脱蛋白工艺对咳尔康口服液中多糖提取率及蛋白质含量的影响

脱蛋白对咳尔康口服液中多糖提取率及蛋白质含量的影响 脱蛋白工艺对咳尔康口服液中多糖提取率 及蛋白质含量的影响 医学信息2011年1月第24卷第1期MedicalInformati0n.Jan2011.V01.24.N0.1 ? 论着? 脱蛋白工艺对咳尔康口服液中多糖提取率及蛋白质含量的影响 巩丽虹,石秀梅,史丽渡,常希文,金秀东,李孟全, (1.牡丹江医学院,黑龙江牡丹江15701I;2.哈尔滨市医药学校.黑龙江哈尔滨150000) 摘要:目的研究脱蛋白I艺对咳尔康口服液中多糖提取率及蛋白质含量的影响.方法采用Sevag法去除多糖中的蛋白质.研究了脱蛋白次 数对咳尔康口服液中多糖及蛋白质含量的影响.结果经过6次脱蛋白处理,咳尔康口服液中多糖含量减少了31.76%.蛋白质含量减少了 44.31%,且前3次脱蛋白量占总量的91.88%.结论咳尔康口服液中多糖采用Sevag法脱蛋白的最佳次数为3次 关键词:咳尔康口服液;多糖:脱蛋白;Sevag法 咳尔康口服液是在名方"六君子汤"基础上,经过临床多年反复 实践研究衍化而成的一种纯中药制剂,本课组前期研究结果表明 该产品具有止咳,祛痰,平喘作用【l1.本试验主要研究脱蛋白工艺对 咳尔康口服液中多糖提取率及蛋白质含量的影响,以期为建立其质 控提供试验材料,从而为开发咳尔康口服液打下基础. 1资料与方法 1.1一般资料721分光光度计,上海分析仪器厂.离心机,上海天美 科技有限公司.咳尔康口服液,课题组提供.葡萄糖标准品,中国药 品生物制品检定所批号l10833.牛血清蛋白,上海蓝美科技发展有 限公司,批号80108.考马斯亮蓝G,天津市科密欧化学试剂开发中 心,批号20080702. 1.2方法 1.2.1粗多糖提取取40mL口服液加95%乙醇使含醇量达80%,静 置过夜,滤取黄色沉淀,放入烘箱于65?干燥,得粗多糖1.0030g. 1.2.2多糖测定采用硫酸一苯酚法日,用葡萄糖标准品作标准曲线.以 吸光度A为纵坐标,葡萄糖浓度c为横坐标绘制标准曲线:Y= 0.0095X+0.01(R=0.9989),呈良好的线性关系. 1.2_3蛋白质测定采用考马斯亮蓝法.精密称取牛血清蛋白0.Olg 溶于蒸馏水中,定容得到O.1mg,mL标准牛血清蛋白标准液.精密吸 取标准牛血清蛋白液0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL于试管,用蒸馏 水补至lmL.分别加入5.0mL考马斯亮蓝G试剂.2,5min后于 595nm波长处以试剂空白溶液为参比.测定光密度值(OD),以OD值 为纵坐标,标准牛血清蛋白含量为横坐标绘制标准曲线:Y= 5.46180X一0.0133(R2=0.9969),呈良好的线性关系. 1.2.4Sevag法脱蛋白研究取一定量粗多糖溶于蒸馏水中,然后将 体积比为3:1的氯仿/正丁醇混合液按与多糖溶液以l:3体积比分 两次加入多糖溶液中,在分液漏斗中振荡30min,静置,将下层的氯 仿和正丁醇放出,取上清液,摇匀后测糖和蛋白质的含量,重复以上 操作6次,通过分析脱蛋白次数对多糖溶液中多糖含量(c.)和蛋白质 含量(c2】的影响,确定最佳脱蛋白次数. 2结果 见表1. 3讨论 植物中的功能性多糖主要以两种形式存在,一种是以纯糖链, 基金项目:黑龙江省教育厅攻关项目(编号:1151gzxl1);牡丹江医学院科研项 目(编号:B200826) 收稿日期:2010—11-08 表1脱蛋白次数对多糖溶液中多m~-ll(c)和蛋白质含量(C2)影晌 另一种是糖链与肽链接合,形成糖肽或糖蛋白.多糖提取中往往是 以80%乙醇沉淀多糖,同时也将蛋白质部分沉淀,一般使用sevag法 脱除蛋白质.本试验结果也表明,在Sevag法脱蛋白过程中,蛋白质 和糖的变化趋势相同.由表l可见,随着脱蛋白次数的增加,溶液中 的多糖含量逐渐降低,脱蛋白过程会造成多糖的损失,且损失量 随着脱蛋白次数的增加而增加;多糖样品中蛋白质的含量随着脱蛋 白次数的增加而减少,但减小幅度不大.经过6次脱蛋白后,多糖中 蛋白质含量减少了44.31%,而且脱蛋白的效果主要在前3次,其前 3次脱蛋白量占总量的91.88%;随着脱蛋白次数的增加,多糖样品 中的多糖含量也逐渐降低,但其多糖含量与蛋白质含量的比值呈逐 渐增大趋势,其多糖含量与蛋白质含量比值增大的效果也主要体现 在前3次,其前3次增大比值量占总增大量的87.34%,随后的增大 趋势趋于平缓.说明咳尔康口服液中多糖采用Sevag法脱蛋白3次 以后再继续脱蛋白意义不大.这也进一步证实咳尔康口服液中的多 糖主要以糖肽或糖蛋白的形式存在.因此,多糖中的蛋白质并非杂 物,而且可能对其功能有重要作用.此外,Sevag法脱蛋白使用的试 剂是氯仿和正丁醇,而氯仿是有毒物质,容易造成多糖活性下降和溶 剂残留.有关这方面的活性试验需要进一步研究. 参考文献: 【1]孙展鹏,李孟全,王元奕,等_咳尔康口服液止咳,祛痰,平喘的实验研究[J]. 医药导报,2009,28(3):2931. 【2]巩丽虹,李孟全,李春彦,等.咳尔康口服液中多糖含量的测定[J].浙江中医 药大学,2010,34(6):765,766. 【3】巩丽虹,李孟全,稔红纳,等.咳尔康口服液中多糖脱蛋白方法研究[J]_安徽 医药,2010,14(6):635636. 【4]何玲玲,王新.脱蛋白工艺对苦丁茶冬青叶多糖提取的影响[J].安徽农业科 技,2006.34(23):6302,6334. 编辑,贺丽 淫羊藿总黄酮的药理学研究 任红 (南昌市疾病预防控制中心,江西南昌330038) 摘要:目的研究淫羊藿总黄酮(totalflavonoidsofepimedium,TFE)对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用.方法将人脐静脉内皮细胞体外培 鲞堡墨堕垫坌查丝;窒对照组,TFE模型组,溶血性磷脂酰胆碱(LPC)损伤组,LPC+TFE(50rag/L)~-,LPC+TFE0oomg/L)~R,LPC+ 收稿日期:2010—11-08