血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF的影响

血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF的影响 摘要:目的 观察血栓心脉宁片对急性血瘀大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)及血管性血友病因子(vWF)的影响。 采用两次注射肾上腺素加冰水浴的方法建立急性血瘀大鼠模型，观察血栓心脉宁片对大鼠血浆GMP-140及vWF的影响。结果 血栓心脉宁片高、中、低剂量组均可显著降低急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF含量，以中剂量组效果最为明显，与脑心通胶囊具有相似的作用。结论 血栓心脉宁片具有降低急性血瘀大鼠血浆GMP-140及vWF含量的作用。 关键词:血栓心脉宁片;急性血瘀大鼠;α颗粒膜蛋白;血管性血友病因子 中图分类号:R54 R289.5 文献标识码:A 文章编号:1672-1349(2012)01-0076-02 血栓心脉宁片是纯中药制剂，主要由川芎、丹参、水蛭、毛冬青、牛黄、麝香、槐花、人参茎叶皂苷、冰片、蟾酥等组成。具有活血化瘀，扩张血管，抑制血小板、红细胞聚集，降低血黏度，降低血脂，改善局部和全身血液循环及防治血栓的功效,1,,临床主治脑血栓、冠心病、心绞痛等血瘀证者,2,。本实验观察血栓心脉宁片对大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)及血管性血友病因子(vWF)的影响，探讨血栓心脉宁片的作用机制，为其临床应用和推广提供更坚实的理论基础。 1 材料与方法 1.1 动物 Wistar大鼠60只，雌、雄各半，体重200 g,220 g，由吉林大学基础医学院试验动物中心提供，质量合格证号:SCXK-(吉)2009-0001。 1.2 药品 血栓心脉宁片，吉林华康药业股份有限公司提供，国药准字 Z20030145,产品批号:110601;脑心通胶囊，陕西步长制药有限公司，国药准字Z2025001，产品批号:110764。 1.3 主要试剂和仪器 盐酸肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司出品，批号:110302;GMP-140 ELISA检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A;大鼠vWF ELISA检测试剂盒，购自北京鼎国生物技术有限责任公司的R&D Systems 分装试剂盒，批号:20110701A ;TDL80-2B飞鸽牌离心机，哈尔滨东联电子技术开发有限公司;瑞士帝肯TECAN SUNRISE 酶标仪，早稻田(北京)生物科技发展有限公司。 1.4 动物分组 取血栓心脉宁片，配成浓度为3.5%、7.0%、14.0%高、中、低3个剂量的供试药液;脑心通胶囊，配成浓度为8.0%的阳性对照药液;肾上腺素，配成浓度为0.1%的溶液;水合氯醛，配成浓度为10%的溶液。 自试验动物中心引入Wistar大鼠后，适应性饲养一周，室温22 ?~25 ?，湿度40%~60%。将大鼠按体重随机分为6组，每组10只，雌、雄各组均分，分组为正常对照组、血瘀模型组及血栓心脉宁片高剂量组1.40 g/kg、中剂量组0.70 g/kg、低剂量组0.35 g/kg，脑心通胶囊阳性对照组0.80 g/kg。 试验过程中正常对照组正常饲养，血瘀模型组给水10mL/kg，各给药组均给予10 mL/kg供试药液。每日09:00时灌胃给药，连续给药7 d。 1.5 血瘀模型的制备 第6天灌胃给药后30 min，除正常对照组外，其余各组动物均皮下注射0.1%肾上腺素0.8 mL/kg，2 h后于冰水中浸泡5 min，再过2 h后给予同剂量的肾上腺素以复制急性血瘀模型,3,。 1.6 血浆GMP-140、vWF含量的测定 大鼠复制急性血瘀模型后，禁食不禁水12 h，第7天末次给药30 min后，腹腔注射10%水合氯醛3 mL/kg 麻醉，腹主动脉取血,4,，置于肝素 抗凝管中。3 000 r/min离心30 min，吸取上层血浆按照GMP-140、vWF ELISA检测试剂盒说明书进行操作，测定大鼠血浆含量。 1.7 统计学处理 应用GraphPad Prism 5.0统计软件处理，实验数据以均数?标准差(x?s)表示，两组间比较采用t检验。 2 结 果 2.1 对血浆GMP-140含量的影响 急性血瘀模型组与正常对照组比较，其血浆GMP-140含量明显增加(P<0.05)，提示大鼠急性血瘀模型造模成功。与急性血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠GMP-140含量降低(P<0.05)。详见表1。 2.2 对血浆vWF含量的影响(见表1) 3 讨 论 中医辨证为血瘀证者其临床表现主要为疼痛、肿块、瘀斑、气虚等症候。祖国医学认为，血瘀证是由于血液瘀滞、运行不畅而产生的病理症候,5，6,。本实验给大鼠皮下注射大剂量肾上腺素模拟暴怒时的机体状态, 以冰水浸泡法模拟外寒侵袭,在两种因素综合作用下复制大鼠急性血瘀证模型, 此模型使外周血管强烈收缩,心脏后负荷增加,心肌耗氧量增加,心功能逐渐下降,使血液运行障碍,7,,因此，该模型常用于中医血瘀证及活血化瘀药的研究,8，9,。王宏等,10,通过此模型证实血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血液黏度、血小板聚集及血液流变学的异常变化有明显改善作用。何小溪等,11,证实，人参Rb组皂苷对急性血瘀模型大鼠血液黏度、血小板聚集及血液流变学的异常变化有明显改善作用。肾上腺素加冰水以复制急性血瘀动物模型的方法可行。 GMP-140 是血小板α颗粒膜蛋白，是一种分子量为14 000 的黏附蛋白,富含有半胱氨酸,高度糖化的整合蛋白质。GMP-140位于静止血小板颗粒膜上,当血小板受刺激活化时随α颗粒内容物的释放而与质膜融合,能持久存在于活化血小板质膜表面,具有介导活化血小板或内皮细胞与多种不同类型白细胞相互黏附的功能,12,。GMP-140只有在活化的血小板表面表达,并可释放至血浆中,13,,可促进单核细胞的识别,参与炎症与血栓形成，是目前最具特异性血小板活化的分子标志物,14,,血浆中GMP-140含量变化能反映体内循环系统血小板活化程度。本实验测得正常对照组与血瘀模型组血浆GMP-140含量具有统计学意义，说明实验动物造模成功。与血瘀模型组比较，血栓心脉宁片低、中、高剂量组均可使急性血瘀模型大鼠血浆GMP-140含量明显减低，其中以中剂量组效果最为明显，与阳性对照组具有相似的效果。血栓心脉宁片对急性血瘀有良好的防治作用。因中药的药物浓度与药物疗效不一定呈线性关系，当超过一定量的最佳药物浓度后，再增加药物浓度时，药物疗效未必随之增加。所以，中剂量组为本实验的最佳剂量组。 vWF是由血管内皮细胞和巨核细胞合成的一种糖蛋白,vWF为一种高分子蛋白质,在血中含量为(5,10) nmol/L。在内皮细胞受到刺激时释放至血浆,vWF可与胶原等结合而发生构形改变,导致血小板黏附。血浆vWF 升高可作为内皮细胞受损的标志。它可参与凝血促进血小板黏附和聚集,诱发血栓形成。vWF是反映血管内皮受损的一个指标，对判断血栓形成的危险及病情轻重有重要的参考价值,15,。本实验测得正常对照组与血瘀模型组大鼠血浆vWF含量具有显著差异，实验动物造模成功。血栓心脉宁片低、中、高剂量组均可使急性血瘀模型大鼠血浆vWF含量明显降低，其中中、高剂量组减低最为显著，效果与阳性对照组相似，血栓心脉宁片对急性血瘀有良好的防治作用。 参考文献: ,1, 杨青兰,谷艳,周萍萍，等.血栓心脉宁片治疗缺血性脑卒中的疗效观察,J,.临床医药实践，2010,5(19):598-599. ,2, 刘建伟,曲绍春,于晓风，等.血栓心脉宁片对大鼠实验性脑缺血的保护作用,J,. 中西医结合心脑血管病杂志,2011,9(3):333-334. ,3, Dan B,Andrew G.Chinese herbal medicine materia medica,M,.Revised edition,Washington:Eastland Press,1993:265-266. ,4, 车兆义,邹悦,宋清斌.大鼠实验中几种常用的采血方法探讨,J,.局解手术学杂志,200 8,17(2):84-85. ,5, 姜春华.活血化瘀新编,M,.上海:上海医科大学出版社,1990:2-54. ,6, 田牛,修瑞娟,邹荫方，等.微循环障碍相关疾病,M,.郑州:河南出版社,1985:94-105. ,7, 王学江,丰平.寒凝血瘀活动动物模型的实验研究,J,.北京中医，2000,19(5):52-53. ,8, 毛腾敏,林建和.“血瘀”病理模型探索(一),J,.北京医科大学学 报,1985,17(4):246- 248. ,9, 毛腾敏.以活血化瘀药的预防性治疗检测大白鼠急性“血瘀”模型,J,.北京医科大学学报,1987,19(4):234-236. ,10, 王宏,曲绍春,于晓风，等.血栓心脉宁片对急性血瘀模型大鼠血小板功能及血液流变学的影响,J,.中国老年学杂志，2010,11(30):3335-3336. ,11, 何小溪,徐华丽,于晓风，等.人参Rb组皂苷对急性血瘀模型大鼠血小板聚集及血液流变学的影响,J,.中国药理学通报，2007,23(9):1259-1260. ,12,Stenberg PE,McEver RP,Shuman MA，et al.A platelet alphagranule membrane protein (GMP-140) is expressed on the plasma membrane after activation,J,.J Cell Biol,1985,101(3):880. ,13, 鲍延熙,郑义,陆惠华,等.冠心病中医辨证分型与冠状动脉及左室造影所见的联系,J,.中西医结合杂志,1999,9(2):74. ,14, Larsen E,Celi A,Gilbert GE，et al.PADGENM protein:A receptor that mediates the interaction of activated platelets with neutrophils and monocytes ,J,.Cell,1989,59(2):305. ,15, Lip GY,Blann A.von Willebrand factor:A marker of endothelial dysfunction in vascular disorders ,J,.Cardiovasc Res,1997,34(2):255. 作者简介:崔黎明(1957―)，男，毕业于白求恩医科大学，副主任医师，硕士研究生，现工作于吉林大学白求恩医学院(邮编:130021);张晓天、胡亚、王槐栋，现就读于吉林大学白求恩医学院;王放(通讯作者)，工作于吉林大学白求恩医学院(邮编:130021)。 (收稿日期:2011-11-22) (本文编辑王雅洁)