大鼠线绘法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究

大鼠线绘法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 苏州大学学位论文独创性声明 本人郑重声明:所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立 进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文 不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏 州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作 出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本 声明的法律责任。 论文作者签名: i ij拯。: E1 期: :厶盗:皇:童: 苏州大学学位论文使用授权声明 本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的， 即:学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸 质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献 信息情报中心、中国科学技术信息研究所 含万方数据电子出版社 、 中国学术期刊 光盘版 电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子 文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索。 ， 涉密论文口 本学位论文属 在――年一月解密后适用 本规定。 非涉密论文口 论文作者签名 Et期:z暨理冬型 导师签名 日 期:2坌丛【:?2 ? 人鼠线栓法人脑中动脉闭集模型改进的实验研究 中义摘要 大鼠线栓法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 中文摘要 背景与目的 CerebralVesscular 缺血性脑血管病 Ischemic Disease，ICVD 是神 经科常见病 多发病，在ICVD的治疗中重建血流或增强缺血区的血流供应是缺血脑组织修复损伤 的必需条件，但同时带来的再灌注损伤也是目前最受关注的问题。线栓法大鼠大脑中 cerebral 动脉闭塞 middle artery 护作用。 本实验用周龄和性别匹配的SD大鼠成功建立了MCAO动物模型，对原有线栓法 大脑中动脉闭塞模型进行了改进，并用MK-801预处理进一步验证动物模型，为研究 脑缺血再灌注损伤的发病机理和研制治疗药物打下基础。 方法 MCAO 组及假手术组 50只雄性SD大鼠随机分为3组，IR组、p-MCAO permanent 为1:39的混合溶液中 于脑缺血15分钟前经颈外动脉给药。假手术组、两模型组大 鼠仅给予等容量溶剂。手术组以线栓法制备MCAO模型，假手术组接受相同手术流程， 但不插入线栓。手术后分别对各组大鼠做神经功能缺损评分，随后取各大鼠大脑冠状 位切片行TTC染色以测量脑梗死及水肿体积，冰冻切片焦油紫染色观察大鼠大脑皮层 区细胞损伤程度，酶联免疫吸附法测定脑中肿瘤坏死因子Q TNF-Q 含量。 结果 1(各手术组大鼠出现严重的神经功能障碍，假手术组大鼠则无任何临床症状。 且神经行为学评分显示IR治疗组大鼠神经功能明显优于眼模型组。 中文摘要 大鼠线栓法大脑中动脉闭寒模型改进的实验研究 2(切片TTC、焦油紫染色各手术组大鼠脑组织见明显脑梗死灶，假手术组大鼠 无此改变。承治疗组脑梗塞体积较瓜模型组明显减小。 3(对大鼠脑组织生化指标检测发现，手术组大鼠的TNF―Q的表达明显增加。与 玳模型组相比，浓治疗组大鼠TNF―a的含量有所降低 P O(01 。 结论 1(本实验建立的大鼠模型在临床表现、病理变化等方面符合MCAO模型 的表现， 模型稳定、可靠，是研究脑缺血再灌注损伤的理想动物模型。 2(MK"801能改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能障碍，减轻缺血区的脑梗 死，并减少炎症因子TNF―a的产生，具有明显的改善脑缺血再灌注损伤的作用。 关键词:脑缺血再灌注损伤;大脑中动脉闭塞;MK--801 作 者:闫 换 指导教师:董万利 ? for methodmiddle ofthesuture-occuluded Modification inrats cerebralocclusion artery Abstract and 0bjective: Background Withthe ofan diseasehasbecome developmentagingpopulation，cerebrovascular tohuman thatlead harm ofthethree diseases health(Among one important significant becauseofits hasbeen attention whichcerebralischemia gainedincreasing highmorbidity， diseasenot the health，butalso and onlyimpaireselderly’S brings mortality(The deformity the of and the thrombolytic burdento development society(Recentyears，with blood isthemain treatmentforacutecerebral the endovascular infarction，restoringsupply failstorestoreits inducesmoresevere sometimesitnot function，but treatment，but only ascerebral brain ischemia-reperfusioninjury( dysfunction，known MK-801 couldexhibitits effects haveshownthat studies protective Manyprevious in theinfarct thecontent brainischemia reducing size，decreasing against injury，resulting invivo(Inour thethe effectsinischemiaarea modify of presentstudy(we inflammatory cerebral usethe methodformiddle occlusion，andprotective suture-occuluded artery ofMK--801 to the ofthemethod( effects verifypractice ischemia-reperfusion against Methods: cerebral Middlecerebral usedtoestablishthefocal occlusion MCAO was artery 3 inrandom:sham weredividedinto group， ischemiamodel(Therats groups ofthesame was MCAO capacity group(0(9,NaCl ischemia-reperfusiongroup，permanent weremadeafteranaesthesia tothesham andthemodel models given group group(MCAO was 90minutesand afterthe was 15minutes(Theblood andfixation drug given deprived wereobservedandthecerebral of deficit 24hours(Scores was neurological reperfused infarctionsizewasmeasured by2,3，5-triphenytetrazolium neurons fast ofcerebralcortical throughCresyl morphologicalchanges technique(The brain factor-a TNF―Q in contentofTumornecrosis violet wereobserved(The staining ELISA( wasmeasured by Results: and24hoursof of After90minutesofcerebralischemia reperfusion， scores ? 1 Keywords:ischemia-reperfusion;MCAO;MK-80 Written Huan by:Yan SupervisedWanqi by:Dong 前 言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„((6 刖 罱„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„” 材料与方 法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7 实验结 果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„((11 讨 论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„17 结 论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„23 参考文 献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24 综 述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„((27 中英文缩略词汇 表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(36 攻读学位期间公开发表的论 文„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(37 致 谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„一38 大鼠线栓法人脯中 脑血管疾 脑部疾病的总 残疾的最主要原刚11。其中缺血性脑血管病 ischemiacerebral--vasculardisease，ICVD cerebral 约占脑血管病的75,i21，而大脑中动脉阻塞 middle occlusion，MCAO artery 占缺血性脑血管病的40,左右【31。我国为世界范围内脑血管病高发病率 地区，脑血管 病发作者当中，四分之三以上遗留有不同程度的偏瘫、失语和大小便障碍等 残疾，需 长期护理，给家庭及社会造成沉重的负担，严重影响中老年人的生活质量 【4l。缺血性 脑血管病己经成为危害人民生命健康和生活质量的主要公共卫生问题。所 以，如何能 够防治该病，改善患者的预后，减轻社会及家庭的严重负担，便成为了缺血性脑血管 病研究的重点。 临床上缺血性脑血管病的治疗原则是及时恢复缺血区的血液供应。目前脑梗塞急 性期最有效的治疗方法即为“溶栓”，近年来溶栓治疗获得了很大发展，出现了静脉 内溶栓、超声辅助静脉内溶栓、动脉内消融以及机械取栓和颅内支架置入等治疗措施 15】。且脑梗塞后机体会启动多种机制，如激活纤维溶解系统，使血栓溶解，故自然状 况下50,以上的梗塞血管可以自发再通。然而，许多脑组织缺血性损伤并未因血管的 再通而减轻，反而进一步加重，出现再灌注损伤。脑缺血再灌注损伤 ischemia-reperfusioninjury 是指脑缺血致脑细胞损伤，恢复血液再灌注后，其缺血性 损伤反而进一步加重的现象。 脑缺血再灌注损伤是缺血性脑血管疾病重要的病理生理过程，其发生机制较为复 杂，涉及到多个病理环节。以往对脑缺血再灌注损伤机制的研究主要集中在氧自由基、 兴奋性氨基酸、细胞内钙超载等方面，近年来随着分子生物学的发展，炎症反应和细 胞凋亡学说成为脑缺血再灌注损伤机制研究的热点【6，71。现普遍认为，缺血再灌注早 期的炎症反应是导致继发性脑损害的重要原因f8,91。脑缺血再灌注的炎症反应和一系 列与之相关的兴奋性氨基酸、氧自由基、酸中毒等环节紧密联系，互为因果，彼此重 叠，相互影响，形成恶性循环，最终导致脑细胞凋亡或坏死1101。 近年来研究发现，脑缺血再灌注损伤是一个快速的级联反应。脑缺血的极早期， 引 言 大鼠线栓法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 在几分钟内可以导致神经细胞氧化磷酸化能力减弱，ATP合成减少，离子泵功能部分 产生去极化。细胞膜去极化导致神经细胞突触前释放兴奋性氨基酸，兴奋性氨基酸主 要通过受体活化方式而起兴奋性介质作用，受体活化效应主要引发大量的Ca2+内流， 酶、钙调磷酸酶 CaN 、蛋白酶和磷脂酶，引起DNA、蛋白质和磷脂降解，细胞代 谢、结构与功能多方面的异常改变，神经细胞逐步死亡【?J。同时过量Ca2+ 沉积于线粒 体，使线粒体氧化磷酸化失偶联进一步加重，膜电位丧失，呼吸链解体，导致细胞能 量的严重丢失，同时致使02经单电子还原生成超氧阴离子 02( 增多，产生的大量自由 基与脂质、蛋白质、及核酸发生反应，引起膜脂质过氧化，导致膜损伤，线粒体功能 障碍，细胞溶解和组织水肿等一系列损害作用，称之为自由基连锁反应【12】。此外，线 transition 粒体通透性转运通道 pcmeabilitypore，PTP 开放，定位于线粒体的一些因 激活的级联反应，最终导致依赖细胞色素C和caspase途径的细胞凋亡【13】。 缺血性脑血管病临床治疗以药物治疗为主，常用的药物有钙离子通道阻滞剂、谷 氨酸受体拮抗剂、神经营养因子、抗氧化剂、抗炎剂以及基因药物等。近20年，针对 脑缺血再灌注损伤各种因素，抑制再灌注损伤成为目前治疗缺血性脑卒中的关键环 节。许多新的药物在动物试验获得很好的疗效，而且不少也开始应用于临床，其中， 神经保护剂的应用已展开大量的研究并应用于临床。在脑缺血再灌注前或再灌注时给 予脑保护剂，抑制脑组织的炎症反应，有利于缺血后大脑功能的恢复。 它与NMDA受体具有高亲和力，与其结合后可产生长效阻断兴奋性氨基酸毒性的作用 n4J，能显著改善局灶性脑缺血模型的神经功能缺损症状并明显减小其脑梗死体积。脑 经元的死亡。体外实验亦证实MK,801具有神经保护作用。 缺血性脑血管病是严重威胁现代人类健康的重大疾病，对其研究离不开动物模 型。局灶性脑缺血模型是最常用的脑缺血实验动物模型，局灶性脑缺血动物模型有许 多种，建立一种具有良好重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中发生的动物模型， 一直是实验性脑血管病研究关注的重点。大脑中动脉为临床上缺血性脑血管病的多发 2 大鼠线栓法人脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 引 言 部位，故MCAO模型已经被广泛应用于实验性脑缺血的研究，为的局灶性脑缺血 模型。线栓法大鼠MCAO模型不需开颅，缺血部位恒定，且可进行再灌注， 对缺血及 再通时问能进行准确控制，适用于对神经元缺血敏感性、耐受性以及再灌注损伤和治 疗时间窗的研究。目前国内外学者多用易感动物建立MCAO模型，用以阐明脑缺血再 灌注损伤机制，并为其监测病情、合理治疗的选择以及新疗法、新药物的筛选等 提供可靠的实验依据。为此建立稳定可靠的MCAO动物模型是今后开展脑缺血再灌注 损伤系列研究的基础。 大鼠为目前最常用的局灶性脑缺血动物模型。Markgraf等115l在实验中发现，在不 大鼠的模型效果居于二者之间。因此，以Fischer-344大鼠的模型效果最为理想，但因鼠 源问题，目前应用较少。SD大鼠MCAO后，梗死体积较大，较恒定，且较温和，生长快，价格 便宜，故用正常大鼠进行实验时一般常用sD大酬161。 人类卒中多发生在已有卒中多重危险因素的中老年人群中，但老龄大鼠的MCA发 生了不同程度的迂曲、粥样硬化、管腔狭窄等解剖及病理上的改变，用老年大鼠线栓 法制备脑缺血模型时，由于动脉扭曲或管腔狭窄往往使栓线难以推进，故目前的实验中， 仍以青壮年大鼠为优先选择。本实验即采用8周龄相当于成年早期的大鼠制作动物模 型。 体重因素在模型的制备中颇为关键‘171。随鼠龄增加，体重相应增加，动脉直径、 颈静脉孔直径也会增加。体重过重，颅内血管增粗，难以完全阻断;体重过轻，则难 以将线栓插入足够深度。对不年龄段的大鼠应选择不同直径的栓线与之相适应，从而 确保最大限度地阻断血流。目前多主张选用体重250,3509的大鼠【18】。 由于雌激素对脑缺血有保护使用，所以除因研究雌激索作用机制而选择雌性动物 外，目前多选择雄性动物。因此本实验在课题设计中选用国内常用的8周龄体重 270-280克的SD雄性大鼠。 本实验用50只8周龄雄性SD大鼠成功建立了MCAo动物模型，对原有大鼠大脑中 动脉闭塞模型制备方法进行了改进，并用MK-801预处理进一步验证动物模型，为研 究局灶性脑缺血再灌注损伤的发病机制和治疗药物的研制打下基础。 引 言 人鼠线栓法人脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 参考文献 Suwanwela WJ(Acuteischemic N，Koroshetz stroke:overviewofrecent 【1】 therapeutic Rev Med(2007;58:89―106( developments(Annu 【2】 石学敏(脑卒中与醒脑开窍(北京:科学出版社(2007;678-685( 【3】 曹勇军，程彦斌(线栓法建立大鼠局灶性脑缺血,再灌注模型的改进与探讨【J】(中 国应用生理学杂志(2001;17 2 :198-220 【4】 罗祖明，董佑忠，彭国光(脑血管疾病治疗学(北京:人民卫生出版社(1999;455-462( 【5】 徐会爱，孟秀梅(急性缺血性脑卒中的治疗进展【J】冲国老年学杂志(2007;11 27 : 2151-2153( Erhardt inInterleukin JJ，WhitmoreRG JA，et 【6】Legos a1(QuantitativeChanges Proteins Focal Strokeinthe Following Rosomff Reta1(Resuscitationfromseveretrauma(Crit 【7】 HF,KochanckPM，Clark Care Ad(1996;24 2 :48-56( a1(Favorableoutcomeofischemicin J,GomisM，Arboix stroke 【8】 Marti--Fabregas A，et with patientspretreatedstatins[J](Stroke(2004;35 5 :1117-1121( RJ(Inflammationinstrokeandfocalcerebral 【9】HuangJ,UpadhyayUM，Tamargo Neur01(2006;66 3 :232-245( ischemia[J](Burg 【lO】柳洪胜，张允岭，刘雪梅(从局灶脑缺血再灌注炎症因子的动态变 化探讨内毒形 成及作用【J】?匕京中医药大学学报(2007;30 4 :246-248( SP，BullockR，GrahamDI，eta1(Correlationbetweenaminoacid 【11】Butcher release and inratbrain cerebral outcome 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线栓法大鼠大脑中动脉闭塞模型 MCAO 的病理改变同人类脑卒中相类 似，且具 有不开颅、效果肯定、可控制缺血与再灌注时问的特点，自创建以来得到广泛应用。 但由于该模型手术操作比较复杂，许多因素可直接影响模型的成功率，结果给复制带 来较大的困难。为此建立稳定可靠的MCAO动物模型，是为今后开展脑缺血再灌注损 伤系列研究的基础。 因大鼠具有种系内纯性好，同系大鼠间遗传差异小;神经系统比较发达，与人类有 类似的脑血管解剖特点:有极强的抗感染能力和生命力，能经受麻醉、外科手术及术 后感染的考验;成本低，来源有保障等优点，大鼠已经成为目前最常用的局灶性脑缺 血动物模型。本实验采用目前常用的SD雄性大鼠作为实验动物，成功制作MCAO动 物模型。 6 ―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――,一一,――― 大鼠线栓法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 材料与方法 材料与方法 一、实验材料 1(实验动物 50只8周龄雄性SD大鼠，270-280克，购于中国科学院上海实验动物中心。 2(主要试剂 2(1药品与试剂 MK-801 葛兰素史克 、蔗糖 国药集团化学试剂有限公司 、10,水合氯醛 华 瑞制药 、焦油紫 美国SIGMA公司 、四氮唑红 TTC，伊瑞德生物技术 ;多聚甲醛 PFA，天津福辰化学试剂公司 、磷酸二氢钠及磷酸氢二钠 北京化学试剂公司 。 2(2试剂的配制 2(2(1前固定液配制方法 Na2HP04(12H2028(649放于干净的容器中，加去离 将多聚甲醛409及O(1M 子水至800ml，60* 2溶解 磁力搅拌器 。待前液溶解后，加入O(1MNail2P04(2H20 3(129及蔗糖309 3, ，加去离子水200ml至1000ml;pH值调至7(4。 2(2(2 TTC染色液的配制 将0(759TTC粉末加入49ml的双蒸水中，溶解后加入lmlG(M。 3(主要仪器设备 式温度调节仪 Hm'vard Sharp 、数 器材厂、盖玻片 江苏省海门市实验器材厂 。 7 材料‘j方法 大鼠线栓法人脑中动脉闭采模型改进的实验研究 二、实验方法 1(实验对象及分组 笼中，控制动物房12小时明暗交替，温度为21?2?。给予充足饮水和饮食。后将 15分钟前经颈外动脉给药。假手术组、两模型组大鼠仅给予等容量溶剂。手术组以 线栓法制备MCAO模型，假手术组接受相同手术流程，但不插入线栓。 2(动物麻醉 用异氟崩02混合气体吸入麻醉大鼠。5,异氟烷诱导麻醉，2,异氟烷用于手术， 1,异氟烷用于维持。手术完毕后停用异氟烷。 3(激光多普勒监测脑血流 大鼠头皮正中切口，暴露前囟。前囟后2mm，前囟旁5mm处用电钻轻轻钻薄颅骨， 避免将颅骨完全钻通，将激光多普勒光导纤维探头置于骨窗处，待脑血流数值稳定后 粘合电极片和颅骨，确保电极片探头口与骨窗对准并牢固地固定在颅骨上，最后将激 光多普勒光导纤维探头插入电极片探头口内，应用激光多普勒连续监测大鼠大脑中动 脉分布区的血流量。5―10分钟血流量作为基线。分别记录栓塞前、插栓后5分钟 及拔栓后5分钟三个时间点的脑血流。 4(动物模型的建立 4(1备皮 皮肤松弛后将大鼠置于加热板上，手术中将其温度控制在37?O(5。C。2,碘伏及 75,酒精消毒皮肤切口。 4(2手术 参照Koizumi大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤线栓模型稍加改进，制备大脑中动脉 闭塞 MCAO 模型:手术前将所有器械用5,o新洁尔灭或75,酒精消毒。由左颈部 入路切开皮肤，分离浅筋膜和颈部腺体组织，钝性分离左侧胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌， 8 人鼠线栓法大肺中动脉闭塞模型改进的实验研究 材料与方法 carotid 在此两肌肉之间可见左侧颈总动脉和迷走神经，暴露左侧颈总动脉 common carotid carotid artery，ICA 和I颈外动脉 external artery，CCA 、颈内动脉 internal artery，ECA 。激光多普勒血流仪记录大脑中动脉血流量，记录5。lO分钟血流量作 为基线。于距CCA分叉约lcm处结扎、剪断颈外动脉。分离出CCA近心端主干及 ICA至其发出翼腭动脉 Pterygopalatine 剪一个小口，将线栓由ECA插入ICA。确认线栓进入ICA后，打开ICA动脉央，将 线栓缓慢向ICA入颅方向推进 注意向内上方的角度插入，将线栓插入颈内动脉远端 而不要插入翼腭动脉 。取下颈总动脉上的动脉央。将线栓插至大脑前动脉起始部狭 窄处，至激光多普勒血流仪指示血流量急剧下降时停止向前，此处距颈总动脉分叉处 约18-22mm。缝合伤口，将大鼠置于60W灯泡下保暖。阻塞后局部脑血流量下降至 基线的30,以下为局灶性脑缺血诱导成功。瓜组阻塞90分钟后再次打开伤口，取出 线栓，脑血流恢复。测量再灌注后5110分钟的脑血流量。缝合伤口，碘伏消毒，’将 大鼠置于60W灯泡下保暖5小时后放回动物房。p-MCAO组大鼠不拔出线栓， 假手 术组接受相同手术流程，但不插入线 栓。 ( 5(MCAo大鼠模型的神经功能评分 对大鼠进行神经功能评分，动物用塑料盒笼养，保持12h,12h的昼,夜循环，自由 进食和饮水。神经功能评分在大鼠饲养环境进行，保持周围环境恒定不变。评分在手 术后24h进行，避免在手术当天测试，以排除麻醉药物的干扰，并最大限度的减少手 术创伤对其运动功能的影响。MCAO模型国际较为通用的评分法为Zea Longa„评分 法:无神经功能缺损症状，0分;不能完全伸展右侧前爪，1分;行走时向 右侧旋转， 2分:行走时向右侧倾倒，3分;不能自发行走且意识水平下降，4分。 6(脑梗死体积和脑水肿测定[21 大鼠神经功能评分结束后，腹腔注射水合氯醛进行麻醉 300-350mg,Kg ，用 生理盐水灌注冲洗脑内血液，迅速断头取脑组织，将取出的整个脑组织放入-20。C冰 箱冷冻10min至脑变硬，将其置于大鼠脑切片模具中，从大脑半球额极至枕极用切刀 PBS液 PH7(4 连续冠状切片6片，每片厚2mm。将脑片小心放入含2,TTC的0(2mol,L 中，37?浸泡5min，正常脑组织染成深红色，缺血脑组织呈苍白色。之后浸入10,甲 Plus Software 醛24dx时，24d'时后数码相机拍摄，使用Image-ProAnalysis 5(0计算机 O 材料与方法 人鼠线栓法人脑中动脉闭采模型改进的实验研究 图像分析系统将梗死区与非梗死区轮廓描绘出来，分别计算出6个层面同侧 梗死侧 非梗死区大脑半球的面积 S术梗 ，对侧 J下常侧 大脑半球面积 S对棚 ，同侧 梗死侧 大脑 数 R峨水肿，, 【 V同侧一V对侧 ,V对侧】×100,。 7(焦油紫染色对缺血灶作形态观察。 小时，然后用冰冻切片机进行切片 片厚30um 。切片贴于明胶载玻片上，于37? 烘箱中烘24d,时后作焦油紫染色。切片常规脱水至第二次纯酒精，入焦油紫工作液染 脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。焦油紫染色后，根据脑定位图谱，在前囟前后的 10个平面脑切片 两相邻切片间隔0(8mm 上作观察。于普通光学显微镜下观察每张 切片的组织病理形态，了解有无细胞坏死脱落、血管异样，观察胶质细胞有无增生。 8(脑中肿瘤坏死因子a TNF―Q 含量测定 手术24d,时后将大鼠断头取脑，于干冰上分离大脑皮质 手术组取受损侧大脑半 球脑组织 ，-70"C保存。超声制备组织匀浆后，4"C孵育l小时，取上清。按厂家说明 用固相夹,C,,ELISA试剂盒检测TNF―a水平。 10(统计学处理 计软件，进行正态性检验和方差齐性检验，采用t检验进行组间比较。p O(05表示差异 有统计学意义。 10 人鼠线栓法人腑中动脉闭塞模型改进的实验研究 实验 实验结果 一、大鼠局灶性脑缺血再灌注后的神经功能缺损评分 大鼠手术24h后，采用Longa评分法进行神经功能缺损评分。见除假手术组 各组均出现不同程度的神经行为学异常，主要表现为左侧Homer’S征 上睑下垂，瞳 孔缩小 和右侧前肢为重的瘫痪，表现为提尾悬空时，右侧肢体屈曲，内收紧贴胸壁， 肩内旋，行走时向右侧转圈，或向右侧倾倒等。结果显示:假手术组大鼠神经功能无 异常，而各手术组均见不同程度的神经行为异常，表明造模成功;与m模型组比较， 分别为3(07?O(34，3(09?O(30，p 0(05 ，且两组之间无显著差异。 图1 各组神经功能缺损评分 blood 二、MK-801对大鼠脑血流 cerebralflower，CBF 的影响 为探求MK-801是否会对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑中动脉供血区皮层血流产 生影响，手术过程中详细监测了手术组在栓塞前、插栓后5分钟及拔栓后5 分钟三个 时间点的CBF的变化 假手术组未行插栓处理，因此未记录CBF 。结果显示，各手 实验结墨 人鼠线栓法人脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 术组大鼠插栓后的CBF值均下降至栓塞前基础值的20,以下 与基础值比较( 型组及m治疗组CBF均较前上升，且两组比较，m治疗组CBF上升明显 P---0(03 0(05 。 表1各组不同时间点CBF变化 爻?S 占i、越墨oIR模型组 IR治疗组p-MCAO模型组―亭丽西茹礴再两 人鼠线栓法人脯中动脉闭塞模型改进的实验研究 实验结果 表2各组脑组织TNF-a含量 又 ?S r0 一 4 4 3 3 2 2 l 一?暑,?盘一盛，?z扣 l ???胁?的???船o i|:(，，，。。，。，。，k。，。。。。p。。。。，r。。。。，，，。。。(。，;。。，。。。。。P，。，。 ^j | k„。。一一„:„„。(„„。。,,。。。。一。。!三!!p 图3各组脑组织TNF―Q含量 四、焦油紫染色病理形态学观察 焦油紫染色镜下观察，假手术组海马区细胞层次分明，神经细胞形态结构正常， _ 毛细血管周围间隙正常。手术组大鼠脑损伤主要位于损伤侧纹状体、皮层区及海马。 可见损伤侧海马CAl-CA3区结构完整性破坏，神经细胞层次缺如或不清楚，神经元 数目减少，排列紊乱，锥体细胞体积增大欠，胶质细胞肿胀且数量增多，脑基质 明显疏松，血管周隙明显增宽，问质明显水肿。 验结果 大鼠线栓法人脑中动脉闭寒模型改进的实验研究 彬 识 ? ， “， "‖ 一 ‖ ?一? 、、 噌 ，，， 一f_，t，。_ 0。瓣 ? ‖瑟-‖魏移。繇荔匕龇 P ,,一一瓤 翰 , 麓×一 ‖鬯兹 _。一 牮一 零”„麓 ”„7鼍 ?,‖r一一々匆。《 箩?刁 o夕4bk―k。、《 ?7是凳。D莲 巳幺趔 簇 ?一j‘霪 匕幺?篡一 毳耘燃兹锄;貔缝菇兢;五。i翻 ‖一’。;―鳓翳。、，;一誓;帮 一翻 孑+!+。; ’?6?。建?t，，# o?Rj雾习 矿 ’ ‘》 爹 7，t，“ 4jo， 、?霉 ’ 霎; 。 “’。’; : :9; ?一„。，’?9? F―j，『。i‘,，，+，篆 b篓麓三纛。;盔叠 融氨。一。i纛盛 图4:假手术组和手术组大鼠海马区焦油紫染色:假手术组大鼠海马CAl-CA3区细 胞未见明显病理改变 Ax 死亡 Dx 100，Ex400，Fx400 。 五、TTC染色结果 5(1TTC染色病理形态学观察 手术24h后，TTC染色肉眼观察，假手术组大鼠双侧脑组织及各手术组大鼠损 伤对侧脑组织呈均匀一致的红色。两模型组及P-MCAO治疗组损伤侧脑组织与对侧 相比，体积增大，脑肿胀，脑回变平，脑沟变浅，可见明显的苍白色梗死灶，梗死区 边缘整齐，与周围正常组织的分界清楚。m治疗组可见大脑中动脉支配区内明显缩 小的脑梗死灶，且梗死灶边缘不整齐，与周围正常组织的分界模糊。 14 火鼠线栓法人腑中动脉闭塞 A B C D E 图5:各组大鼠TTC染色，假手术组未见梗塞灶，各手术组均可见明显梗 塞灶。其 治疗组。可见，D、E组梗塞灶较大，B组见中等大小脑梗塞灶，C组梗塞 灶小。 5(2校正的脑梗死及脑水肿体积 1]rC染色结果显示瓜模型组校J下后脑梗死体积为41(40?4(15,， IR治疗组校正 矫正后脑梗死体积明显减少。但两组的脑水肿体积无明显差异 p 0(09 0(05 。 差异 P--0(35 0(05 。 表3各组脑梗死及脑水肿体积 又?s 15 实验结果 大鼠线栓法人腑中动脉闭塞模型改进的实验研究 口Z?一―F’,„„„7„一„一―――?―――_-碉 f 一量獬Vjh|eofC甜re荫ed,日协m鲁 ? ;墨零々墨2E8 弭? 婀mod引 隔p珊CAOp圳CAO TrealmentmodelTre采ment E‘o虬―t二――‘_9““-』―d。“。。L―u。jw__u二(_-4(-―,(。(。((-_--二_--(_----‘_-_“(‘‘4q*,“J*。4“g,‘_l 图6校止后的各组平均脑梗夕E体积 乙一„。。一。竺竺。„一一? 图7校正后的各组平均脑水肿体积 大鼠线栓法人腑中动脉闭塞模型改进的实验研究 讨论 讨 论 缺血性脑血管疾病 ICVD 是指各种原因所致脑动脉供血障碍而引起相应症状、 体征、病理生理和病理变化的一类疾病，为严重威胁现代人类健康的重大疾病，由于 其发病率高、致残率高，历来受到医学界重视。 缺血性脑血管病的细胞损伤是一个复杂的病理生理过程，包括缺血性的原发性损 伤和再灌期的继发性损伤。脑缺血后可导致神经细胞的变性、坏死，功能下降，血流 的再灌注一方面可挽救濒临梗死的细胞，另一方面又会加重细胞损伤，导致细胞死亡， 即再灌注损伤。大量动物实验及临床研究表明脑缺血及再灌注期间发生着复杂的病理 生理变化。脑缺血再灌注损伤是一个快速的级联反应，这个级联反应包括许多环节， 如线粒体损伤、兴奋性氨基酸毒性、钙超载、氧自由基大量生成、免疫炎症损伤、细 胞凋亡等。这些环节互为因果，彼此重叠，并相互联系，形成恶性循环，最终导致细 胞凋亡或坏死。 本实验用8周龄雄性SD大鼠成功建立了MCA0动物模型，对原有大鼠大脑中动脉闭 塞模型制备方法进行了改进，并用MK-801预处理进一步验证动物模型，为研究局灶性 脑缺血再灌注损伤的发病机制和治疗药物的研制打下基础。 一动物模型的选择及其可靠性 脑血管病是人类严重致残和死亡的重要原因之一，脑缺血实验动物是研究缺血性 脑血管病不可缺少的工具。大脑中动脉 MCA 是人群脑梗死的多发部位，MCAO模型 被普遍认为是局灶性脑缺血的标准动物模型。在实验动物上，多数学者更倾向于选用 大鼠复制脑缺血模型，主要由于:?大鼠脑血管解剖特点比较接近人类;?有关大 鼠生理、生化、形态及药理等方面的实验资料比较丰富，有利于进行研究和比较;? 价格低廉，可进行较大量重复实验;?纯种鼠属近亲交配，品种相对一致，脑血管 解剖和生理机能变异较小;?大脑体积小，有利于进行固定染色及病理组织学观察 f31 O 脑缺血再灌注的造模方法包括线栓法[41、光化学法【51、电凝法【6】等。本实验参照 Koizumi线栓法稍作改进制作MCAO局灶性脑缺血模型，此模型具备如下优点阴: 1 缺血部位恒定，回抽线可进行再灌注; 2 不需开颅，术中不会引起血压、体温等异 讨论 大鼠线栓法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 常变化，对全身影响相对较小; 3 能对缺血及再灌注时间进行准确控制，便于研究 有一定难度; 3 该模型实质上也是栓塞性卒中，与人群常见卒中存在差异。 该模型先阻断颈外动脉 ECA 及其分支，将栓线从颈外动脉插入，通过颈内动脉 到达大脑前动脉，从而阻塞大脑中动脉的开口处。拔出栓线后，血液可以通过大脑底 部的动脉环 willis环 从对侧颈总动脉到达缺血部位，恢复缺血部位的血流，即可实现 再灌注【踟。 栓线材质的选择及对其头端的具体处理是影响线栓法建模成败的关键所在。目前 用于局灶性脑缺血模型制备的线栓有多种，包括尼龙线、鼠须、钓鱼线等，制备要求 也各异，大多选用尼龙线。栓线直径的选择要根据动物大小而定，栓线直径需要和ICA 系统的内径相适应才能阻断ICA中栓线周围的血流，最大限度地阻断进入MCA的血 流。在尼龙线粗细方面，使用3-0尼龙线蛛网膜下腔出血 SAH 率明显高于4田尼龙线【91， 且阻断血流不完善。 在栓线头端处理方面，比较有代表??I雌Longatlo,等把4旬单股尼龙线头端加热使 之成为光滑球面，圆头直径稍大于尼龙线本身直径，并在距球面18mm处作标志; 圆头对内皮细胞刺激能引起血小板聚集和血栓形成，而且不易堵塞后交通动脉和穿通 动脉的血供，导致缺血和再灌注不完全;涂抹硅树脂后的尼龙线不易推进和顺利通过 颈静脉孔，而一旦通过能完全阻断血流，对脑血流阻断效应恒定，该法可胀紧血管， 即使尼龙线抽出，血管仍可维持一定的扩张状态。Laing对上述两种方法做了对比研 塞效果更好。 因石蜡具有价廉易得、化学性质稳定、不刺激血管壁且不与血液成分反应等优点( 我国常采用固体石蜡经加热熔化后涂敷线栓前端，将其头端制成光滑球体的方法自制 手术线栓。此制作方法简便，但在实际操作中栓线头端球体直径不易测量， 头端大小 不易控制，制备的脑缺血模型梗塞体积不恒定。显微镜下观察线栓头端常毛糙，易刺 破血管，造成SAH，致手术成功率低。 大鼠线栓法人肭中动脉闭塞模型改进的实验研究 讨论 始段; 2 其头端光滑，不易刺破血管; 3 线栓头端为硅胶包被的5-6mm圆柱体，易 堵塞后交通动脉和穿通动脉的血供，最大限度地阻断进入MCA的血流，脑血流阻断 效应恒定，致缺血和再灌注完全，脑梗死体积稳定。本实验所制MCAO模型成功率高， 梗阻面积大且稳定 国内各实验室所造MCAO模型脑梗死体积多为20,左右且不稳 定 ，拔线后及术后24小时死亡率低，这也反面印证了这种商品线头的优势，增加 了模型的可信性和科学性。 此外，Carswenll3】发现当雌激素水平增高时，缺血导致的脑损伤较轻，雌激素对 脑缺血有保护使用。常用的几种麻醉剂水合氯醛、苯巴比妥钠、乌拉坦都可使局灶性 脑缺血造模中大鼠的体温、呼吸、血气和酸碱度有明显影响。 由于线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型栓线入颅后的操作是非直视下进行 的，MCA血流阻断与否无法直接判断。因此，应根据神经功能缺损症状，按照评分参照 zea Longa等的方法，对各组大鼠进行神经行为学评分。评分标准为:0分， 无神经缺 损症状;1分，不能完全伸展对侧前爪;2分，出现同侧H咖er’S征，行走时向对侧转 圈;3分，站立不稳，向对侧倾倒;4分，不能自发行走，意识丧失。评分在l-3分的 大鼠认为模型制作成功，纳入实验分组。 本实验大鼠大脑中动脉阻断大约90min，甚至即刻出现同NHomer’S征阳性，瞳孔 缩小，眼球内陷，眼裂变小。缺血区对侧肢体肌张力下降，躯体对侧屈曲，提尾悬空 时呈强迫性体态，躯体向对侧扭转。 此外，还可通过术中脑电图监测判断阻塞成功与否，而Elsaesser研究发现术中出现 脑电波抑制较激光多普勒血流监测血流减少要晚5,10秒出现，故认为术中 双侧激光 多普勒血流监测对判断MCAO更敏感，更有效，当脑血流量降至缺血前基础值的 10,,20,即认为模型制备成功，且可以用来判断是否并发SAH。另外，组织学检查及 脑代谢测定也是判断模型成功的重要方法，局部脑缺血，最好取缺血和非缺血区进行平 行代谢测定。 用异氟崩02混合气体进行麻醉，大鼠采用雄性，以排除雌激素的干扰。 19 讨 论 人鼠线栓法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 二关于工具药的选择 虽因早期临床试验证实其可引起剂量相关性神经心理副作用而终止开发，MK一801 仍为目前临床前研究最为广泛的非竞争性NMDA受体拮抗剂，它与NMDA受体具有高亲和 力，与其结合后可产生长效阻断兴奋性氨基酸毒性的作用n4|，能显著改善局灶性脑缺 血模型的神经功能缺损症状并明显减小其脑梗死体积。脑缺血前或脑缺血后卜2小时 内给药效果明显，于MCAO造模前给予MK一801可减少模型神经元的死亡。体外实验亦证 实MK一801具有神经保护作用。 因此，本实验以MK-801为工具药，用MK(-801预处理进一步验证动物模型。 三脑缺血再灌注后大鼠神经行为学改变、病理变化及MK Ol的影响 1(神经行为学改变 缺血性脑血管疾病患者可出现严重的神经功能障碍，表现为对侧中枢性面舌瘫及 偏瘫、偏身感觉障碍和偏盲;可有不同程度的意识障碍;学习及记忆能力减退等。而 在局灶性脑缺血损伤大鼠也能观察到类似的症状，出现同 贝rJHomer’S征;提尾悬拉后 出现对侧上肢蜷缩屈曲;下地不能直行，向对侧转圈跌倒。目前对脑缺血再灌注损伤 大鼠神经行为学的评分多采用Bederson和Zea Longa的5分制法，这种分级评分与梗死 体积大小及手术后脑血流改变有较好的一致性，不仅是模型成功的判断标准，且反映 了模型病理生理发生发展的过程，为观察药物的疗效提供了有力的佐证。应用于缺血 性脑血管病的药物若能改善此方面的功能障碍，就能真正用于脑缺血的预防和治疗。 我们在实验中对各组大鼠进行了神经行为学评分，观察至 JMCAO模型大鼠出现严 重的神经功能障碍，证明模型是成功的。而治疗组能一定程度上改善脑缺血大鼠的神 经功能障碍，说明MK-801具有较好的脑缺血损伤保护作用。 2(脑组织病理学改变 脑水肿和脑梗死是脑缺血损伤后主要病理改变。脑水肿包括细胞毒性 cytotoxic 注后可继续加重，主要由于急性缺血缺氧，脑细胞能量代谢障碍，ATP生成减少，依 赖ATP供能的钠泵活动减弱，脑细胞内大量Ca2+、Na+和水储留，脑细胞肿胀。当缺 血进一步加重，至再灌注损伤，脑血管内皮细胞及基底膜损伤，血脑屏障 BBB 受损， 脑毛细血管通透性增加，脑细胞外液增加，造成间质性脑水肿，即血管源性脑水肿【161 和脑梗死。脑水肿和脑肿胀使脑体积增加致颅内高压。颅内压升高，脑血流灌注进一 人鼠线栓法人脯中动脉闭采模型改进的实验研究 讨论 步减少，受损脑细胞向不可逆方向转化。 大鼠脑缺血再灌注24h后，对大鼠脑组织行染色。TTC是一种水溶性盐，其染色 方法是一种用于评价组织内脱氢酶活性的大体标本染色方法，TTC能与完整的线粒体 氧化酶系统发生反应而降解成深红色，使讵常组织染色，缺血腩组织的线粒体损伤、 酶系失活，不能发生染色反应。，不C染色是评价脑梗死体积最重要的客观指标之一， 有助于脑梗死体积的测定。很多学者采用TTC染色标记脑组织缺血性损伤，计算脑梗 死灶体积。本实验应用该方法能界线清楚地区分正常脑组织和梗死脑组织，从而直接 反映大鼠MCAO损伤程度。我们在实验中观察到瓜治疗组与IR模型组相比较，其脑梗 死体积明显减少，说明MK-801干预治疗有效，增加了模型的可信性。 血管即使在有效的时问窗内再通，缺血再灌注损伤也是难以避免的问题。脑血管 病发病后动物研究证实，海马、纹状体、大脑和小脑皮层对缺血很敏感，缺 血后发生 neuronal 延迟性神经元死亡 delayeddeath，DND ，其主要机制为细胞凋亡。海马在 缺血具有选择性敏感，即使短暂的脑缺血也可造成DND，所以海马区成为缺血性脑 损伤研究的一个典型脑区。本实验即选择海马区作为焦油紫染色的检测部位，观察到 见明显病理改变。 ’ 四脑缺血再灌注后炎性细胞因子TNF―Q变化及MK书01的影响 缺血再灌注损伤是由多种原因引起的复杂病理生理过程，而脑缺血后强烈的炎症 反应是导致脑细胞损伤的重要病理环节。脑缺血再灌注过程中，缺血区血管内的炎症 细胞聚集增加并浸润到脑实质，内皮细胞、神经胶质细胞被激活，释放增加的炎性细 胞因子更被认为是脑缺血再灌注损伤发病机制中的关键介质。这些炎性细胞因子不是 单独发挥神经毒性作用，而是通过相互影响，互为因果，促进了缺血性损伤向炎症性 损伤转变，最终导致神经元死亡。 参与脑缺血再灌注损伤炎症反应的细胞因子众多，TNF―Q是其中相对重要的炎 症细胞因子i17】，其在脑中发挥着双重作用‘181。生理状态下，脑内含有少量的TNF―Q， 浓度较低，对机体起一定得保护作用，参与机体免疫反应，促进组织修复等。而缺血 及再灌注损伤时大量炎性细胞被激活，血及脑组织中TNF―Q含量明显升高。它作为 趋化因子，促使白细胞由血管内向缺血区脑组织迁移，使脑组织损伤加重【191。 21 讨论 人鼠线栓法大脑中动脉闭塞模型改进的实验研究 TNF―Q是被激活的巨噬细胞分泌的一种细胞因子【20】。脑缺血再灌注后TNF―Q的 表达具有损伤、保护及修复多重作用，但因神经元的不可再生性，故其损害作用更为 明显。在脑缺血早期，TNF―Q分泌或合成增加是脑梗死形成的主要原因。TNF―Q可 进自细胞在微血管黏附聚集，导致微血管迟发性低灌注，并对毛细血管内皮 细胞有直 接毒性作用[22,23】，参与神经元损伤;同时可以诱导强效的血管活性物质释放，导致脑 血管收缩【24】，降低局部血流量，并可通过刺激明胶酶B的产生，升高毛细血管通透性， 进一步加重血脑屏障功能障碍，促进脑缺血及水肿的发生;能够诱导敏感细胞发生以 细胞肿胀、溶解为特征的坏死[25】，以细胞核破裂、细胞器皱缩为特征的凋亡【硐。 TNF―Q过表达介导了脑缺血再灌注的炎症反应和一系列与之相关的兴奋性氨基 酸毒性、氧自由基、酸中毒等反应，这些物质共同作用的后果引起或加重脑组织损伤、 神经细胞坏死或凋亡【271。 本实验采用酶联免疫吸附法测定了脑中TNF―Q的含量，研究显示，大鼠脑缺血 再灌注后，脑中TNF―Q水平明显升高。而预先给予MK-801可显著降低其水平，提示 MK-801可通过影响炎症因子TNF―Q在脑缺血再灌注时的炎症反应过程而发挥抗脑 缺血损伤的作用。 综上所述，本实验所采用的实验动物、试剂及手术方法合理，能成功建立MCAO 动物模型，该模型无论是临床表现，还是病理特征都与文献报道的MCAO发病动物的 神经系统的病理变化相一致，该模型的建立方法可靠、方便，成功率高，可以用来进 行脑缺血及再灌注损伤发病机制的研究。本论文用MK-801预处理进一步验证动物模 型，探讨了MK-801对缺血及再灌注损伤过程中神经行为学改变、病理变化及炎症反 应的影响。研究发现，MK_801能改善脑缺血大鼠的神经功能障碍，减轻缺血区的脑 梗死，并减少炎症因子TNF―Q的产生，具有较好的改善脑缺血再灌注损伤的作用。 讨 大鼠线栓法人肭中动脉闭寨模型改进的实验研究 结 论 1(本实验建立的大鼠模型在临床表现、病理变化方面符合MCAO的表现，模型 稳定、可靠，是研究脑缺血再灌注损伤的理想动物模型。 2(MK-801能改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能障碍，减轻缺血区的脑 梗死，并 减少炎症因子TNF―a的产生，具有明显的改善脑缺血再灌注损伤的作用。 学(2004;12 4 :409-11( Wen a1(A modeloffocal M，GressensP，et 【4】 TC，Rogido reproducibleexperimental cerebralischemiaintheneonatal rat[J](BrainResProtoc(2004; 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Key artery Rats 缺血性脑血管病 ischemiacerebral--vascular disease，ICVD 是严重威胁现代 人类 健康的重大疾病，对其研究离不开动物模型。制备局灶性脑缺血模型的方法 有多种， 传统的有经颞下或经眶入路央闭或电凝大脑中动脉 MCA “1，光化学诱导血栓形成乜3 cerebral 创用了线栓法大脑中动脉闭塞 middle occlusion，MCAO 模型，该模型的 artery 综述 大鼠线栓法大脯中动脉闭塞模型改进的实验研究 病理改变同人类脑卒中相类似，且具有不开颅、效果肯定、可控制缺血与再灌注时间 的特剧51，被广泛应用于实验性脑缺血的研究。线栓法自创建以来被国内外学者不断 研究，对动物选择，栓线制备，插入深度和操作过程等各个环节和实验处理 因素的认 识都得到发展和改进。本文就近年来MCAO模型方面的研究进展综述如下: 1动物的选择 1(1动物品系 在制作模型的动物选择上，小鼠、大鼠、蒙古沙土鼠、猫、狗嘲、兔171、猪‘81、 羊以及灵长类动物猕猴【9】等可成功制备MCAO，但不同种属或同一种属不同品系动物 的敏感性有较大差异。但由于灵长类动物猕猴等动物资源有限，该模型的应用受到限 制。沙土鼠的颈动脉与椎基底动脉系统之间缺乏应有的交通动脉，其脑缺血模型操作 简单，但其与人类差异较大，且由于沙土鼠太小而无法进行一些指标的测定。因大鼠 具有成本低、种系纯合性好、便于进行统计学对比分析，与人类有类似的脑血管解剖 特点 具有完整的willis环 等优点，所以应用最为广泛。此外，它的抗感染能力较强， 生命力也强，实验中动物感染率较少，存活时间相对较长。 不同品系动物的MCAO在生化改变、病理及临床表现等方面都不尽相同。故应按 不同的实验目的选择不同品系的动物。Mark铲a肖‘101在实验中发现，在不同的大鼠品 效果居于二者之间。因此，以Fischer-344大鼠的模型效果最为理想，但因鼠源问题，目 前应用较少。SD大鼠MCAO后，梗死体积较大，较恒定，且较温和，生长快，价格便宜，故用 正常大鼠进行实验时一般常用SD大鼠【l?。 考虑卒中病人常有高血压危险因素，实验时高血压大鼠常被选用。卒中倾向大鼠 其繁殖不易，价格昂贵，缺血部位、形态特征和病理演变与正常血压大鼠差异较大， 有时药物治疗研究无效也不能排除正常血压大鼠治疗有效的实验结论。因其脑组织病 理检查中，脑出血多于脑栓塞，基底节受损较轻，脑梗塞周围缺血区明显，侧支循环 的建立更接近人脑卒中，所以该模型具有独特的实验用途，可能更适合于脑出血和高 血压脑动脉硬化的研究。 1(2鼠龄 人鼠线栓法大腩中动脉闭塞模型改进的实验研究 综述 在鼠龄选择上，研究者们为了模拟人类脑血管疾病的发病过程，往往期望选用老 龄大鼠作为研究对象，但由于老龄大鼠的MCA发生了不同程度的迂曲、粥样硬化、管 腔狭窄等解剖及病理上的改变，而且MCA管腔的粗细与常规栓线 4-0尼龙单丝线 的规 格不相匹配，且老年鼠本身耐受性差，实验时问长，动物死亡率高，模型制作重复性