脂肪颗粒组织在不同条件下冻存后活力分析及移植成活率研究

脂肪颗粒组织在不同条件下冻存后活力及移植成活率研究 第四军医大学 硕士学位论文脂肪颗粒组织在不同条件下冻存后活力分析及移植成活率研究 姓名:肖斌 申请学位级别:硕士 专业:外科学(烧伤) 指导教师:于晟 20050501 、。, ,,,,,, 独铡,性声明 秉承学较严谨的学风与伉良的科学道德，本，声明所呈交的论文是莪个，在导师指导下进行的研究工作硬取碍的研究成果(，琢我所知，豫了文中特别加以标注韧致谢前地方斗(论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本，或他，已申请学谊或其他用途使用通的磺采，与藐一目工作的同吉对本研究所擞的狂问贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。 申请学位论文与资料若肓不宾之处，本人承埋一切相关责任( 诧文作吉差各 日期(兰叮„生 保护知识产权声明 本，完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即:研究生在较攻,霎学位期僻论文工作的姐识产较单位羁第四军医大学，南，保证毕业离较后(发表,，文或睫用,，文工怍威果时署若单位衍黧为第四军医大学，学校可以公布论文的全部或部分内容(含电子版，曝密内客除外)，司以录用影,,,，缩印或其伯复朝手,保存论文。学较肓,允许论文掖查阋和蜡阿，并在校园网上提,,,论文内容的:,,～,览和下载服务。 论文作古蔓各 而。， 导哺签名 日蝌(,,一型 第四军医大学硕士学位论文 缩略语表缩略语 英文全称 中文全称,, ,,,,,,,, ,,,,,, 肌酸激酶,(,(,, ,，,?,,,,,,,,,铮?,，,(丙二醇,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,, 聚乙二醇,,,,,,,, ,,,,,,,, ,，,,,,,,,,, 二甲基亚砜,,, ,,,,,,,,, ,、,,,,,,,,,,,,, 三磷酸腺苷,,, ,,,,,,,,, ,、,,,,,,,,,,,, 二磷酸腺苷,,, ,,;,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,,,,, 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,,,, ,,;,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,,,,, 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 第四军医大学硕士学位论文脂肪颗粒组织在不同条件下冻存后活力分析及移植成活率研究 硕士研究生:肖斌 导 师:于晟 教授(主任医师) 兰州军区兰州总医院烧伤整形科，甘肃兰州,,,,,, 中文摘要 目的:寻求不同温度下脂肪组织冻存时适宜的低温保护剂;研究冷冻脂肪组织的活力及移植成活率。方法:,、在(,,?(普通家用冻箱)、(,,?(深低温冰箱)及(,,,?(液氮)条件下，加入不同的低温保护剂，冷冻脂肪组织，,,小时后测定肌酸激酶活力进行低温保护剂的筛选。,、在上述温度条件下加入相应的低温保护剂，冻存脂肪颗粒，分别于,周、,周、,周时取出复温，采用肌酸激酶法、台盼蓝染色法测定其活力;采用生物移植法研究其移植成活率，于移植后,周切取移植物，测量其体积、行苏丹,染色。结果:,、,,,,?组以,,,,,甲基皿砜，,,丙二醇为低温保护剂时脂肪组织活力最高;,,,?组为,,,,,甲基亚砜;,,,。,组为,,,,甲基亚砜，,,丙二醇，,,聚乙二醇。,、(,,,?组及(,,”,组较好保持了脂肪细胞活力，冻存,周后分别达冻存前的,,,和,,,，各时间点统计学比较无明显差异;而(,,,〕组冻存,周后活力已不到,,,，各时间点统计学比较差异显著 (,,,(,,,)，随时间延长表现为进行性下降趋势。,、,,,,?组及,,,?组移植成活率与新鲜脂肪移植成活率相比无统计学差异，,,,”,组移植成活率与新鲜脂肪移植成活率比较统计学差异显著(,,,(,,,);,,,”,组移植物苏丹,染色观察以炎性反应为主，几乎无成活脂肪细胞， 其余各组均可见大量 第四军医大学硕士学位论文成活脂肪细胞。结论:,、(与不使用低温保护剂相比，低温保护剂能较好保持冷冻脂肪组织活力，不同冻存条件下其最适宜的低温保护剂各异。,、(,,,?及,,,?条件下短期内(,周)冻存脂肪颗粒具有可行性，适用于临床重复移植需求。,、(,,?条件下冻存的脂肪颗粒活力明显降低，移植后虽可维持一定体积，但有可能仅起到一种软组织填充剂的作用，在此温度下冻存的脂肪颗粒应用于临床注射不应得到提倡。关键词 脂肪颗粒低温保藏低温保护剂活力成活率移植 第四军医大学硕士学位论文 ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ;,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,:,,,, ,,, ,,,,,,,,,,:,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,; ,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,,,, ,,印,,,,，,,,,,,, ,,,,,,,，,,地,,,,,,, ,,,,,,，,,,,, ,,,,,,;, ,,,,,,;, ,,,,;,,,, ,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,;,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,(,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,?,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,, ,(,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ;,,,,,,,,;,,,,，,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,一, ,?,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,,)，,,,?(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,),睿洹ぃ保梗丁妫妫欤椋瘢睿椋?,,,,,,,,)(,, ,,,,, ,,,,,，,,, ,;,,,,,, ,, ;,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,，,,,, ,, ,;,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,;,,,(,(,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,;,,,，,,, ,,,,,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,,,,,( ,,,,,,, ,, , ,,,,,，, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,—,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,，,,,,;,,,,,, ,, ,,,,,, ,乱,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ;,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,;,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,;,, ,,,,,,,,,,,,(,,,,,, ,,,, ,,,,,;,,, ,,, , ,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,;,,,,，,,,, ,,,?,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ，，， ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,(,,,,,, ,(,,,,,,”(,，,,,,, ;,,,,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,, ,鹬,,, ,,,,(,,,,,。,，,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,, ,,, ,, , ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,(，,,,, ,,,,,,血,, ,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,?,,”,(,(,,,,, , ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,，;,,,,,,,、?,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,，,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,?,,,?,,,,,,”(, ,,,,,(,,,;, ,,,;,,, ,, ,,, (,( :整巴兰墨盔兰堡主兰竺兰苎,,, ,,,,,,,,;,,,,,,(,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,;, ,,, ,,, ,,, ,,,,,,,;,,, ,, ,,;, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,,,，,,一,,”, ,,,,,，,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,, , ,,,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,;, ,,,,,,,,(,,,(,,,),, ,,;,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,,(,(,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,;, ,,,,,,,龀,,, ,,,(;,,,,,, ,,,,,),,, ,,,,,, ,,,(?,,,”,,,,,,,。, ,,,,,),, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,(,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,?,,?,,,,, ,,, ;,,,,,, ,,,,,(,,,(,,,)(,, ,,,,,,,,;,,, ,,,,,,、?,, ,,,,, ，，, ,,,,,,,,(,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,,;,, ,,,,,,,, ,,,,,”, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,,，,,, ,,,,,;,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,(，, ;,,,,,,,，, ,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,;,,,, ,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,(,,,;,,,,,, ，(,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,;,,, ;,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,(，, ,,,,,, ,, ;,,,,,, ,;;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,(,(,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,螅螅酰?,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,一,,,。, ,,,(,,”, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,,(,(,,, ,,,,,,,够,, ,,,,,”(,(,,,,矗,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,蜘,;,,,,，,,, ,,,,, ,,,,,, ,, , ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,(，, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,;,,,,(,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,; ;,,,,,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,,;,,,,,,,,,,,,,,, (,( 第四军医大学硕士学位论文 前言 脂肪移植已有上百年历史，由于自体脂肪组织来源丰富，取材方便，操作简单，无免疫性，曾一度甚为流行，但移植后吸收率较高这一弊端，限制了这一技术的临床应用。,,年代以来，许多学者研究发现采用细小颗粒状脂肪进行移植，能明显提高成活率。此后，随着脂肪颗粒注射移植理论的提出和脂肪抽吸术的发展，再次掀起了脂肪移植的热潮。近十年来脂肪颗粒移植技术日趋成熟，已广泛应用于临床，特别是美容整形外科。脂肪移植几乎可用于全身各个部位的软组织缺损填充，如面部畸形，凹陷性瘢痕、皱纹、外伤后缺损、眼睑凹陷、吸脂术后皮肤凹陷，其中比较具有代表性的是隆乳和面部软组织填充。 脂肪移植的最大问题仍是脂肪组织坏死吸收，虽然随着研究的深入及临床技术的改进，其成活率明显提高，但目前移植后其体积最终只能保持,,,左右。脂肪组织成活需要有良好的血供，因此一次注射量有限，临床上常需反复、多次进行，对患者来讲，不但遭受多次抽脂的痛苦，还要承担较高风险性及费用;同时为了保证脂肪细胞活力，脂肪颗粒的收集只能采取传统的注射器吸脂法，这样就大大增加了医生的工作量。因此寻求一种简便、有效的体外贮存方法对临床应用具有重要意义。 近年来国内外对脂肪体外冷冻贮存及再移植进行了一定的研究，并有应用于人体的报道。通过对冷冻脂肪组织学观察发现，其细胞能维持完整的形态，与正常细胞无明显差异。冷冻脂肪复温移植后能维持一定体积，组织学证实移植物内有完整的脂肪细胞。但这些研究对以下几个问题未能做出解答:,、脂肪细胞在冷冻和融化后是否具有活力，还是只起到软组织填充剂的作用,,、脂肪细胞能冷冻贮存多久而不丧失其活力,,、在不同条件下使用何种低温保护剂能更好维持其活力,,、冷冻脂肪与新鲜脂肪移 第四军医大学硕士学位论文植成活后体积有无差别,体外贮存脂肪的目的是把抽出的多余脂肪贮藏起来以各按预定计划重复注射而避免再次抽取，其最终问题仍在于提高成活率，达到良好的临床效果。 由于目前有关脂肪颗粒冻存的文献中均未提及低温抗冻剂，因此本研究中首先根据冻存其它生物组织和细胞时常用的低温保护剂进行设计和初步筛选，将不同温度条件下冻存脂肪组织,,小时后活力最高组的低温保护剂作为相应的低温保护剂并进行进一步实验研究。随后在三种不同条件下:(,,?(普通家用冻箱冷冻格)、,,,?(深低温冰箱)及(,,,?(液氮)，分别冻存脂肪颗粒，于冻存,周、,周及,周时取出脂肪颗粒复温，进行活力测定及移植，观察其活力变化并研究移植成活率，以期能为临床寻求适宜的脂肪颗粒冻存方法，并为临床应用提供相应的理论依据。 第四军医大学硕士学位论文 文献回顾 自,,,,年,,,,,,,,,,,,〔,,首次运用入自体脂肪组织移植以来，脂肪移植已有上百年的历史，由于其来源丰富，取材方便，操作简单，无排斥反应等优点，曾一度甚为流行，但早期脂肪移植多采用大块脂肪组织，移植后吸收率较高，效果不稳定，因此这一技术一度受到冷落。,,年代中期，许多学者„?】发现采用较小的颗粒状脂肪组织注射移植，其成活率明显提高，,,,,年，,, ,,,〔,〕提出了脂肪颗粒注射移植理论。此后，随着脂肪抽吸术的发展，吸脂术肿胀理论〔,,和超湿理论口相继提出，使得吸脂术得到了长足的发展，而随之再次掀起了游离脂肪移植的热潮。 ,(自体脂肪颗粒移植在整形美容外科的应用 脂肪移植几乎可用于全身各个部位的软组织缺损填充，目前广泛应用于整形美容外科领域，如面部畸形，痤疮凹陷，鼻唇沟过深，皱纹，外伤后缺损，眼睑凹陷，吸脂术后皮肤凹陷，比较具有代表性的是隆乳和面部软组织填充。对于一些目前尚无有效治疗方法的疾病或畸形，如半侧颜面萎缩，微小凹陷性瘢痕，(手背软组织萎缩，自体脂肪颗粒移植不失为一种较好的软组织填充方法,】。 ,,,,,,,,,,,,,,〔,,报道了过去,,年间,,,,例自体脂肪移植在面部美容与修复重建中的应用。其中美容性病历,,,例，包括去皱术,,,例，痤疮性瘢痕,,,例以及其它面部凹陷性修复;重建性手术,,,,例，包括创伤后的凹陷,,,例，手术后凹陷,,,例，其它为某些先天性面部畸形及唇、腭裂、面瘫等病变。 王阳等〔,,回顾该院,,,,,,,,,,年十年阃,,,例自体脂肪颗粒注射移植，其中矫正,，,孚,畸形,,,人次，占总人次的,,(,,;填充面部凹陷,,,人次，占,,(,,,;其它,,人次，占,,(,,,。 。 (,( 第四军医大学硕士学位论文 此外，这一技术还涉及到脑科整形，胸科修复重建及骨科预防粘连等 众多领域。 ,(脂肪移植的成活率研究 脂肪移植的最大问题是由于缺血致部分脂肪坏死吸收，被结缔组织取代。,,,,,,,【,,】等在新西兰白兔的模型实验中观察抽吸的颗粒脂肪在移植后,个月体积为原来的,,(,,,,,,(,,，镜下观察显示有明显纤维化。,,,,,～“】等利用新西兰兔观察脂肪小叶保存完好及脂肪小叶破坏的游离脂肪分别移植到血运不同的受区后脂肪吸收情况，结果受区血运丰富或脂肪小叶未被破坏的脂肪存活率明显较高。,,,,,,,〔他】等对脂肪块和脂肪颗粒移植比较发现，术后,,个月两种移植物存活都较少，后者略好于前者。复习即往文献发现，所报道的动物实验中，多为鼠、兔为动物模型，此类动物皮下组织疏松，缺乏皮下脂肪，实验中多由腹腔、腹股沟处切取脂肪块，剪为脂肪小珠后再注射至皮下，而皮下多为肌膜层，环境变化大，血运差，因而结果存活率普遍较低。近期以来多用小型猪做动物实验模型，并应用注射器抽吸脂肪经纯化后再注射至皮下，是真正的脂肪抽吸及脂肪颗粒注射移植，其存活率明显提高。戚可名【,,观察在猪的脂肪移植后,,,个月，其存活率达,,,。 临床报道也各不相同，目前多数学者认为其吸收率为,,,。;蝎;,蚯,,,,等临床观察，脂肪注射移植后,肚,,个月吸收率为,,(,,,,。,,,,,,,,,,】等在,,,例临床报告中将游离的脂肪注入下肢肌肉内，,年后成活率约,,,，高成活率的原因可能是肌肉组织受区的血运丰富。鲍卫汉四等认为术后,,周时移植物的体积与重量仅为注射时的,,(,,。汪良明【, ,】等利用自体减肥抽吸的活性脂肪细胞经纯化后行隆乳术，,,,例远期随访发现脂肪吸收率约为,,,，认为轻创伤脂肪颗粒并采用多层次分散均匀注射是减少吸收的有效措施。 ,(植入脂肪的存活理论 第四军医大学硕士学位论文 随着研究的发展，有关脂肪移植后细胞的转归形成了两种理论:宿主替代论与部分细胞成活论。,,,,年，,,,,,,,,,,于块状游离脂肪移植后组织学观察到大量脂肪细胞液化、坏死，受区周围的组织细胞漫润至移植物内部，摄取破裂脂肪细胞所释放的脂滴，认为移植体内原有脂肪细胞均不能生存，宿主细胞吞响噬降解的脂肪细胞所释放的 脂质，成为新的脂肪细胞。即宿主细胞取代论。随着组织培养技术的发展和脂肪细胞体外培养成功，人们发现脂肪细胞能耐受一定程度创伤、缺氧、缺血而存活，在体外观察到脂肪细胞与脂肪前体细胞相互转化的证据【,引，并在动物体内得到证实,,,〕。,,,,,,,〕认为，组织细胞仅起到清除脂质作用，并不能取代移植体的脂肪细胞，当宿主反应结束后，接近有血运植入床部分的移植细胞能成活，脂肪细胞所受创伤越小，成活的比例越大，此即部分细胞成活论。 ，,,,,,〔,,认为，经抽吸获取的脂肪已不再是一块完整的脂肪组织，而是一团彼此分离的脂肪细胞，有相当一部分细胞保持完整，这些细胞在体内能在血运建立前通过周围组织液、血浆的渗透作用保持活力，因而可以成活。国内祁佐良口,,,,认为，移植后部分脂肪细胞因缺血、缺氧而退化为前脂肪细胞，当供血、供氧充分时，前脂肪细胞会进一步分化为成熟脂肪细胞，并且观察到移植,个月以后，前脂肪细胞中有空泡样脂滴形成，逐渐分化为成熟的脂肪细胞，,个月以后，移植物的结构与正常的脂肪组织基本相同。这是脂肪颗粒注射移植后脂肪成活的现代理论。但该文中未对细胞进行标记，并未能说明前脂肪细胞的来源。 因此，目前认为脂肪细胞移植后确实可以成活，但移植物中成活的脂肪细胞来源是一个争论的焦点，究竟是周围组织中具有分化潜能的干细胞在某些园子的作用下转化为脂肪细胞，还是移植脂肪细胞退化为前脂肪细胞后再次分化，尚无定论。 ,(取脂及纯化脂肪颗粒的方法 取脂方法主要有以下三种:(,)切开取脂法【,,】:多选于腹部，切开皮 (,,( 第四军医大学硕士学位论文 肤，按所需量切取皮下脂肪组织，用剪刀剪为颗粒状碎块，供区皮肤原位 缝合。此法需附加切口，术后遗留瘢痕，取脂部位及取脂量有限，因此用 于腹壁区已有瘢痕或行腹壁整形术时的取脂。(,)负压吸脂法【,,】:用一直 径,,,,;,吸引头一头接无菌负压吸引瓶，瓶再与负压吸引器相连，另一头 接吸脂针，经皮肤小切口将脂肪吸入瓶中。目前已发展为超声吸脂及共振吸脂，该法取脂量大，操作灵活，但因负压较大，机械损伤重，吸出的脂肪细胞大部分变形、破裂，移植后易发生坏死、吸收。(,)注射器吸脂法?,:于皮下注入大量含利多卡因、肾上腺素及碳酸氢钠的生理盐液后，用,,,,,号针头接,,,,,,,,注射器，直接将脂肪抽吸到注射器内。此法取脂量少，速度慢，但对脂肪细胞损伤小，操作灵活，适用于小部位抽脂及少量取脂。 抽吸物中除脂肪外，尚含有血液、麻醉液、脂滴及纤维组织，因此在移植前应尽量去除上术杂质，以免造成脂肪细胞坏死吸收和增加感染机会。纯化脂肪的方法有:(,)冲洗法〔,,,:以数层无菌纱布作为滤布，用生理盐液反复冲洗。(,)分层纯化法,,,】:将抽吸的脂肪混合物于注射器中静置片刻，可见分为上、中、下,层，上层为桔黄色脂滴，下层为粉红色血水混合物，分别去除上下两层即可获得纯净脂肪。(,)捞取法【,,】:将抽取物放入无菌碗中，加入少量生理盐液，将飘浮的脂肪颗粒捞起。冲洗法适用于大量脂肪颗粒的纯化，分层法适用于少量脂肪或用注射器抽吸法获得的脂肪颗粒纯化。 ,(脂肪组织体外贮存的必要性 尽管随着研究的深入及临床技术的改进，脂肪移植成活率明显提高，但目前其最大问题仍在于脂肪组织的坏死吸收，这就需要在移植时做到以下两点:,、少量、反复、多次注射,、最大可能保持细胞活力。 王阳、戚可明等【,,对近百例隆乳患者，采用每次每侧乳房注射量不超过,,,,,，间隔不少于,个月的规程。对轻度平胸的患者经过,《次注射可达 第四军医大学硕士学位论文到正常女性乳房的丰满程度。马丽梅、刘毅, ,,,等总结隆乳病例，对每侧乳房每次移植,,,？,,,,，重复注射间隔,周，视乳房大小注射,,,次可取得满意效果。 ,,,,,,〔,,,研究证实:用手术切取和,,,,注射器抽吸的脂肪组织，,,,的细胞保持完整，用,,,(,,,,抽到的脂肪组织约,,,的细胞变形破裂。,,,;,,,,,,,,,对比,,(,,,,和,,(,,,,负压抽吸的脂肪组织，指出用极限负压抽吸，会引起脂肪细胞的扩张，部分破裂和液化。国内张新合【,,,对吸脂压力、方法对脂肪细胞损伤程度研究后认为，切取法对脂肪细胞损伤最小，注射器吸脂法次之，负压吸脂法损伤最重，但采用传统的,,,,,,,,,注射器吸脂法适宜于临床移植需要。 对于患者来讲，这不但需遭受多次抽脂的痛苦，还需承担较高的风险及费用;对于医生来讲，这无异于是一种“体力劳动”，大大增加了工作置。因此，寻求一种适宜的脂肪组织体外贮存方法，做到“一次吸脂，多次使用”，可以避免重复取材，降低费用，减少劳动量，对临床应用具有重要意义。 ,(脂肪组织的贮存条件及防冻保护剂的选择 脂肪组织多在以下几种条件下冷冻贮存,,,:,(普通冰箱冷冻室((,,,,,?)，普通家用冰箱市场上即可购得，保存方法简便，所需费用较低，在任何医疗单位均可开展，但仅能在较短时间内维持组织一定活力。,(深低温冰箱(,,,,,，,,,”,,)，所需设备价格较高，受电源影响大，但维持费用不高，可以在相对较长时间内保持较高组织活力。,。液氮贮存(,,,,”(,)在?,,,”,环境下，组织和细胞内各种酶的活力及代谢近乎于零，即所谓“生命悬滞状态”，因此，在此温度下组织和细胞理论上可以无限期储存。其所需设备相对于深低温冰箱便宜，不受供电影响，但因液氮挥发，需及时补充，维持费用昂贵，所需技术较为复杂，难以广泛开展。但随着“玻璃化储存理论”及近年来“一步法”、“二步平衡法”冷冻概念【,”,】的提出，人们发现 第四军医大学硕士学位论文 在提高防冻保护剂浓度和加快降温速率的条件下，冷冻时冰晶对组织和细胞损伤明显减小，因而可以维持更高的活力，无需象即往一样对降温速率进行精确调控，这就大大简化了液氮贮存技术。 ,,,,年英国女生物学家,,,,,,,,偶然将甘油滴入鸡精子，发现此鸡精子冷冻后仍具有较高的活力，此后低温保护剂被进行深入研究，其在生物组织和细胞冻存中的起到的保护作用得到认可。抗冻荆一般可分为穿透性和非穿透性两大类【,,】。穿透性抗冻能在较短时间内透过毛细血管膜，到达组织及细胞间隙，再透过细胞膜到达细胞内各细胞器中发挥抗冻效果，因而其低温保护作用明显优于非穿透性抗冻剂。目前最常用的是二甲基亚砜,,,,,)和甘油，,,,,穿透作用较快，有报道,,】用液氮储存时，在以主要成分为,,,,,,,的抗冻剂中，皮肤浸泡，,,,,后就可进行降温处理，而在,,,甘油中则需浸泡,,。由于脂肪组织在体外易于失去活力，故应选择以,,,,为主的抗冻剂。此外，抗冻剂对生物组织和细胞均有一定的毒性作用，不同物种、不同组织和细胞对抗冻剂的反应不完全相同，在储存前需对抗冻剂的种类、组合、浓度加以筛选，才能取得最好效果。在冷冻复温后，应及时用生理盐水洗去抗冻剂，以减少毒性作用。 目前文献中脂肪组织的贮存只是将脂肪与盐水混合物直接冷冻，关于脂肪组织在不同条件下采用何种防冻保护荆所贮存的时间及贮存后的细胞活力未见报道。 ,(脂肪组织体外贮存的研究进展 ,,,,,,,,【,,,在,,,,年介绍了冷冻法保存月旨肪组织的可能性，认为冷冻脂肪移植后与新鲜脂肪移植取得的结果并无差异，但在文中并未提及相关实验研究及 临床病例。,,,,,,,〔,,,在,,,,年根据其，,缶床经验提出，脂肪冷冻贮存两年再用于注射是安全的，文中也未提及临床病例及注射冷冻脂肪所取得结果。,,;,,,,,,,,在,,,,年介绍了冷冻脂肪做为脂肪移植的附加材料应用,年经验，认为脂肪细胞确能在,,个月甚至更长时间的冷冻状态下 .