HPLC法测定杀菌止痒洗剂中苦参碱的含量

HPLC法测定杀菌止痒洗剂中苦参碱的含量 HPLC法测定杀菌止痒洗剂中苦参碱的含 量 中国药事2005年第19卷第10期?615? HPLC法测定杀菌止痒洗剂中苦参碱的含量 余家奇,蹇红军,杨忠兰,张永萍(贵州省遵义医院药剂科,563000;贵阳中医学院药 学系) 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1002—7777(2005)10--0615—02 杀菌止痒洗剂是根据祖国医学理论和长期临床 实践,经反复验证出的具有清热解毒,杀菌止 痒功效的有效药物,由苦参,黄柏,蛇床子,土茯 苓,苍术,冰片组成.因苦参在方中属君药,其含 量多少直接影响到本品的临床疗效,故对杀菌止痒 洗剂中有效成分苦参碱的含量进行测定,以期达到 对该药质量控制之目的. 1仪器与试药 高效液相色谱仪:LC一10ATvp泵(日本岛 津),SPD一10Avp紫外检测器(日本岛津),CTO 一 10Asvp柱温箱(日本岛津). 试剂试药:乙腈(色谱纯,天津市大茂化学试 剂厂);水(重蒸馏,临用前制备);磷酸,三乙胺 (分析纯,天津市大茂化学试剂厂);苦参碱对照品 (中国药品生物制品检定所,批号:110805— 200306);杀菌止痒洗剂样品三批(批号: 20040105,20040201,20040208,每瓶120ml,贵 州长生药业有限责任公司). 2试验方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:DiamonsilC18(5m,250×4.6i.d.mm,迪 马);流动相:甲醇一水一三乙胺(3:97:0.2),用磷 酸调pH至3.5;流速:lml?rain一;柱温:40?;检 测波长:208nm.进样量:lOrd. 2.2供试品溶液与对照品溶液的制备 2.2.1供试品溶液的制备 精密量取本品5ml,加水稀释至25ml,加入2ml 氨水后,用氯仿提取2次,每次25ml,氯仿液水浴挥 干后加流动相溶解并定容至25ml,微孑L滤膜过滤, 滤液作为供试品溶液. 2.2.2对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的苦参碱对 照品14.76mg,置25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇 匀,精密吸取2ml,置lOml量瓶中,加甲醇稀释至刻 度,摇匀,制成每lml含苦参碱0.1181mg的对照品 溶液. 2.3空白试验 精密量取按处方量除去苦参的阴性样品溶液 5ml,同法制成阴性供试品溶液,依法测定,结果证 明阴性无干扰,见图. 1一uL_J 图杀菌止痒洗剂HPLC色谱图 a.对照品;b.供试品;c.阴性对照;1.苦参碱 2.4线性关系考察 分别精密吸取上述苦参碱对照品溶液2.5,5, 10,15,20l,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件 .———,.. 测定峰面积,以对照品进样量(tLg)为横坐标,峰面 积值(my.s)为纵坐标,绘制标准曲线.结果表明, 苦参碱在0.2953,2.3620~g范围内线性关系良 ?616?中国药事2005年第19卷第10期 好.回归方程:Y一695455X一751.783,r一0.9999. 2.5精密度试验 精密取对照品溶液IO/A(浓度为0.1181mg? ml),重复进样5次,测定苦参碱峰面积,求出相 对标准偏差,结果表明精密度良好,RSD一0.61. 2.6重复性试验 精密取本品(批号:20040201)共5份,照前述供 试品溶液的制备方法制备成供试品溶液.精密吸取 供试品溶液各10l,测定,苦参碱平均含量为0.441 mg?ml_.,其RSD一1.1. 2.7稳定性试验 取供试品(批号;20040201),按质量标准草案中 供试品溶液的制备方法制备供试液.在室温下每隔 10min进样10l,测定,苦参碱平均峰面积值 875580mv.S,其RSD一0.39,结果表明,苦参碱在 12小时内基本稳定. 2.8回收率试验 采用加样回收法试验,取已知含量的同一批样 品(批号:20040201,苦参碱含量为0.638mg? ml-1)5份,精密吸取各2.5ml,分别加入苦参碱对 照品溶液(0.5904mg?ml-1)2.5ml,按供试品溶液 制备方法制备成供试品溶液,精密吸取供试品溶液 各10l,照上述色谱条件测定,记录色谱图,计算含 量,结果表明,苦参碱的回收率良好,结果见表1. 表1加样回收试验结果 2.9样品测定 分别取3批样品,每批测定2次,结果见表2. 3讨论 3.1检测波长的选择 在190nm~400nm波长范围内扫描,结果苦 表23批样品中苦参碱的含测结果 参碱对照品溶液在208nm处有最大吸收,经验证, 供试品在此条件下测定效果良好,故选定208nm 为苦参碱的检测波长. 3.2流动相的选择 以甲醇一水一三乙胺(48:52:0.05)为流动 相,结果对照品在25min内未出吸收峰;以乙腈一 水一三乙胺(4:96:0.2,用磷酸调pH至3.5) 为流动相,结果对照品峰分离良好,但供试品峰分 离不理想;以乙腈一水一三乙胺(3:97:0.2,用 磷酸调pH至3.5)为流动相,结果对照品,供试 品峰分离都较理想,故以此条件作为正文方法所用 流动相. 3.3供试品溶液的制备 取本品2ml,加水稀释至10ml,微孔滤膜过 滤,滤液作为供试品溶液.结果供试品色谱杂质峰 干扰大,苦参碱峰分离不理想].取本品5ml,加 水稀释至25ml,加入2ml氨水后,用乙醚提取2 次,每次25ml,乙醚液水浴挥干后加流动相溶解 并定容至25ml,微孔滤膜过滤,滤液作为供试品 溶液.结果苦参碱峰分离不够理想].取本品 5ml,加水稀释至25ml,加入2ml氨水后,用氯仿 提取4次,每次25ml,氯仿液水浴挥干后加流动 相溶解并定容至25ml,微孔滤膜过滤,滤液作为 供试品溶液.结果苦参碱峰和其他峰分离理想]. 参考文献: [1]毛大鸣,林佳任.泻停胶囊中苦参碱的含量测定EJ].贵 阳中医学院报,2002,24(4):58 E2]刘杰,张莉,等.反相高效液相色谱法测定注射用苫参 碱的含量EJ].中国药业,2003,42(3):48 E3]李秀芬,等.反相高效液相色谱法测定前列舒胶囊中苦参碱 的含量EJ].中山大学学报.2003.12(11):45