细菌基因组DNA的制备

细菌基因组DNA的制备 莃菌基因莃DNA的制莃 莃莃分,0 - 解莃莃,决2008-11-12 19:22 9. 加1/10 莃体3mol/L NaAc, 及2倍莃无水乙醇莃倒混合淀体沉DNA。室下止温静10-20分莃～DNA淀形成白色絮物。 沉状 10. 用棒莃出玻DNA淀沉,70%乙醇中漂洗后,在吸水莃上吸干,溶解于1ml TE中,-20?保存。 11. 如果DNA溶液中有不溶解莃粒,可在5000rpm短莃心离,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl), 37?保温30分莃, 用抽提后酚, 按步莃9-10重淀沉DNA。 第四莃 莃菌基因莃DNA的制莃 一、材料 莃菌培莃物。 二、莃莃 移液管, 高速冷莃心机离, 台式心机～水浴莃。 离 三、莃莃 1、CTAB/NaCl溶液,4.1g NaCl溶解于80ml H2 O,莃慢加入10g CTAB,加水至100ml。 2、其莃莃,莃它仿:戊醇异(24:1)～酚:莃仿:戊醇异(25:24:1)～丙醇～异70% 乙醇～TE～10% SDS～蛋白莃 K (20mg/ml或粉莃)～5mol/L NaCl。 四、操作步莃, 1. 100ml 莃菌莃夜培莃液, 5000rpm心离10分莃, 去上液。 清 2. 加9.5ml TE莃浮淀沉, 加并0.5ml 10% SDS, 50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白莃 K, 混 匀, 37?保温1小莃。 3. 加1.5ml 5mol/L NaCl, 混。 匀 4. 加1.5ml CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65?保温20分莃。 5. 用等莃莃体酚:莃仿:戊醇异(25:24:1)抽提, 5000rpm心离10分莃, 上液移至干莃心管。 将清离 6. 用等莃莃莃体仿:戊醇异(24:1)抽提, 取上液移至干莃管中。 清 7. 加1倍莃莃丙醇体异, 莃倒混合, 室下止温静10分莃～淀沉DNA。 8. 用棒莃出玻DNA淀沉, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20?保存。如DNA淀沉无法莃出,可5000rpm心离, 使DNA淀。 沉 9. 如要除去其中的RNA, 可以按本章第三莃中操作步莃莃理。 第五莃 基因莃DNA的莃莃 上述方法得到的DNA一般可以用作Southern, RFLP、PCR等分析。由于所用材料的不同, 得到的DNA莃量及莃量均不同,有莃DNA中含有莃和多糖莃物莃酚,影莃切和会响PCR的效果。所以莃得基因莃DNA后,均需莃莃DNA的莃量和莃量。 1. DNA溶液稀莃20-30倍后,莃定OD260 /OD280 比莃, 明确DNA的含量和莃量。 2. 取2-5μl 在0.7% agarose上莃泳胶, 莃莃DNA的分子大小。 3. 取2μg DNA, 用10莃位(U)Hind?莃切莃夜, 0.7% agarose上莃泳胶, 莃莃能否完全莃解(做RFLP, DNA必莃完全莃解)。 如果DNA中所含莃莃多, 不能完全莃切, 或小分子DNA多, 影接莃的分析和操作响,可以用下列方法莃理, ;1,莃用幼嫩植物莃莃～可少淀粉莃的含量。 减 ;2, 酚:莃抽提仿, 去除蛋白莃和多糖。 ;3,Sepharose柱莃莃, 去除莃、多糖和小分子酚DNA。 ;4,CsCl梯度心离, 去除莃莃, 分大片段离DNA(可用作文莃建构)。 提莃者, huangza806 - 四莃最佳答案莃莃 CTAB;十六莃基三甲基莃化莃,,是一莃子去莃莃阳离～具有低子强度的溶液中淀核酸和酸性多聚糖的特性～在莃莃件下～蛋白莃和中性多聚从离沉条 糖仍留在溶液里～在高子强度的溶液里～离CTAB蛋白莃和大多酸性多聚糖以外的多聚与数 糖形成莃合物～只是不能淀核酸。因此～沉CTAB可以用于大量莃生粘多糖的有机如植物从体 以及某些革莃氏莃性菌;包括E.coli的某些株,中制莃莃化DNA 。 参考莃料,