内皮素在大鼠腹主动脉血栓溶解中的作用

内皮素在大鼠腹主动脉血栓溶解中的作用 首 都 医 科 大 学 学 报M a r. 1997 1997 年 3 月 Jo u rna l o f C ap ita l U n ive r sity o f M ed ica l Sc ience s V o l. 18 N o. 1 第 18 卷 第 1 期 内皮素在大鼠腹主动脉血栓溶解中的作用 首都医科大学附属北京红十字朝阳医院心内科 唐 轶 北京医科大学心血管基础研究所 姚兴海 唐朝枢 提要: 在直流电2三氯化铁诱发的大鼠腹主动脉血栓模型上观察到, 以尿激酶 25 万溶栓后血浆内 ƒU k g 皮素水平显著升高至基础水平的 3. 7 倍, 5 ƒ的外源性内皮素在使血浆内皮素水平进一步升高至基础水 Λgk g () 平 6 倍的同时, 使血栓溶解时间延长 115% 。在离体大鼠主动脉条孵育试验发现, 牛磺酸 20 不影响 ƒmm o lL 基础内皮素释放, 但以剂量依赖方式抑制凝血酶和刺激内皮素释放。在体试验血栓溶解过程中, 牛磺酸 A 23187 使血浆内皮素水平下降了 17% 和 40% , 并使血栓溶解时间缩短 45% 。 结论: 内皮素对血栓溶解具有抑制作 用, 牛磺酸抑制内皮素异常升高, 有利于溶栓治疗过程。 关键词: 内皮素; 溶栓; 牛磺酸 分类号: 461Q () 内皮素 , 在心血管疾病 , 在髂动脉分支前 1, 2用。 暴露腹主动脉en do th e lin E T 1 (处放置电磁流量计探头 日本光电公司, mm 的发生中有重要作用, 但是其对血栓溶解 ) 23100监测血流量, 右肾动脉分支开口 M FV 过程的影响目前尚不清楚。 本研究在直流电 远端 0. 5 处腹主动脉上放置电刺激器。 mm 2三氯化铁诱发的大鼠腹主动脉血栓形成模术后稳定 10 , 取血 0. 3 和测定基础 m in mL 型上, 观察用尿激酶溶栓时 的动态变化, E T 血流量后, 以 10 直流电持续刺激并在该血 V 以及外源性 对溶栓过程的影响; 在离体 E T 管面覆盖浸有 20% 三氯化铁溶液的滤纸 大鼠主动脉血管条上观察牛磺酸对 释放 E T 条, 45 血栓形成后去除电刺激器及滤纸 m in 过程和尿激酶溶栓过程的影响, 以阐明 E T 条。 在血栓溶解过程中的作用。 ( ) 动物随机分为 4 组 每组 = 6: ?血栓 n 对照组: 血栓形成后每 15 取血 1 次, 45 m in 后处死动物, 取血栓段主动脉称重。?单 m in 纯溶栓组: 血栓形成后 15 自颈动脉导管 m in 1 材料和 缓慢推注尿激酶 25 万ƒ记录溶栓所需 , U k g 时间, 溶栓成功后每 15 取血 1 次, 再 45 m in 1. 1 材料后处死动物并取血栓段血管称重。 ?外 m in 大鼠由北京医科大学试验动物中心提 源性 组及?牛磺酸组, 在制做血栓后分 E T 供, 凝血酶、及牛磺酸为 公司提A 23187 S igm a 别自颈动脉导管缓慢推注 21 5 或 ƒE T Λgk g 牛磺酸 400 溶栓及其余处理同第? ƒ, m g k g ( ) 供, 尿激酶为天普公司生产 天普洛欣、2E T 组。 1 及 放免试剂盒为美国 E T P ho en ix P h a rm比较血栓段血管重量, 放免法测定血浆 提供。Co rp 及血栓段组织 活性及比色法测定血浆乳 E T 1. 2 大鼠腹主动脉血栓形成及溶栓治疗() 酸脱氢酶 活性。L D H 2 参照 等人的方法改良。 体重R om so n 1. 3 牛磺酸对离体大鼠血管条 释放的ET 200, 250 雄性 大鼠, 术前禁食 1g W ista r 夜, 自由饮水。 以 20% 乌拉坦腹腔注射麻醉 ( ) 5 右颈总动脉插管备取血和给药ƒ, m L k g 收稿日期: 1996202203 影响2两两比较 因素方差分析及 N ew m an K au ls 取 200, 250 雄性大鼠 5 只,g W ista r 统计学方法分析结果。 20% 乌拉坦腹腔注射 5 麻醉, 取主动 ƒmL k g (脉剪成 0. 2, 0. 3 长的组织片 每片约 10 cm 2 结果 ) ) 组织, 置于 1 2液m g mL K reb sH en se le it 211 中, 37 ?恒温保湿孵育, 以 95%25% 尿激酶溶栓过程中 的变化 O 2 CO 2 ET 气体平衡, 预孵育 15 后分别加入下列试 血栓形成后腹主动脉血流量显著下降m in - 8 ( ) ( )剂至终浓度达: 凝血酶 1 000 ƒ10, 附表, 血浆 活 性 [ 20. 474 ?0. 584 U L A 23187 E T )( ƒ牛磺酸 20 ƒ凝血酶或 , , 较基础水平[ 7. 228 ?0. 790ƒ] m o lL mm o lL A 23187 n gL ] ƒn gL ( ) 与不同浓度的牛磺酸 5、10、20 ƒ及, 升高了 2 倍, 血浆 活性较正常对照升 mm o lL L D H 不加试剂的对照组共 10 组, 孵育 60 , 测 () m in 高 5 倍均< 0. 01。 血栓段血管壁 含P E T ( ) ( 定孵育液的 放免活性。87 量[ 3. 24 ?1.24ƒ较非血栓段 [ 1. ] E T n gg )1. 4 统计学处理() ?0. 34明显增多 < 0. 05。 4 个组ƒ] n gg P θ () 变化曲线见图 1。结果以均数?标准差 x?s表示, 以单E T 附表 4 个试验组观察指标对照表 - 13 - 1 血栓形成血栓溶解腹主动脉血流量ƒ? ƒ×10? mL m in L D H U L 分组 血栓前血栓后溶栓后血栓前结束时tƒm in 血栓对照组- - 77. 13?1. 46?2. 77?8. 213. 6350. 63?0. 19 1. 48?0. 020. 23单纯溶栓组 76. 43?4. 16 1. 47?1. 70 53. 57?8. 51 368. 57?3. 95 ?10. 37 47. 50 - 2. 68?0. 75# ##1. 12?0. 77 68. 38?3. 62 47. 50?5. 24 98. 33?18. 61 3. 60?0. 40 外源性 组 75. 50?5. 13 - E T #0. 52?0. 43 71. 33?2. 07 48. 33?6. 05 30. 83?5. 85 1. 32?0. 44 牛磺酸组- 81. 50?3. 56 各组 = 6; 3 单纯溶栓组与血栓对照组比较 < 0. 05; 牛磺酸组、外源性 组与单纯溶栓组比较 < 0. 05, ## < 0. 01 nP E T P P ( ) 81% < 0. 05, 溶栓组血栓段血管壁 P E T ( ) ( 含量[ 1. 03 ?0. 31较血栓组[ 3. 24ƒ] n gg () ) ?1. 24ƒ明显减少 < 0. 05, 血栓段 ] n g g P ()血管重量[ 12. 6?4. 3] 也轻于血栓对照m g () 组[ 27. 4?7. 2, < 0. 05 。m gP 2. 2 外源性 对溶栓的影响ET 溶栓前给予 5 ƒ21 静注的动物 Λgk g E T (较单纯溶栓组血栓溶解时间延长了 115% P ) ( < 0. 01, 血浆 上升了 34% < 0. 05,L D H P 图 1 4 个试验组 变化曲线图 ET ) 见附表, 血浆 水平在溶栓后即刻和 45 E T 时 分 别 比 单 纯 溶 栓 组 升 高 了 65%m in (尿激酶溶栓后, 腹主动脉血流量回升 附 )( ( ) 614 [ 35. 170?3. 127? 26. 206?1. ƒ) ( n gL 表, 与基础水平比较差异无统计学意义 P ) ( ) 0. 05] 和 66% 26. 340?3. 326n gƒL , P < ) > 0. 05, 但血浆 水平继续上升, 较血栓 E T (( ) ?19. 403?1. 762ƒ< 0. 05 。 , 对照组升高 30% , 出现又一高峰[ 26. 206?n gn g L P ) ( 2. 3 牛磺酸对溶栓的影响1. 614 且与前一高峰值[ 20. 474 ?ƒ, n gL ( ) 在溶栓前静注牛磺酸 400 的动 ƒ0. 584比较差异有统计学意义 <ƒ] m g k g n g L P ) (0. 05。 血浆 活性较血栓对照组升高物, 血栓溶解时间较单纯溶栓组缩短 45% L D H P 第 1 期唐轶等: 内皮素在大鼠腹主动脉血栓溶解中的作用31 ) (有在体外 具有抗血小板聚集和 < 0. 05, 血浆减少至该组的 49% < E T L D H P 3 ) 0. 05 , 分 别 为 其 水 平 的 83%激活凝血因子活化血小板双重作用, 而在 血 浆 E T 4 (() )体内则促进血栓形成。 本研究发现血栓形 [ 23. 230?2. 153?26. 206?1. 614 ƒn g L ( ) ƒ, < 0. 05 和 60% 12. 320?1. 514成时血浆 活性明显升高, 用尿激酶溶栓 n g L P E T () ?19. 403?1. 762< 0. 05 。ƒƒ, 之后, 水平进一步升高, 与 的结n g L n gL P E T T om o da 5 2. 4 牛磺酸对血管释放 作用的影响 果。 血栓形成时, 血管内皮损伤刺激了 ET E T 在离体大鼠主动脉条孵育试验观察到,的合成和释放, 而溶栓时血浆 进一步升 E T 凝血酶和是血管 释放的强刺激剂, A 23187 E T 高, 可能与血栓溶解产生的分解产物对内皮 ( ) 牛磺酸 20 ƒ并不影响 的基础释 mm o lL E T 细胞刺激有关。 本试验发现溶栓组血浆 E T 放, 但是牛磺酸呈剂量依赖性地抑制凝血酶 明显升高, 而血管壁组织的 含量下降, 提 E T ()或刺激血管释放 的效应 图 2。A 23187 E T 示组织中 释放入血。 然而局部组织释放 E T 增加似不足以引起循环 如此明显的 E T E T 增加。 近年证实 是组织缺血再灌注损伤E T 6 的重要环节。 本试验观察到溶栓组织血浆 水平进一步升高, 提示血浆 的升高 L D H E T 可能与缺血再灌注的血管床大量释放 入 E T 血有关。 本试验溶栓前给予对动物血压无明显影 响的小剂量外源性 21 5 明显地延 ƒ, E T Λgk g 长了血栓溶解所需时间, 使血浆和 L D H E T 水平升高更为显著, 提示 对血栓溶解具 E T 有明显的抑制作用。 7 牛磺酸具有抑制 释放的作用, 本 E T 试验在离体大鼠血管条发现牛磺酸对基础 的释放并无明显影响, 但显著抑制凝血 E T 酶和刺激 释放作用。牛磺酸抑制血A 23187 E T 管内皮受刺激时 释放的尚不清楚。 E T 已知 的释放是钙离子依赖过程, 牛磺酸 E T 是细胞内钙离子调节剂, 能有效抑制各种刺 8 激因素所引起的细胞内钙离子超负荷, 本 图 2离体试验 变化直方图 试验溶栓前应用牛磺酸抑制了血管 的释 ET E T 组; 3 1 对照组; 2 凝血酶组;4 牛磺酸组; 5 凝血酶放, 同时减轻了溶栓后血浆 活性的增 A L D H 23187 ( ( ) ) 加。 + 牛磺酸 5 ƒ凝血酶+ 牛磺酸 10 ƒ; 6 ; 7 mm o lL mm o lL ( ( ) 凝血酶+ 牛磺酸20 ƒ+ 牛磺酸5 ƒ; 8 mm o lL A 23187 mm o l 血栓溶解过程中 水平升高, 外源性 E T ) ( ) ( + 牛磺酸10 + 牛磺酸20 ; 9 ƒ; 10 L A 23187 mm o lL A 23187 延长血栓溶解时间, 牛磺酸抑制 释 E T E T )ƒmm o lL 放, 同时对溶栓有促进作用。目前尚无临床可 应用的特异性 受体拮抗剂或释放抑制 E T 3 凝血酶凝血酶组或A 组与对照组比较 P < 0. 05; # 23187 剂。牛磺酸无毒副作用, 具有拮抗缺血再灌注 + 牛磺酸与凝血酶组比较 P < 0. 05; ? A + 牛磺酸与 23187 组比较 < 0. 05A 23187 P 损伤的细胞保护作用, 并在动物实验中能抑 3 讨论 为溶栓治疗的辅佐剂值得进一步研究。制溶栓时 大量释放和促进溶栓过程, 作 E T 参考文献 21 21. . 1 S tew a r t D JInc rea sed p la sm a endo th e linla t io n and in v it ro cau sed by endo th e lin , 1993, 72: 203, 209T h rom b R e s in th e ea r ly ho u r s o f acu te m yo ca rd ia l in2 . T om o da HCo ro na ry th rom bo ly sis and en2 5 fa rc t io n. J A m Co ll C a rd io l, 1991, 18: 38, ( ) 21 . , 1993, 44 6:do th e lin re lea seA ng io lo gy 43 441, 446 . 2 R om so n J LE lec t r ica l induc t io n o f co ro 2 . D aga ssan P HR o le o f endo th e lin du r ing na ry a r te ry th rom bo sis in th e am bu la to ry 6 rep e rfu sio n af te r isch em ia in iso la ted p e r2 can ine A m o de l fo r in v ivo eva lua t io n o f an2 . , 1994,fu sed ra t h ea r tJ C a rd io l P h a rm aco l . , 1980,t i th rom bo t ic agen t sT h rom b R e s 24: 867, 874 17: 841 陈青. 牛磺酸对大鼠脑缺血再灌注损伤时 . 21 H a lim AE ndo th e lininc rea sed im 2 3 7 m uno reac t ive V o n w illeb rand fac to r in en2 变 化 的 影 响. 中 国 病 理 生 理 学 杂 志,E T () do th e lia l ce lls and induced m ic ro th rom bo sis 1994, 10 5: 533, 536 苏庆德. 牛磺酸的生物学效应. 国外医学生 . , 1994, 76: 71, 78 8 in ra t sT h rom b R e s理、病理科学与临床分册, 1991, 11: 6 . 4 H a lim ACo agu la t io n in v ivo m ic ro c ircu2 Ro le of En do the l in in Ra t A bdom ina l A or t ic Throm bo ly s is T an g Y i , ,D ep a rtm en t of C a rd iology B e ij in g R ed c ross C h a oy a n g H osp ita l A f f il ia te of C ap ita l U n iv e rs ity of M ed ica l S c ien ces , Y ao X in gh a iT an g C h ao sh u , C a rod iov a scu la n I n s t itu teB e ij in g M ed ica l U n iv e rs ity 2U sin g a ra t ab dom in a l ao r t ic th rom bo sis m o de l in du ced b y d irec t cu r ren tfe r r ic t r ich lo 2 3. 7 t im e s a s b a se lin e af te r ly sin g th e r ide m e tho d, w e fo u n d th a t p la sm a E T leve l w a s 250 000 , 5 th rom b u s w ith u ro k in a se u n it s p e r k ilo g ram w h ile m ic ro g ram p e r k ilo g ram o f ex 2 , 115% , o geno u s E T p ro lo n ged th e t im e o f th rom bo ly sisw h ich w a s o f b a se lin em eanw h ile 20 p la sm a E T w a s 6 t im e s a s b a se lin e. In cu b a t io n o f ra t ao r t ic st r ip in v it ro show ed th a t ƒ, mm o lL o f tau r in e h ad no effec t o n b a se E T re lea seb u t it in h ib ited th e st im u la t io n o f th rom 2 . 17% 40% b in an d A 23187 to E T in a do se dep en den t w ayP la sm a E T h ad an d o f dec rea se in v i2 , 45% . vo af te r in jec t io n o f tau r in ean d it requ ired a sho r te r t im e to ly se th e th rom b u sW e co n2 , c lu de th a t E T in h ib it s th rom bo ly sisit s ab no rm a lly in c rea sin g can b e w eak en ed b y tau r in e .w h ich is b en if ic ia l to th rom bo ly sis : ; ; Key word sen do th e linth rom bo ly sistau r in e