RP-HPLC法测定补肾壮阳中药制剂中违法添加的枸橼酸西地那非

RP-HPLC法测定补肾壮阳中药制剂中违法添加的枸橼酸西地那非 RP-HPLC法测定补肾壮阳中药制剂中违法 添加的枸橼酸西地那非 RP—HPLC法测定补肾壮阳中药制剂中违法添加的枸橼酸西地那非? 廖广仁,k9梁丽梅,李英,魏德顺(广东省人民医院,广州市510080) 中图分类号R283;R927.2文献标识码A文章编号1001—0408(2008)15—1155—02 摘要目的:建立以反相高效液相色谱,a-m4定补肾壮阳中药制剂中违法添加枸橼酸西地那非的.方法:色谱柱为ODSCs (250mm×4.6mm,5m),流动相为甲醇一水一冰醋酸一三乙胺(60:40:0.8:0.3),流速为0.8mL‟min,检测波长为290 nm,进样量为10L.结果:枸橼酸西地那非检测浓度在10--i00g?mLI1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系;平均加样回 收率为100.52%,RSD=1.20%.结论:本方法可用于检测补肾壮阳类中药制剂中违法添加的枸橼酸西地那非. 关键词补肾壮阳中药制剂;枸橼酸西地那非;反相高效液相色谱法 DeterminationofSildenafilCitrateIllegallyAddedinKidney—.yangReinforcingChineseMedicinalT onics byRP—.HPLC LIAOGuang—ren,LIANGLi—mei,LIYing,WEIDe—shun(GuangdongProvincialPeople‟sHospit al,Guangz— hou510080,China) ABSTRACTOEECTIVE:TodeterminethecontentofSildenafilcitrateillegallyaddedjnkidney—yangreinforcingChinese medicinaltonics.METHODS:ThesampleswereseparatedonODSCl8(250mm×4.6mm,5m)withmo bilephaseconsisted ofmethanol—water—aceticacidglacial—triethylamine(60:40:0.8:0.3)ataflowrateof0.8nlL?rain-1 .TheUVdetective wavelengthwas290nmandthesamplesizewas10L.RESULTS:Ataconcentrationrangeof10--100g?m L-1,Sildenafil citrateshowedagoodlinearrelationwithpeakareascore.Themeanrecoveryratewas100.52%(RSD:1.2 0%).CONCLU— SION:ThemethodcanbeusedtodetermineSildenafilCitrateillegallyaddedinkidney—yangtonics. KEYWoRDSKidney—yangreinforcingC:hinesemedicinaltonics;Sildenafilcitrate:RP—HPLC 枸橼酸西地那非,俗称”伟哥”,其化学名为1一{4一乙氧 基一3一[5一(6,7一二氢一1一甲基一7一氧代一3一丙基一 1H一吡唑并【4,3d】嘧啶)】苯磺酰}一4一甲基哌嗪枸橼酸盐, 用于治疗男性勃起功能不良(Erectiledysfunction).疗效确 切,起效快,因而自上市以来就广泛应用于临床.补肾壮阳中药 制剂主要是根据中医理论,通过调节肾的阴阳平衡来达到治疗 阳痿的目的,通常起效缓慢,这就给掺伪者创造了机会.一些不 良商贩在保健品和补肾壮阳中药制剂中违法添加枸橼酸西地 那非,导致出现严重的不良事件.对于补肾壮阳中药制剂中违法 添加枸橼酸西地那非的测定,现有的方法有薄层色谱(TLC)法, 高效液相色谱一质谱(HPLc—MS)法,HPLC法”】.其中,TLC 法因其色谱分辨率低,专属性差,易漏检等缺点而较少使用; HPLC—MS法可大大提高检测结果的可靠性,但仪器价格高 昂,难以推广使用,故最常使用的检测方法是HPLC法.本文 在原有试验的基础上扩大样品范围,进一步改进了样品前处 理方法和色谱分离条件,取得了较好的分离与检测效果,可作 为补肾壮阳类中药制剂中违法添加枸橼酸西地那非的测定方 法. 1材料 1.1仪器 高效液相色谱仪,包括uv—Vis检测器,SPD一10Av紫 外检测器,LC一10Avr泵(日本岛津公司);SK5200H型超声波 ?广东省中医药管理局立项科研课(2040039) 女副主任药师.研究方向:医院药学.电话:020—81884713—80686 #通讯作者:副主任药师.研究方向:医院药学.电话: O20—87186593 中国药房2008年第19卷第15期 仪(上海科导超声仪器公司);TD[一16G型离心机(上海安亭 科学仪器厂);AY120型天平(日本岛津公司);Hw一2000型 色谱工作站(上海千谱软件公司). 1.2试药 枸橼酸西地那非对照品(广‟东省药品检验所核发,标示来 源:广州白云山制药厂,批号:030301);甲醇为色谱纯,冰醋酸, 三乙胺均为纯,水为超纯水;所测药物样品均为市售品(以 序号1,8代替). 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:ODSCl8(250mm×4.6mm,5m);流动相:甲醇一 水一冰醋酸一三乙胺(60:40:0.8:0.3);柱温:室温;流速: 0.8mL?min;检测波长:290nm;进样量:10L.理论塔板 数为5678.色谱见图1. 2.2对照品贮备液的制备 精密称取枸橼酸西地那非对照品0.1g,置于100mL容 量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,即得浓度为1mg?mL 的对照品贮备液. 2.3供试品溶液的制备 精密称取样品0.5g,加入20mL水溶解,超声30min,离 心,过滤,滤渣同法提取2次,合并滤液,用氨水调pH值为9, 用氯仿萃取3次,合并氯仿液,水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并定 容至i00mL.精密量取1mL,用甲醇定容至10mL,即得. 2.4线性关系考察 精密量取对照品贮备液适量,分别用甲醇稀释制成浓度为 0.01,0.02,0.04,0.06,0.08,0.10mg?mL的系列溶液,分 ChinaPharmacy2008Vo1.19No.15?1155 6 :1 ? „l 048121620min A 048121620min048121620min BC 图1高效液相色谱 A.枸橼酸西地那非对照品;B.阴性对照;C.供试品 Fig1HPLC A.referencesubstanceofSildenafilcitrate;B.negativecontrol; C.sample 别进样10”L,测定各浓度对应的峰面积积分值.以对照品的 检测浓度(X)为横坐标,峰面积积分值(y)为纵坐标进行线性 回归,得回归方程为Y:311006X-65252(r:0.9998,= 6).结果明,枸橼酸西地那非检测浓度在10,100/*g.mL 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系. 2.5精密度试验 精密量取浓度为0.04mg?mL.的对照品溶液10L,按 “2.1”项下色谱条件重复进样5次,以峰面积考察精密度.结 果,RSD=1.7%(:5),表明仪器精密度良好. 2.6重现性试验 精密称取同一批样品0.5g,共6份,照”2.3”项下方法制 备供试品溶液,取10”L进样,测定样品中枸橼酸西地那非的 含量.结果,样品平均含量为30.32mg?g,RSD:1.6% (:6),表明方法重现性良好. 2.7稳定性试验 精密量取浓度为0,04mg?mL的对照品溶液,分别于 配置后0,2…468,10h依法测定.结果,RSD:2.05%(= 6),表明对照品溶液在配置后10h内稳定. 2.8加样回收率试验 精密称取已知含量的样品0.1g,共6份,分别置于具塞烧 瓶中,精密加入对照品贮备液1mL,照”2.3”项下方法制备供 试品溶液,取10L进样测定,计算加样回收率,结果见表1. 表1加样回收率试验结果(n=6) Tab1Resultsofrecoverytest(n=6) 2.9样品含量测定 准确称取样品0,5g,照”2.3”项下方法制备供试品溶液, 取10”L进样测定,结果见表2. 表2样品含量测定结果(n=5) Tab2Resultsofcontentdeterminationofsamples(n=5) 由表2结果可见,本试验所测定的样品中,除2个品种没 有添加枸橼酸西地那非外,其余6个品种均添加了枸橼酸西地 那非. 3讨论 3.1样品前处理方法的确定 笔者曾分别以酸,水+甲醇作为中药蜜丸的提取溶剂,结 果平均回收率分别为98.2%,96.1%”I.本文根据西地那非结 构中含有6个N原子呈碱性,具有酸溶碱沉的化学性质,在原 有试验的基础上扩大了样品范围(包括中药蜜丸,片剂,胶囊 剂),经过反复试验,确定了本文所采用的样品前处理方法:用 水作为溶剂对样品进行溶解,提取,提取液用氨水碱化(pH9), 使西地那非游离出来,用氯仿萃取,水浴蒸干,残渣用甲醇溶 解.通过这样的方法进行前处理后,能有效去除共存干扰物和 对色谱柱有害的物质;从回收率结果看(平均回收率为 100.52%),提取率满意.在提取溶剂的选择中,笔者分别用水, 甲醇溶解枸橼酸西地那非对照品,观察溶解情况.结果发现,枸 橼酸西地那非能完全溶解在水和甲醇中,因水价廉且操作方 便,故本试验以水为提取溶剂. 3.2色谱分离条件的选择 笔者经过反复试验,确定以甲醇一水一冰醋酸一三乙胺 (60:40:0.8:0.3)作为流动相.该流动相在配制时不需调节 pH值,操作简便,且不含对色谱系统有影响的非挥发性盐缓冲系 统,色谱分离效果满意,还可避免使用毒性大,成本高的乙腈”. 以不同流动相组成比例考察色谱条件的分离效果,发现当流动 相中甲醇与水的体积比为40:60时,保留时间T?14min, 理论塔板数为5678.因此,为了确保目标成分与其它成分能够 完全分离,流动相中甲醇与水的体积比以60:40为合适. 参考文献 [1】雷灼雨,罗萍,周渝南,补肾壮阳药中枸橼酸西地那非 的含量测定[J】.中国药业,2005,14(3):40. [2】魏晓舒,HPLC测定保健品中西地那非的含量[J】.华西 药学杂志,2004,19(2):144. [3】张启明,尹华,黄海伟,等.检查中药中非法掺入枸橼酸 西地那非的方法研究[J】,药物分析杂志,2002,22(4): 315. [4】梁丽梅.中药制剂中违法添加枸橼酸西地那非的含量测 定方法研究[J】.中国药房,2006,17(24):1917. (收稿日期:2007-12—12修回日期:2008—03-31) l=l冒棼癀I》杂志一《化学文摘CA):l=lJ,欢颦投稿.睁 „ 1156‟ChinaPharmacy2008Vo1.19No.15中国药房2008年第19卷第15期