细胞分泌NO的影响 Fig.EffectofdifferenttreatmentsonNOrelease ofmacrophage 贵州农业科学 3小结与讨论 炎症是机体对组织损伤或致病因子侵入的一种 防御反应,其作用在于杀灭病原微生物,清除凋亡细 胞和异物,以防止损伤扩大并促进损伤组织修复. 炎症过程涉及许多炎症介质,如丙二醛,白介素,一 氧化氮,缓激肽等.. N0是一种具有广泛生物学效应的小分子化合 物,可直接参与和炎症有关的细胞因子的调节,在免 疫调控方面具有重要作用口.研究证实,NO与炎 症存在密切关系,它在机体内的生物化学过程主要 包括3个基本反应:1)与可溶性鸟苷酸环化酶 (sGC)的亚铁血红素基团结合,激活sGC产生和释 放cGMP;2)被氧合血红蛋白灭活,生成正铁血红 蛋白和亚硝酸盐;3)与超氧离子反应生成有毒的强 氧化物(ONOO).在炎症反应过程中,因损伤因子 的作用,部分组织遭到破坏,出现血管扩张,局部血 量增多,而且血浆和白细胞从血管渗出增多.接着 发生修复,受损伤的组织得以愈合.由此可见,炎症 反应与修复过程有着紧密联系,炎症反应具有潜在 的危害性,过度的炎症反应会造成机体严重损伤. 血管反应是炎症反应的中心环节但不是唯一环节, 免疫系统,血液凝固系统和纤维蛋白溶解系统以及 细胞因子都是炎症反应的必要因素,而N0不仅在 血管反应中起主要作用,而且还参与免疫系统反应 和血小板的调节反应,并且作为细胞因子在炎症反 应中扮演了重要角色u. 研究结果表明,金樱根对急慢性炎症均有较好 的抑制作用,能够有效抑制炎症反应过程中的组织 增生及炎症因子No的形成,表明,金樱根对由炎症 引起的相关疾病具有一定的防治作用.因此,鉴于 许多化学合成抗炎药物具有较强毒副作用的情况 下,应加强推广该药物在临床上的应用. [参考文献] [1]吴寿金.现代中草药成分化学EM].北京:中国医药科 技出版社,2002:135—137. [2]黄贤华,谭晓彬,曾靖,等.金樱根醇提取液耐缺氧 作用的研究[J].赣南医学院,2003,23(5):488一 (责任编辑:冯卫) ]]]]]]]]]] 3456789U[[[[[[[[[[