实验三血糖的测定

实验三血糖的测定 山东医学高等专科学校《生物化学》实验 教研室 生物化学 课程 生物化学实验 专业 2012级临床 指导教师 徐燕 生物化学实验指导 教材 内容 实验三 邻甲苯胺法测定血糖 学时 2 教学 1.掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和 目的 和要 1.掌握分光光度计的使用方法 求 教 教学 重点:邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法 学 重点难点:分光光度计的原理和使用方法 难点 要 求 教学学生动手操作为主，课堂演示为辅 媒体 复习血糖的来源和去路 旧课 (一)原理 血液中所含的葡萄糖，称为血糖。它是糖在体内的运输形式。目前国内医 院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。前者特异性强、价廉、方法 简单，其正常值:空腹全血3.6,5.3毫摩尔/升(65,95毫克/升)，血浆为3.9, 6.1毫摩尔/升。后者由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉 淀下来，因而不易出现假性过高或过低，结果较可靠，其正常值:空腹全血为 3.3,5.6毫摩尔/升(60,100毫克/升)，血浆为3.9,6.4(70,115毫克/升)。 本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应 生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的希夫氏碱，教讲 与同样处理的标准液进行比色，即可计算出血糖的含量。 学授 过新 (二)试剂和器材 程 课 1.试剂 邻甲苯胺试剂:称取硫脲1.5,溶于750,L冰醋酸中，加邻甲苯胺150, L及饱和硼酸40,L，混匀后加冰醋酸至1000,L，置棕色瓶中，冰箱保存。 葡萄糖标准溶液:5.0mg/mL，临用时稀释成1.0mg/mL。 2.材料 人血清 3.器材 分光光度计、水浴锅、移液器 1 (三)实验步骤 取3支试管编号后，分别加入试剂，按下操作: 加入物 空白管 标准管 测定管 0.1 血清 — — 0.1 葡萄糖标准应用液 — — 0.1 蒸馏水 — — 讲 授 3.0 3.0 3.0 邻甲苯胺显色剂 新 课 混匀后，置沸水浴中，加热12分钟，取出置冷水中冷却5分钟。分光光 度计630nm，以空白管调零，读取标准管和测定管的吸光度。 (四)结果与分析 血清葡萄糖(mmol/L)=(测定管吸光度/标准管吸光度)×5 (五)注意事项 (1)试剂成分的质量、邻甲苯胺试剂的新老以及加热温度和加热时间等 都会影响显色强度。因此，测定管、标准管、空白管的加热时间及温度必须完 全一致。 (2)邻甲苯胺法的测定结果基本上与葡糖糖氧化酶法和己糖激酶法相同， 但对尿毒症患者，邻甲苯胺法的测定结果略有偏高。 课堂血糖测定的临床意义 提问 课堂血糖测定的原理和方法 小节 布置利用所学的有机化学知识推导计算的来源 作业 《生物化学》潘文干主编(第,版)(人民卫生出版社 参考 《基础医学实验指导》自编 目 2