水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究

水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 分类号墅 笠密级 公珏 编号 丝鳗江薛大擎 硕士学位论文 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 指导教师 隧塑 作者姓名 强蚕旺 申请学位级别 亟圭 学科专业 生药堂 论文提交日期 垫兰型 论文答辩日期 垫笾 学位授予单位干?日期 匹蒸太堂垫尘? 答辩委员会主席 评阅人独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究 工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果,也不包含为获得江苏大学或其他教育机构 的学位或证书而使用过的。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均己 在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 张春晓 如,绰多月/蝈学位论文版权使用授权书 江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊光盘版 电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致, 允许论文被查阅和借阅,同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国 学位论文全文数据库》并向社会提供查询,授权中国学术期刊光盘版电子杂 志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。 论文的公布包括刊登授权江苏大学研究生处办理。 本学位论文属于不保密口。 学位论文作者签名:纫务观 矽矽年月日 指导教师签名: 争钙 ?弓年月日江苏大学硕士学位论文 摘要 水飞蓟宾来源于菊科植物水飞蓟 .. 的果实,主要存在于水飞 蓟籽粒的壳中;因其毒性小、无致畸和致突变作用,具 有保肝、抗氧化、抗肿瘤、抗炎等活性,是重要的药用原料。 本论文首先研究了水飞蓟籽的脱壳工艺,再以水飞蓟壳为原料,研究了水飞 蓟素的提取以及高纯度水飞蓟宾的制备新工艺。主要研究内容及结论如下: 水飞蓟籽的脱壳工艺研究。脱壳试验时,采用曲线拨料片与锯齿筒相 组合及片二次拨料片,片状壳仁比率约为%,而粉碎率相对较低不超过 %。采用循环脱壳策略,可达到较好的脱壳效果。 水飞蓟素和水飞蓟宾提取新工艺研究。分别以水飞蓟壳和榨油后的水 飞蓟粕为原料,采用不同的有机溶剂回流提取,比较了水飞蓟素和水飞蓟宾的提 取效果。结果表明,以水飞蓟壳为原料可以缩短提取总时间并达到相同的效果, 其中以乙酸乙酯提取物中水飞蓟宾的含量为%。 乙酸乙酯提取物中水飞蓟宾的脱杂技术研究。通过比较供试原料采用 。汽油脱脂前后脱杂对初步脱杂试验结果的影响、单因素试验和响应面设计试 验,得到最佳的脱杂条件:乙酸乙酯提取物采用汽油脱脂后,以踟%乙醇 为脱杂溶剂,按照:.的固液比,脱杂四次,所得水飞蓟宾粗品的纯度为%, 得率为%。 研究当溶液中溶解了较多相关杂质时,水飞蓟宾在该溶液中的溶解特 性,利用水飞蓟宾和相关杂质的溶解度差异及稀释溶剂的方法,建立了水飞蓟宾 结晶纯化方法。以无水乙醇溶解后,加水稀释至%乙醇后结晶、洗脱。利用水 飞蓟宾和相关杂质的溶解度差异和稀释溶剂的方法,获得水飞蓟宾的纯度%, 原料中水飞蓟宾转移率%。 通过分析鉴别结晶残液中的化学成分。水飞蓟宾在脱杂结晶过 程中,部分水飞蓟宾随着杂质一同进入了结晶残液。本文通过?分析及文献 比对,从该结晶残液中推测鉴别出水飞蓟宁、水飞蓟亭、水飞蓟宾、异水飞蓟宾、 二氢槲皮素等成分,为后续建立从结晶残液中回收水飞蓟宾技术提供基础数据。 关键词:水飞蓟、水飞蓟宾、水飞蓟素、提取、纯化、鉴别水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟 宾制备新工艺的研究 ?江苏大学硕士学位论文 ,, , ? . . , : . . ?? ??, %%. ., .. 撑, . .静 % :.,% % . 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新.艺的研 究 ,%.,%. %. ?. ,.? ,,,, ,.: .;;;; ;江苏大学硕士学位论文 目 录 第一章绪论.. .水飞蓟介绍?.. ..水飞蓟的生物学特征 ..水飞蓟饮片的贮藏与质量规格. .水飞蓟植物的研究进展?. ..水飞蓟植株的研究.. ..水飞蓟果实的研究.. .水飞蓟宾的研究进展..水飞蓟宾的药理活性研究?.. ..水飞蓟宾制剂研究概况??. .水飞蓟素的提取技术研究. .水飞蓟宾的纯化技术研究. .本课题的立题背景及意义. .本课题研究的主要内容? 第二章水飞蓟籽的脱壳及水飞蓟壳原料的制备??.. .仪器与试药?. ..试验仪器 ..试验材料 ..试验设备 .试验方法..水飞蓟籽粒破坏强度测定?. ..水飞蓟籽脱壳机的外筒..拨料叶片类型?.. ..水飞蓟籽的脱壳试验??.. .结果与讨论?. ..水飞蓟籽破坏强度的测定结果 ..外筒与直线形拨料片组合的试验结果? ..外筒与曲线形拨料片组合的试验结果? .本章小结第三章水飞蓟素提取新工艺研究. .仪器与试药?. ..试验仪器 ..试验试剂 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新‘:艺的研究 ..试验原料 .试验方法..水飞蓟宾和水飞蓟素的分析条件??.. ..水飞蓟宾及水飞蓟素含量测定的方法学考察..不同溶剂提取水飞蓟宾和 水飞蓟素的研究??.. .结果与讨论?. ..水飞蓟宾和水飞蓟素定量分析的方法学考察..原料中水飞蓟素和水飞蓟 宾含量的测定结果??. ..不同溶剂提取过程中转移率的比较..不同溶剂的总的提取效果比较. .本章小结第四章水飞蓟素提取物的脱杂技术研究?. .仪器与试药?. ..试验仪器 ..试验试剂 ..试验原料 .试验方法..单因素试验??. ..响应面设计试验? .结果与讨论?. ..脱杂溶剂对乙酸乙酯浸膏脱杂的影响? ..脱杂次数对乙酸乙酯浸膏脱杂的影响? ..固液比对乙酸乙酯浸膏脱杂的影响?.. ..响应面试验分析结果 .本章小结第五章 水飞蓟宾的溶解特性及高纯度水飞蓟宾的制备方法研究. .仪器与试药?. ..试验仪器 ..试验试剂 ..试验原料 .试验方法..不同试验原料中相关杂质成分对水飞蓟宾溶解特性的影响研究 ..高纯度的制备. .结果与讨论?. ..水飞蓟素中间体中相关杂质成分对水飞蓟宾溶解性能影响?. ..水飞蓟宾粗品中的相关杂质成分对水飞蓟宾溶解特性的影响.江苏大学硕 士学位论文 ..高纯度水飞蓟宾的溶解特性.. ..高纯度水飞蓟宾的制备及分析结果?.. .本章小结第六章水飞蓟宾结晶残液中化学成分研究? .仪器、试剂与原料??. ..试验仪器 ..试验试剂 ..实验原料 .试验方法..供试品溶液的制备. ..结构鉴别 .结果与讨论?. .本章小结第七章结论与展望?.. .全文总结.展望.. 参考文献?.. 在读期间发表的学术论文 ?江苏大学硕士学位论文 第一章绪论 .水飞萄介绍 ..水飞萄的生物学特征,又名水飞雉、乳雉子,是菊科水飞 水飞蓟 蓟属植物,原产于地中海沿岸,是一种欧洲的民间草药【”。年,等 从中发现了保肝活性成分水飞蓟素之后,水飞蓟逐渐引起了人们的 重视,并于年从德国引入我国华北、西北等地区栽培,现已得到广泛的种 植闭。 圈.术飞萄 圈.水飞萄耔 . . 水飞蓟为一、二年生草本药用植物,以其瘦果入药【】。茎直立,有分枝,植 株高约. ,茎杆有纵棱槽。叶长~锄,宽~ ,叶片肥大,互生, 成莲座状,椭圆披针形,羽状深裂,缘齿有尖刺,叶上布满白色斑纹,表面亮绿 色,叶背有短毛。头状花序,直径~ ,单生枝项】,为有限开花习性,总 苞宽球形,顶端有长刺。根系发达,主根长锄,侧根较细,由主根分生吼 水飞蓟适应性强,耐寒、耐高温,对土壤等环境的要求不严苛,在黑土、棕壤、 荒滩、盐碱地进行种植,都能正常生长【。为了提高有效成分的含量以保证水飞 蓟药材质量的稳定性和优良性用,从而更好的满足市场需求,目前仍在不断寻找 更为优良的产地以及筛选和推广优良品种。水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制各新工艺的研究 ,表皮光 水飞蓟瘦果呈长卵圆形或长倒卵形嗍,宽为~ ,长~ 亮.有线状的深褐色斑点。顶端突出,一侧稍凸,中间有圆锥状花柱残基,周边 有淡黄色圆环:外果皮为一列长方形细胞,角质层呈尖基状伸入细胞壁内,中间 果皮较薄,但细胞壁增厚,内侧含有草酸钙柱晶可作为其特征鉴别【,内果皮为 一栅栏状排列的石细胞。子叶细胞含有细小簇晶和脂肪油滴。 ?、?‘??一一?? 嚣:蒜::::患::矗 川?口???川??酬 。一? 田.水飞萄果实粉末 ?./// ..水飞营饮片的贮藏与质量规格 水飞蓟种子脱粒后,经风选,除去杂质,装袋,为防止受潮、淋雨和鼠害, 可放置于通风干燥离地两尺的库架上保存,作为提取水飞蓟宾的饮片。作种子用 的优良早熟品种,可拌入少量的粉%以防虫蛀、鼠咬,但要远离药用 种子,不可混放一处【坷。 水飞蓟种子的质量取决于籽粒中水飞蓟素的含量及种子的色泽,所含水飞蓟 素不低于%,以黑褐色种子为佳品。一般以黑褐色种子不得低于%为, 进行采购,供应与外销。此外,还规定苞片、冠毛残花、碎柄及尘土等杂质不能江苏大学硕士学位论文 超过.%,不含及等农药,而且要充分干燥、粒大饱满,无虫蛀等。 .水飞蓟植物的研究进展 ..水飞蓟植株的研究 由于欧洲民间有食用去刺后的水飞蓟叶和以水飞蓟花作为药用的传统,因 此,有研究认为水飞蓟不同部位可能具有不同的功效【】。水飞蓟全草中含有黄酮 类化合物及延胡索酸【,可用于治疗肿疡及丹毒;种子及提取物中含有以水飞蓟 素为主的黄酮类化合物【】和以亚油酸为主的水飞蓟油【】,可以降低异常升高的 转氨酶【舶】,对于肝脾等疾病具有良好的疗效。 由于不同部位组成成分的差异,采用不同的提取溶剂,才能更充分的获取其 有效成分。王芸等【】以%甲醇溶液、乙醇、乙酸乙酯和纯水为不同极性的提 取溶剂,提取水飞蓟的幼草及成熟植株的种子、花、叶、茎和根等材料,并进行 高效液相色谱分析,出峰数量的排序为:幼草种子花叶根茎,从而为水飞蓟 的相关药效研究、指纹谱图构建提供了参考数据。根据对不同材料提取物的分析, 推测水飞蓟幼草中可能含有黄酮及其苷类、生物碱、花青素、糖和多糖及鞣质; 水飞蓟根中可能含有较多的生物碱及鞣质;茎中可能含有较多的黄酮及苷类、三 萜及鞣质;叶中可能含有黄酮及其苷类、生物碱、甾醇、有机酸及鞣质等【】;花 中可能含有黄酮及其苷类、生物碱、花青素、葸醌、简醇、有机酸、多糖及鞣质。 通过研究发现,水飞蓟幼草和全草的水提物对小鼠肝癌细胞【】,表 皮癌细胞,.乳腺癌细胞,胃癌细胞等有一定的肿瘤抑制活性,从 而为水飞蓟全草资源的开发利用提供参考。 ..水飞蓟果实的研究 目前,国内对于水飞蓟资源的开发利用,主要应用在瘦果入药。因此,对水 飞蓟果实的研究较多。张媛【冽通过反相高效液相色谱法,研究了不同产地的水飞 蓟药材的指纹图谱,标定个共有峰并采用指纹图谱相似度计算个不同 产地的药材相似度为.,该中药指纹图谱有较好的稳定性和重复性;同 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制各新工艺的研究 时还发现相似度与质量控制指标水飞蓟宾的含量无明显的相关关系,说明选 取特 征峰,建立中药指纹图谱【】,可更好地控制药材质量并为药材质量分析提供 依据。 ...水飞蓟素 水飞蓟素是从水飞蓟果实中提取得到的黄酮木脂素类化合物【, 外观呈淡黄色至棕黄色粉末,不溶于水、氯仿,溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、 丙 酮等溶剂【埘】,主要分布于种壳中,种仁中含量极微【,主要包括水飞蓟宾 ,、异水飞蓟宾、水飞蓟亭、水飞蓟 宁等化合物。水飞蓟素的主要有效成分是水飞蓟总黄酮,其指标成 分是水飞蓟宾。?‖广,,, 。 、反三 簪 图.水飞蓟素中主要成分的分子结构 :水飞蓟宾;:水飞蓟宾;:异水飞蓟宾;:异水飞蓟宾;:水飞蓟宁;:水飞 蓟亭 ..:;:;:;:;:;: 江苏大学硕士学位论文 显色反应 李继平【捌等以水飞蓟宾提取物分别与%溶液、粉和浓、. / 溶液反应,显色情况分别为呈淡黄色、玫瑰红色、深黄色,说明提 取物为黄酮类物质。 紫外光谱分析 张南生【】等以甲醇为溶剂制备样品溶液,采用吸收系数法在 处测定 吸光度,计算水飞蓟宾的吸收系数:兰为.,.%。蓝其田等【以无水 乙醇作溶剂,溶解适量的水飞蓟宾样品,在 处测定吸光度,并计算其吸 ’ 值为.?.。 收系数?伽 红外光谱分析 贾丽娜【】等采用压片,水飞蓟宾的特征峰位是羟基,羰 基,.,以及、、、皆为芳环.之吸收峰。 薄层色谱 李继平等】在硅胶板上用氯仿一乙醇:,/作为展开剂,对水飞蓟 宾标准品和供试品进行展开,挥干后置于碘蒸气中显色,结果显示在值都为 .处,得单一棕色斑点。《中国药典》版【删规定在硅胶薄层板上,以甲 苯.甲酸甲酯.甲酸::,//为展开剂,对水飞蓟宾对照品和供试品进行 展开,晾干,喷%三氯化铝乙醇溶液,置紫外光灯 下检视,二者在 相应位置上,显示相同颜色的荧光斑点。 含量测定 目前水飞蓟素的含量测定主要是采用检测样品中活性最强的水飞蓟 宾的含量。赵迎英【】等采用反相高效液相色谱法,以甲醇.水.乙腈.磷酸 :::.,///为流动相,可将水飞蓟宾的非对映异构体的两个峰完全 分离,并对陕西赛德公司提供的不同批次的水飞蓟提取物中水飞蓟宾含量进 行测 定,而且该方法简便、快捷,适合水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量测定。 游旭彪【】采用高效液相色谱法测定水飞蓟宾胶囊中水飞蓟宾的含量。通过 将 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 。 供试液及对照液在 作全波长扫描,确定检测波长脚;流动 相为甲醇.水.冰醋酸::效果理想,并应用紫外分光光度法和两种 方法进行含量测定比较,结果理想,该方法适合水飞蓟宾的含量测定。 定天明】等采用方法分离并测定德国胶囊、益肝灵片、复方 益肝灵片等水飞蓟素制剂中的水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟亭、水飞蓟宁 等有 效成分的含量。在流动相为甲醇与混合溶剂水.二氧六环:,/梯度洗脱, 流速为. /,柱温为?的条件下,可同时快速、准确测定上述种主 要有效成分的测量。 目前,测定血浆中的水飞蓟素的含量,主要是采用液质联用的方法,来研究 水飞蓟素的药代动力学。 】等采用制备液相的方法纯化和.方法测 定人血浆中水飞蓟宾异构体含量。该制备得到的水飞蓟宾异构体纯度均超过 %,可作为定量分析水飞蓟宾和水飞蓟宾的标准,同时采用.的方 法测定人血浆中的水飞蓟宾和含量,该方法可用于健康受试者的药代动力 学研究。 .】等采用./的方法测定和分析在人血浆中同时存在 的水飞蓟素各成分。目前研究中通过./已确认花旗松素、水飞蓟宁、 水飞蓟宾和、异水飞蓟宾和等主要成分,该方法适合于遵循典型治疗 剂量的水飞蓟素临床药物代谢动力学研究。 结构鉴定 目前,水飞蓟的提取物中成分很多、很复杂,除了水飞蓟宾的异构体外,还 有很多未知的化合物。张丹【等采用%乙醇提取水飞蓟果实得到浸膏后,加水 混悬用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后,将乙酸乙酯部分浸膏经硅胶柱色 谱、 一柱色谱分离后,经结构鉴定后得到水飞蓟宾、,.脱氢水飞蓟宾、 水飞蓟亭、,.脱氢水飞蓟亭、紫杉叶素、二氢槲皮素【】,并首次从水飞蓟 果实 中分出甲氧基紫杉叶素和二氢山奈酚等化合物。 】等采用超高效液相色谱.电喷雾串联质谱法,采用负离子检测 与诱导碰撞解离技术,对水飞蓟中活性成分进行分析,并探讨其二级质谱碎 裂机 制。该方法可快速检测出水飞蓟中的黄酮木脂素类化合物水飞蓟亭、水飞蓟 亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾、水飞蓟宾、异水飞蓟宾异水飞蓟宾并区 江苏大学硕士学位论文 分上述同分异构体。 韩建平【】等采用负离子电喷雾离子阱技术研究水飞蓟宾的结构和裂解途径,, 、/ 对其/ 等特征碎片离子及生成的环和环..键断裂的碎片进 行归属,进一步研究了水飞蓟宾的物质结构和质谱特征。 .【柏】等采用蜊/的方法分离和鉴定水飞蓟中种同分异构 体。通过对特征碎片离子峰进行研究并探讨上述异构体的裂解途径,进一步研究 了该同分异构体的物质结构和质谱特征。该方法对可快速、简便的实现水飞蓟素 化合物的分离及鉴定,对其结构修饰和药理活性研究具有重要意义。 ...水飞蓟油 水飞蓟是一种优良的药用植物和油料植物。紫花、白花水飞蓟果实都含有大 量脂肪,而且不同的栽培地区,含油率也不同,一般为%~%左右,而水飞 蓟籽粒中含油约%,其中油酸含量最高为.%,亚油酸为.%,花生四 烯酸为.%,亚麻酸为.%,即不饱和脂肪酸【】达%以上。水飞蓟油的品 质经研究发现【】,油色浅黄透明,味香、色泽好,无臭无味,无毒,和大豆油有 同等营养价值【】,国外一些国家很早就把它作为食物【删。 水飞蓟油传统提取方法是采用石油醚热提,减压蒸去大量溶剂后,再以氮气 流下除去残存的溶剂,直至符合食用油限量【。等报道了高压萃取法 提取水飞蓟油的新方法。在最佳的条件下,通过二氧化碳高压萃取得到的水飞蓟 油转移率高于传统的石油醚提取,且富含维生素。王维敏【钥等将机械压榨后的 水飞蓟籽油进行碱炼脱酸、活性白土脱色及水蒸气蒸馏脱臭的工艺进行初步的研 究和优化,为提高水飞蓟籽油的精炼品质提供参。 水飞蓟油可用于防治动脉粥样硬化、高血压【却】,可以食用,可以作为抗皱 护肤品的填料。在工业生产上,由于水飞蓟油中含有大量不饱和脂肪酸而且碘价 较高.%一.%,是较好的干性油,同时因为水飞蓟油还具有优良的耐 久性、保色性,是造油漆及清漆的优良原料【。 ...水飞蓟蛋白和氨基酸 水飞蓟种仁蛋白质是一种优质蛋白,含量为.%,高于一般谷物,其中 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 以清蛋白最高,占总蛋白的.%,球蛋白的含量为.%,醇溶蛋白的含量为 .%,谷蛋白的含量为.%【铝】,其效价在大豆蛋白和小麦蛋白之间【。水飞 蓟种仁含有种氨基酸,其中谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸含量丰富,蛋氮酸含 量较少。必需氨基酸和总氨基酸质量分数分别为.%和.%。氨基酸评分 表明赖氨酸和含硫氨基酸分别是第和第限制性氨基酸【】。 朱淑云】等研究了水飞蓟粕蛋白的酶解及其酶解物的抗氧化活性。该研究发 现该酶解物清除羟基自由基和自由基的能力超过其他天然原料的酶解物, 可作为新的研究方向和用途开发。 ...微量元素 现代科学研究己经发现,特定状态的微量元素是保持身体健康、维持机体代 谢平衡和防病治病的重要条件之一【】。蔡秀兰【】等人采用.和.测 定水飞蓟果实、水飞蓟油渣和水飞蓟素提取物中元素后发现,、、、、 等种无机元素大多数元素都在油渣中,其次是果实和提取物。由于水飞蓟 中、含量很高,可在治疗慢性肝炎过程中适当补充体内的、,保持元素 代谢平衡,从而起到保肝、纠正代谢紊乱的作用【】。 .水飞蓟宾的研究进展 水飞蓟宾分子式为,摩尔质量分数为.。水飞蓟宾由一对 立体异构体水飞蓟宾和水飞蓟宾组成。水飞蓟宾为含分子水的白色结晶 粉末,熔点。,。分解。水飞蓟宾可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯, 微溶于氯仿,脂溶性很差,在水中溶解度低,仅为. /。 ..水飞蓟宾的药理活性研究 由于水飞蓟宾安全无毒【删并显示出保肝【】和抗氧化【】的活性而备受关 注, 其中水飞蓟宾表现出的抗病毒【、抗癌和肿瘤预防作用已经显示出很好的开 发潜 力。它被广泛应用于医药、保健品和化妆品等产品中。 江苏大学硕士学位论文 保肝作用 水飞蓟宾的保肝作用显著。杨逊等【采用四氯化碳小鼠腹腔注射的方法,成 功复制由四氯化碳引起的小鼠急性肝损害【吲模型后给药治疗,通过测定小鼠血清 中的丙氨酸转移酶、天冬氨酸转移酶及观察肝脏病理组织学改 变,结果表明,水飞蓟素.脂质体对上述指标有明显的改善作用,对小鼠肝 损伤的预防、治疗作用显著。 抗肿瘤作用 水飞蓟宾的抗肿瘤作用研究已成为新的亮点,而且有很好的发展前景。 】等发现水飞蓟宾对膀胱癌细胞具有良好的抑制作用。近年研究发现水飞 蓟素和水飞蓟宾对肺癌、皮肤癌【吲、结肠癌、前列腺癌等也具有良好的抑制作用, 且水飞蓟宾己进入治疗前列腺癌的期临床试验【。 抗炎作用 水飞蓟素的抗炎作用主要是靠抑制脂氧酶和环氧酶,清除自由基,从而发挥 抗炎的功效。等【】研究由角叉菜胶造成的急性炎症和甲苯造成的小鼠耳肿 胀实验模型后,水飞蓟宾不同给药途径治疗的药效学试验,结果显示水飞蓟宾有 一定程度的抗炎作用,且不同给药途径由于生物利用度不同,产生的药效也不同。 其他作用 水飞蓟宾抑制肝匀浆中和生成作用,即增强脂质过氧化物清除 和防止形成能力,故水飞蓟素可用于预防糖尿病并发症。服用水飞蓟宾的 小鼠接受线全身照射后,放射病变表现较轻,存活的小鼠体重减轻的慢,恢 复较快,生存率提高。周蓓等【】实验证明水飞蓟宾能降低缺氧、缺糖心肌细胞受 损程度,不仅能增加心肌细胞的耐受性,而且能部分对抗异丙肾上腺素对缺糖、 缺氧心肌细胞的损伤作用。 ..水飞蓟宾制剂研究概况 水飞蓟宾难溶于水,脂溶性差、臼服吸收也差,造成生物利用度很低,从而 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 大大影响了其临床应用【亿。为此,国内外研究人员通过制成水飞蓟宾磷脂复合 物、水飞蓟素羟丙基..环糊精包合物【】、水飞蓟宾.葡甲胺盐【刁等方法增强 其脂溶性和水溶性;也有采用制成固体分散体【、自微乳药物传递系统、 脂质体和前体脂质体翻、纳米胶束‘等剂型,以增强水飞蓟宾的口服生物利用 度,更好的发挥药效,为以后更多高生物利用度的水飞蓟素新剂型的研究开发 删以及将来应用于临床提供参考。 目前,水飞蓟素上市的药物有口服制剂:水飞蓟素片、益肝灵片、水飞蓟宾 胶囊即水林佳、水飞蓟宾卵磷脂复合物硬胶囊。商品名有:利肝隆、利加隆、 益肝灵等。注射剂主要是做成水飞蓟宾衍生物,如葡..甲胺盐。 .水飞蓟素的提取技术研究 目前,实验室中水飞蓟素的提取方法主要是常温浸提、索氏萃取旧、 热回流提取,所选用的试剂主要是甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。而有机溶 剂连续回流多次回收法提取【】由于减少了溶剂的相对使用量,从而比单纯的热回 流法节约了部分能耗,对工业生产降低成本具有重要意义。杨粉婵【等采用下交 试验法优选提取水飞蓟总黄酮的工艺。通过考察乙醇浓度、提取时间、提取次数 ,提取的工艺效率 的因素进行研究,结果采用倍%乙醇提取次,每次 高,增加水飞蓟的利用率。 常温条件下,超高压萃取水飞蓟素的最佳工艺条件已被研究【】。试验采用紫 外分光光度法测定水飞蓟素含量,正交试验设计优化的最佳工艺条件如下:溶剂 ,液固比 提取物纯 为%乙醇/,压力 /,提取时间 度.%,水飞蓟素转移率.%。超高压提取具有提取温度低室温、耗时 短、耗能少等特点,但将此技术推向大规模工业生产还有一些困难。 超声波辅助萃取法是近年来被用于黄酮萃取的一种新方法,也被用于 研究水飞蓟中水飞蓟素的萃取【蚴。从单因素试验所得出的最优萃取条件为超声温 度?,超声时间 ,超声功率%,料液比:,在此条件下进行重 复试验,从原料中萃取得到水飞蓟总黄酮为.%,水飞蓟宾为.%,重复 性较好。从萃取结果来看,超声波辅助萃取法要优于传统的萃取方法。 微波辅助方法提取水飞蓟裂,与传统热回流提取和索氏提取方法相 江苏大学硕士学位论文 比,有省时、萃取率高、低溶剂消耗等优点。通过单因素试验和二次正交旋转组 合试验,研究了提取溶剂乙醇浓度、提取时间、提取温度及料液比等因素对飞蓟 素转移率的影响,运用响应曲面方法优化了微波辅助提取水飞蓟素的最佳工艺条 件,并建立了提取的回归数学模型。结果表明,以.%乙醇/为提取溶剂, 提取温度?,提取时间 ,料液比:/,在该条件下水飞蓟素 转移率为.%。所建立的数学回归模型能够较准确地预测微波辅助提取水飞 蓟素的转移率【】。 】等采用响应面方法优化微波辅助提取水飞蓟宾的方法,通 过对提取时间,提取温度,醇浓度,料液比因素的考察,结果表明提取温度,乙 醇浓度料液比对转移率有显著影响,而提取时间的影响不显著,而且试验结果表 明,微波提取可用来代替传统耗时耗能的提取方法。 水飞蓟原料脱脂后再提取水飞蓟素,效果更显著。李玉山【】等采用矿 溶剂油脱脂后,再用乙醇、乙酸乙酯、丙酮为提取溶剂,加热回流的方法提取。 经过脱脂后去除了可能起屏蔽作用的油脂成分,有利于提取过程中水飞蓟素的渗 出,经过原料脱脂前后和不同溶剂提取比较后,最终采用群溶剂油脱脂后,选用 用量少、易回收、耗能少的乙酸乙酯为提取溶剂。 水飞蓟宾可溶于碱性溶液,不溶于酸性溶液。任冰如阳等采用甲醇、 %乙醇、醋酸乙酯及丙酮等不同溶剂和碱提酸沉法提取水飞蓟素的效果比较, 通过分析检测发现,甲醇提取水飞蓟素和水飞蓟宾的效果最好,丙酮和乙 醇效果次之,醋酸乙酯效果最差但由于甲醇和丙酮有毒性,且丙酮极易挥发, 生产操作安全性差。而碱提酸沉法易使水飞蓟宾结构发生变化,导致有效成分含 量降低,提取物杂质增多,且该方法由于大量使用酸、碱水溶液,会引起废酸废 碱水处理的问题,不宜用于水飞蓟素提取。 此外,国内史劲松【】等提出,由于水飞蓟素主要存在于水飞蓟种皮中, 所以建议将水飞蓟籽粒壳仁分离后,采用乙酸乙酯提取水飞蓟种皮中的水飞蓟 素,可缩短提取时间且获得较高转移率;国外已有试验证明,在水飞蓟细胞培养 基中加入酵母萃取物和甲基茉莉酮酸酯诱导,可以改善二级代谢产物的积累,能 更好地研究分子生物和复杂代谢路径的调节功能【叫,从生物技术角度分析,将来 壳仁分离后再提取会成为提高水飞蓟素产量的一个新起点。水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 .水飞蓟宾的纯化技术研究 目前,水飞蓟宾的纯化主要采用甲醇、丙酮、乙醇等溶剂多次重结晶 的方法,辅以活性炭吸附除杂。董岩【】等分别用上述溶剂加热溶解水飞蓟素后, 滤去不溶物后室温放置天后,抽滤,固体用少量溶剂洗次,再用石油醚洗 次,母液重复上述操作后,烘干获得水飞蓟宾,综合比较之后,发现丙酮转移率 最低,最终选用乙醇作为重结晶溶剂。 史劲松【】等比较了使用甲醇、乙酸乙酯、丙酮等溶剂体系下水飞蓟宾的收率 和纯度,随着石油醚用量增加,重结晶收率有显著增加,但纯度略有下降。相比 而言,甲醇体系下,水飞蓟宾在收率和纯度上均较为理想,经甲醇次重结晶水 飞蓟宾纯度可达到.%,水飞蓟宾转移率为.%。 将溶剂提取所得的浸膏上柱层析,采用有机溶剂洗脱的方法,也可以 纯化水飞蓟宾。何维明等人【将乙酸乙酯提取水飞蓟所得浸膏与倍量硅胶研 磨均匀后,上硅胶柱. 层析,用苯、苯.乙酸乙酯:,/和苯. 乙酸乙酯:,/依次洗脱,分段收集,其中第.分段为水飞蓟果实中的 主要有效成分的洗脱液,合并回收溶剂后,用热甲醇溶解,放置过夜析出白色 粉 末状结晶。 任冰等将提取水飞蓟籽粕后的甲醇提取物,装聚酰胺柱,先用丙酮.水 溶液%~%梯度洗脱,合并浓缩%%的洗脱部分。浓缩物上聚酰 胺柱. ,乙醇.水溶液%%梯度洗脱,合并浓缩% 乙醇洗脱部分,再重复上一次操作,合并浓缩%乙醇沈脱部分,经重结晶得到 水飞蓟宾纯品。 李继平等人【】比较了精制水飞蓟宾的两种方法。柱色谱法分离:用? 目硅胶拌样、研细后上样,以氯仿.甲醇:,/作洗脱剂。该方法分离所 用时间短,纯度高但耗用溶剂多,成本较高。传统的重结晶分离:先将样品进 行 超声波溶解.再用乙醇作溶剂进行重结晶。该方法消耗的溶剂价格低廉,操作 简 单,容易控制,但耗时长。 采用碱液洗脱,再水洗至中性的方法,也可用于水飞蓟宾的纯化。李 玉山陋等将用乙酸乙酯提取水飞蓟宾的粗提物,分别采用%乙醇加热溶解后 活性炭脱色、乙酸乙酯溶解后加%碳酸氢钠洗脱后再水洗至中性、%碳酸氢钠 江苏大学硕士学位论文 溶解加群溶剂油萃取,加盐酸酸化再用乙酸乙酯水洗至中性、乙酸乙酯溶解 后以 氯仿.甲醇:,/洗脱等种洗脱纯化方式进行比较,发现乙酸乙酯溶解 后加碳酸氢钠碱液洗脱后水洗至中性的方法,不加入其他溶剂,成本低,操作简 单,纯度可达.%,转移率为.%。 采用大孔树脂和凝胶型树脂的方法,从水飞蓟的提取物中纯化得到水 飞蓟宾。张良等人【】分别采用萃取法和大孔树脂法纯化得提取物,紫外测定总 黄酮含量和高效液相色谱法测定水飞蓟宾含量。萃取法:取一定量浓缩液,用醋 酸乙醋萃取两次,合并萃取液浓缩至干,得提取物。大孔树脂法:取一定量浓缩 液,上树脂柱,水洗除杂,然后用%乙醇洗脱倍柱体积,合并洗脱液 浓缩至干,得提取物。通过分析比较提取物总黄酮量和水飞蓟宾的量后发现,采 用萃取法得到结果比大孔树脂纯化的结果好且该水飞蓟宾纯化工艺稳定。因此采 用萃取法对水飞蓟素进行纯化。 王旭瑞等【】采用正己烷浸泡水飞蓟榨油后的饼粕粉末,滤渣挥发尽正己烷, 得到脱油水飞蓟粉。用%的乙醇提取,测得水飞蓟宾的含量.%, 回收率.%。后将提取液通过一、.等凝胶型树脂,先用%浓度 乙醇,洗脱倍柱体积,然后用%乙醇洗脱至无黄酮反应,收集有黄酮反应 的流份,分别浓缩,干燥。结果发现,采用.富集水飞蓟宾的方法,水飞 蓟宾含量为%;但.树脂得到产品含量也同样接近%,并且成本低, 可以达到规模化工业化生产要求。 高速逆流色谱法是一种有效的分离工具,也是植物有效成分纯化和定 量的有效方法。 叫等采用方法从.冰飞蓟素粗品中精制水 飞蓟宾的过程中分离纯化出 冰飞蓟宁、 然飞蓟亭和 花旗松素, 而且纯度均超过%。 采用高速逆流色谱和制备高效液相的方法,可用于水飞蓟宾和异水飞蓟宾单 体的制备。郑巨约【】用超声波辅助乙酸乙酯浸提脱脂水飞蓟种皮三次,减 压浓 缩,得到水飞蓟素。用石油醚..乙酸乙酯.甲醇.水:::,///溶剂系统, 采用高速逆流色谱法分离水飞蓟素得到水飞蓟亭和组分二,组分二采用溶剂 系统 叔丁基甲醚.甲醇.水::,//,分离得到水飞蓟宁、水飞蓟宾和异水飞蓟宾。 用制备型高效液相色谱法从水飞蓟宾和异水飞蓟宾分离得到单体水飞蓟宾、 水 飞蓟宾、异水飞蓟宾和水飞蓟宾,该方法适用于以上单体标准品的制备。 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 .本课题的立题背景及意义 水飞蓟自从德国引进在东北黑龙江、吉林等地试种后,随着医药市场不断增 大的市场需求,种植面积迅速增加,范围也从东北扩大至西北、华北、江南等地。 年起,我国许多药厂以水飞蓟为原料生产的产品数量不断上升【。因此, 水飞蓟原料市场供不应求,水飞蓟宾等产品在国内外也是供不应求。 由于我国水飞蓟素生产是直接将水飞蓟籽冷轧取油,壳渣采用石油醚、汽油 脱脂后用有机溶剂提取水飞蓟素。该工艺对获得的水飞蓟油和水飞蓟素的质量都 有一定影响,在获取水飞蓟油的过程中,色素、蜡质等成分溶入油内,使水飞蓟油 色泽不够亮艳,同时也会损失少量水飞蓟素;在提取水飞蓟素过程中,由于壳渣 中残留蛋白和脂肪增加物料体积,从而增加了对溶剂的消耗,而且提取物中杂质 增多,不利于后面水飞蓟宾的精制和纯化,而且提取后剩下的残渣通常被废弃处 理或作为肥料、饲料【叫,限制了它的进一步开发利用。 因此,水飞蓟资源的综合开发利用,壳仁分离已成为企业迫切需要解决的难 题。本课题组与江苏中兴药业有限公司合作,承担镇江产学研项目“水飞蓟脱壳 研究及高纯度水飞蓟宾的制备技术研究”。本文是作者承担的该项目的部分研究 总结 .本课题研究的主要内容 由于水飞蓟种皮、种仁结合严密,普通脱壳机械很难将两者有效剥离,种皮 和种仁韧性不足、易碎,比重也较为接近,对筛分和风选设备的分离性能要求高。 由于本课题组自主研发的水飞蓟脱壳机可完成水飞蓟籽的壳仁分离,可应用于工 业化生产,从而为水飞蓟资源的综合高效利用创造条件。 论文的主要研究内容分为四个部分,总结如下: 水飞蓟籽的脱壳工艺及水飞蓟壳原料的制备 采用本课题组自主研制的水飞蓟籽脱壳机,以粉碎率和片状壳仁比率为考察 指标,优化脱壳机脱壳的外筒类型和拨料叶片类型及脱壳工艺。脱壳后,经过壳 仁分离,收集水飞蓟壳原料备用。 江苏大学硕士学位论文 以水飞蓟壳和水飞蓟粕为原料,从中提取水飞蓟素的效果比较研究和 乙酸乙酯提取水飞蓟素浸膏的脱杂条件研究 分别以水飞蓟壳和水飞蓟饼粕为原料,筛选不同的有机溶剂回流提取水飞蓟 素,比较二者的提取效果,从而为以水飞蓟壳为原料提取水飞蓟素的新工艺提供 参考。通过单因素试验结果和彬汽油脱脂前后水飞蓟素浸膏的脱杂效果比较, 并采用响应面分析法,优选乙酸乙酯提取的水飞蓟素浸膏脱杂的最佳方法。 相关杂质共存条件下水飞蓟宾的溶解性及高纯度水飞蓟宾的制备研究 通过测定含有不同相关杂质的原料中水飞蓟宾和相关杂质成分的溶解特性, 从而为制备高纯度水飞蓟宾提供依据,实现以水飞蓟壳作为原料获得高纯度水飞 蓟宾的新工艺。 结晶残液中化学成分的研究 水飞蓟宾在纯化洗脱或结晶纯化过程中,有部分水飞蓟宾溶解于洗脱液或结 晶残液中而损失。采用液质联用的方法分析,并与文献比对后,鉴别结晶残液中 的化学成分,为结晶残液中水飞蓟宾的回收技术研究提供参考。 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新艺的研究 第二章水飞蓟籽的脱壳及水飞蓟壳原料的制备 中药水飞蓟为菊科水飞蓟属植物水飞蓟 . .的干燥成熟果实,是一味常用的清热解毒、疏肝利胆药物。 目前水飞蓟素提取工艺大致为:水飞蓟全籽压榨脱油榨油后的水飞蓟粕提 取水飞蓟素一残渣饼粕。在该工艺中,果壳的存在使水飞蓟油和水飞蓟残渣饼粕 的品质较差,通常被废弃处理或作为肥料,限制其进一步开发利用:同时,果仁 的存在也使水飞蓟素及水飞蓟宾的提取与纯化工艺复杂化,增加了生产成本。 因此,要实现水飞蓟籽的综合利用,首先需要实现壳与仁的分离。本章主要 通过对水飞蓟籽的破坏强度进行测定,水飞蓟脱壳机的外筒类型、拨料叶片 类型 等条件的研究,以脱壳后的粉碎率及片状壳与仁比率为考察指标,从而确定 水飞 蓟籽脱壳的最佳条件,为进一步的工业化生产提供参考依据。 .仪器与试药 ..试验仪器.物性分析仪 上海灯具厂制 目分样筛 电子分析天平 ..试验材料 水飞蓟籽,江苏中兴药业有限公司提供,含水量约.%,经江苏大学药学 ..的干燥成熟果 院陈钧教授鉴定为菊科植物水飞蓟 实。水飞蓟籽经脱壳机脱壳后,收集水飞蓟壳、水飞蓟仁见图.、.,保 存。所有标本存放于江苏大学药学院标本室,编号: 江苏大学硕士学位论文 图.水飞蓟壳 圈.水飞萄仁 ?. 飚. ..试验设备 课题组研制主要由电机、支架、转轴、外筒、转盘、进出料斗 脱壳机 等部分组成,电机转速由变频器控制,见罔. 圈.脱壳机设备圈 .水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 .试验方法 本章内容主要通过研究脱壳机外筒类型和拨料叶片类型的不同,寻找实现水 飞蓟籽粒脱壳的最佳组合条件,具体流程见图.。 脱壳后的粉碎率 片状壳与仁比率 图.本章的试验流程图 ...水飞蓟籽粒破坏强度测定 为了把握水飞蓟籽粒的破坏强度特征,本文参照文献方法【吣】对水飞蓟籽 的 长度、宽度及厚度方向的破坏强度进行了测定,从各测定曲线上读取首次裂 纹出 现时的压力值,数据统计处理。 ..水飞蓟籽脱壳机的外筒 本文采用了两种外筒:节距 珊,深 的形齿筒;节距 蚴,深 的锯齿筒。所采用的外筒主要考虑如下:筒壁内表面具有齿形结 构,快速被抛出的水飞蓟籽粒与其碰撞时,沿筒壁的切向分速度将被有效“制 动”, 可更有效将水飞蓟籽粒的动能转化成破壳能。外筒设备外形见图.。 江苏大学硕士学位论文 圈脱壳机外筒谩鲁围 忸 疃 ..拨料叶片类型 本文主要采用了两种拨料片.,,见图.。 直线形拨料叶片:片直线形拨料片沿径向均匀布置在甩盘上,外端 与甩盘边缘平齐。 曲线形拨料叶片:片外端与甩盘外缘平齐,后掠形拨料片。圈.直绒形和由巍 形拨料片与外筒粗鲁 佃:直线拨科片与肯筲组合;:由巍援井片与锯齿筒组合 睡. : ;:? 永飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 ..水飞萄籽的脱壳试验 开机后,待机器运转平稳,以 ‖的速率人工匀速喂入约水飞蓟 籽,用目的尼龙口袋在出料口收集脱出物。因实现壳与仁的分离,需尽可能 少产生小于目筛孔径的粉碎物,且壳应尽可能少的粘附油脂,以避免为后续 纯化处理造成干扰,所以考虑以小于日筛的粉碎物比率可%及大于目筛 的片状壳与仁的比率%为考察指标。脱出物充分混匀后随机取样约 ,准 确称重,过目筛后,筛下物作为粉碎物,称重。手工挑选出筛上 物中的完整籽粒,余下物为片状壳与仁,称重。按下式计算%及%。 %/% 式. 式. ?%/‘% .结果与讨论 ..水飞蓟籽破坏强度的测定结果 从各测定曲线上读取首次裂纹出现时的压力值,数据统计处理结果见图.。 水飞蓟籽的强度特性偏脆性易碎,水飞蓟籽长、宽、厚三个方向的破坏强度 分别 约为、、,而与线性尺寸约是其三倍的葵花籽长宽方向的破坏强度 仅约为及【相比较后,并在外形上测量,水飞蓟籽长轴两端壳厚约 ...腰部壳厚约.加.衄,如图.,由此可见水飞蓟籽脱壳的难度。 暑 趔 始 盆 辅 碟 皿 赛 丑 血矿 占国目矿 由藏 黧 班越噩馨器瓣蠢 因.葵花耔和水飞蓟耔外形 固.水飞蓟籽拉内出现首次鞋垃的压力值 毗矗哺衄 啦. 醇.鼬帅恤 江苏大学硕士学位论文 ..外筒与直线形拨料片组合的试验结果 齿筒及锯齿筒都是具有规律性不平整内表面的刚性筒,与直线形拨料片组 合后,脱壳后粉碎率及片状壳仁比率的试验结果见图.、.。 ,、 善 蒌 察 . ?; 。一, ?一齿筒 直接料片外端圆周速度/ 齿筒 直援料片井端日周速度, 图.齿筒与直拨料片组合的脱壳效果 . 罄 .竖 咿竖 / / 多 形 基‘哥譬霉 ?/,‘ 直接料片井端日周速度/ 锯齿篱 锯曲筒 直接料片井端日用逮度/ 图.锯齿筒与直拨料片组合的脱壳效果 .由于齿比锯齿密集,被甩盘抛出的水飞蓟籽粒大体以其轴线沿外筒径向、 并以大端在前的姿势冲向外筒壁面,其大端有较大的可能性嵌入齿槽中被制 动,露在齿槽外的半截由于剩余动能的驱使而企图继续前冲,致使该水飞蓟 籽 拦腰折断,导致粉碎率上升。 ..外筒与曲线形拨料片组合的试验结果 齿筒及锯齿筒与曲线形拨料片组合后,脱壳后粉碎率及片状壳仁比率的试 验结果见图.、.。 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 册 ?甓 ;; / ;嚣 :; / ? 巧 誊 / 加 薯 芒鼍鬣算堑 坫 ;一????????~一?????? 。? 加 . . . . .. . “. . . 一 篱 ?重辑片井墙周连度『/ ?叠辑片井端?周逮麈/ 伽齿筲 图. 齿筒与曲拨料片组合的脱壳效果 . 薯‘鼍譬善止 掌?肇奢 婚帕强?巧拍坞?; ,,;; ???????一一膳齿篱 由擅料片井塌日周速度瑚 抽齿 ?援辩片井填胃毫崖, 图.锯齿筒与曲拨料片组合的脱壳效果. 对于曲拨料片,在相同粉碎率条件下,长节距锯齿筒的脱壳效果优于短节距 齿筒。分析认为,这两种外筒的内壁都具有对水飞蓟籽的切向速度进行制动的 齿壁,有利于将其动能转化为脱壳能,但是,齿节距大体和水飞蓟籽的长度相 等,被曲拨料片抛出的水飞蓟籽以其正面和齿筒壁碰撞时,有较大的概率横架 在相邻的两个齿槽顶上被“拦腰”折断,增加粉碎。 通过图.一.可以发现,随着水飞蓟籽粒抛出的圆周速度逐渐加快,即 主轴的转速加快,所有组合的脱壳率上升,同时相应产生的粉碎率也都逐渐上升。 因此,在脱壳率一定的条件下,为获得较低的粉碎率需限制脱壳机的转速。 .本章小结 脱壳效果取决于拨料片的形状及外筒的内表面形状。目前,在本实验江苏大学硕士学位论文 范围内,曲线拨料片与锯齿筒相组合,可获得相对较低粉碎率及相对较高片状壳 仁比率,是目前所有组合中最佳的脱壳条件。 在各种试验条件下,当水飞蓟籽粒抛出时的圆周速度上升,大于目 筛孔径的片状壳仁率及低于目筛孔径的粉碎物也都逐渐增多,而壳仁的粉碎 率是限制脱壳机转速升高的重要因素。因此,为了满足低粉碎率,水飞蓟籽宜考 虑采用多次循环脱壳策略。水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研究 第三章 水飞蓟素提取新工艺研究 近几十年来,通过对水飞蓟资源的持续研究与开发利用,我国已经形成了从 基源植物栽培、药材与饮片加工,到提取物与单体制取、保健品与药品生产的水 飞蓟产业链。 水飞蓟素,主要存在于水飞蓟籽的壳即外种皮中,果 仁中基本不含有。为了实现水飞蓟资源的高效综合利用,在前期已建立水飞蓟籽 脱壳技术的基础上【】,本文以水飞蓟壳或水飞蓟粕为原料,以乙酸乙酯、无水 乙醇、%醇、丙酮为提取溶剂,研究比较水飞蓟素及水飞蓟宾, 的提取效果,以探讨水飞蓟籽壳仁分离的必要性,并为制药工业中以水飞蓟壳为 新的提取原料时,水飞蓟素及水飞蓟宾提取新工艺的改进提供参考。 .仪器与试药 ..试验仪器 舢 北京赛多利斯仪器系统有限公司 电子天平 瑞士公司 .旋转蒸发仪 .数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 公司 紫外.可见分光光度计 . 日本岛津公司 武义县屹立工具有限公司 .五两装高速中药粉碎机 上海灯具厂制 目分样筛 江苏金坛市医疗器械厂 .系列数显恒温水浴锅江苏大学硕士学位论文 ..试验试剂 标准品 中国药品生物制品检定所 批号:. 甲醇 国药集团化学试剂有限公司 色谱纯 纯净水 杭州娃哈哈集团有限公司 其余试剂均为分析纯 ..试验原料 本课题组研制的脱壳机制备水飞蓟粗壳。水飞蓟粕粗原料由江苏中兴药业有 限公司提供。将水飞蓟粗壳和水飞蓟粕粗原料粉碎后过目分样筛后烘干,称 取干燥的粉末按:料液比原料重:溶剂体积,:加入石油醚~。 在微沸状态下回流提取次,每次 ,抽滤滤去溶剂,滤渣烘干后,作为 提取试验原料称水飞蓟脱脂壳、水飞蓟脱脂粕备用。 .试验方法 本章主要研究从两种脱脂原料中提取和的效果比较,为制药工业中 从水飞蓟壳中提取水飞蓟素及水飞蓟宾的新工艺改进提供参考,主要流程见 图 . 水飞蓟壳和水飞蓟粕为原料的提取物 作为供试品溶液 上 水飞蓟素和水飞蓟宾标准曲线的建立 及稳定性、重复性、同收率等方法学考察 供试品中的水飞蓟宾和水飞蓟素 含量和提取率的结果比较 图.本章的试验流程图. 水飞蓟素提取及高纯度水飞蓟宾制备新工艺的研 究 ..水飞蓟宾和水飞蓟素的分析条件 用.测定;流动相:甲醇..%冰醋酸水溶液:,/; /,柱温:室温。 进样量: /检测波长: .;流速:. 。 用测定;空白:甲醇;检测波长: ..水飞蓟宾及水飞蓟素含量测定的方法学考察 ...对照品溶液的制备 ,精密称取. 容量瓶中, 将标准品在。中烘 置于 加甲醇溶解并定容后,作为储备液备用。 ...供试品溶液的制备 分别称取水飞蓟脱脂壳和水飞蓟脱脂粕原料. 甲醇, ,精密加入 ,放冷,加甲醇补足至原重量,抽滤,摇匀,即得供试 称重,水浴加热回流 品溶液。 ...水飞蓟宾及水飞蓟素的外标曲线建立及线性关系考察 置入 :精密吸取储备液.、.、.、.、.、. 容量瓶中, 加甲醇稀释至刻度,得各浓度的对照品溶液。 容 :精密吸取储备液.、.、.、.、.、.、.置入 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,得各浓度的对照品溶液。 ...专属性考察 分别吸取水飞蓟宾对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂,按照“..项 下的分析条件分析,色谱图。观察空白溶剂对供试品测定有无干扰。 ...精密度试验 取同一浓度的对照品溶液,按“..项下的分析条件和分析,江苏大学硕士学位 论文 计算峰面积和吸光度的。 ...重复性试验 取同一供试品溶液,按“..”项下的分析条件和分析,计算 含量和含量的。 ...稳定性试验 取同一供试品溶液,于、、、、 ,按“..”项下的分析条件 和分析,计算含量和含量的。 ...加样回收试验 取已知含量的样品,精密加入对照品适量,按“...项下供试品溶液的 制备方法制备,按“..项下的分析条件和分析,计算含量 和含量的的平均回收率及。 ...原料中水飞蓟素和水飞蓟宾含量的测定 分别称取水飞蓟脱脂壳和水飞蓟脱脂粕原料. 甲醇, ,精密加入 称重,水浴加热回流 ,放冷,加甲醇补足至原重量【】,摇匀,. 微孔 滤膜滤过,续滤液供及法分析测定,求出水飞蓟脱脂壳和水飞蓟脱脂 粕原料中和的含量及。 ..不同溶剂提取水飞蓟宾和水飞蓟素的研究 分别称取. 水飞蓟脱