两种革兰氏阳性杆菌染色体DNA提取方法简介

两种革兰氏阳性杆菌染色体DNA提取方法简介 两种革兰氏阳性杆菌染色体DNA提取方法 简介 荤星f马两毛峰挞 庆病监测1999年第l4卷第3期 统疾病;其死者分别占死亡总数的30,67%, 28.28%,l5.42%,7.20%和3.42%.而农 村的则为心血管疾病,呼吸系统疾病,肿瘤, 意外死亡和未明原因死亡;其死者分别占死 亡总数的35.74%,l8.06%,l7.71%, 8.40%和485%. 1991,1997年死于前三位死因者占总 死亡数的72.1%,城市点占总死亡效的 74.4%,农村点为71.5%,也就是说不论城 市或农村,前三位死因的死亡数都超过总死 亡效的70%.如果城市点和农村点年平均 死亡率分死因做一比较,肿瘤,意外死亡,未 明原因死亡和感染性疾病差异显着,其余则 差异不显着. 各个年龄组的主要死亡原因又不甚相 同,新生儿的前三位死因为呼吸系统疾病,感 染性疾病和围产期的呼吸窘迫综合症;青少 年则是意外死亡,呼吸系统疾病和感染性疾 病,值得注意的是,青少年死于恶性肿瘤有增 加的趋势;而老年人则主要是心血管疾病,恶 性肿瘤和感染性疾病.这提示我们应该根据 不同的年龄构成采取不同的防病和治疗措 施,才能有的放失,达到事半功倍的效果. 讨论与小结 本文显示:年龄组的死亡率差别显 109 着,0一岁组和60岁以上人群是死亡高危人 群,各个年龄组的主要死因又各不相同.城 市的平均死亡率虽略高于农村,但没有明显 的区别,其原因是多方面的,城市人群物质, 文化生活发达,普遍受教育程度高,自我保健 意识强,社会卫生服务健全,但较农村污染严 重,社会压力大,精神负担重等.七年来,死 因的前三位一直是心血管疾病,恶性肿瘤和 呼吸系统疾病,传染性疾病的死亡率随着国 民经济的发展,社会卫生服务水平的提高逐 渐下降,意外死亡则趋于上升.未明原因死 亡率排位较靠前,其原因值得进一步研究 来来30,40年,中国中老年人口将分别 增加2,3倍.逐渐向老龄化社会过渡,患慢 性病的总数将比现在多得多,并且随着经济 发展,教育以及社会组织的完善,城市化,工 业化逐渐形成,人群中出生率下降.慢性病, 性传播疾病,意外伤害逐渐成为危害人类健 康的主要卫生问,因此应开展死亡监测特 别是慢性病的监测和防治,加强老年医疗卫 生保健服务,使之成为预防保健的重点. 参考文献 1柬扬.王燕,邓颖.四川省疾病监测点1992,1996年死因 动态分析疾病监j嘲,1998?13(7):266 (1998年9月17日收稿,12月24日仕定) ' 两种革兰氏阳性杆菌染色体DNA提取方法简介 粱旭东蔡洪涛忠福陈卫民z』,.d 为了能够快速,高产量的获得革兰氏阳 性杆菌染色体DNA,我们获得了美国路易斯 安娜卅l立大学Mart~n.Hugh—Jones教授和 J中国预防医学科学院漉行病学微生物学研究所 (J0221~-) 2内蒙古兴安盟乌兰浩特市卫生防痤站 美国宾西法尼亚州立大学Joe.shaw博士的 帮助,向我们提供了他们各自实验室用于制 备革兰氏阳性杆菌染色体DNA的方法.我 们在实验室应用这两种方法均获得了满意的 革兰氏阳性杆菌染色体DNA.现将两种方 法介绍如下. ? l10? 1.菌株:炭疽杆菌84株,蜡样杆菌16 株,苏云金杆菌2株,枯草杆菌2株. 2.主要试剂:蛋白酶K,十六烷基三甲基 溴化铵,RNaSeA购自华美生物公司. 3.方法;1)从40mlLB培养基中收集菌 悬液,用100%的无水乙醇洗涤一次弃上清 液.加入8.5mlTE垂悬细菌沉淀物.放置在 液氮中完全冻结,再转至65?水浴中完全融 化.重复3次,加入450m110%sDs溶液,45ul 蛋白酶K溶液(20mg/m1)彻底混匀置42? 温育1小时.加入1.5ml5MNaCI溶液充分 混匀,加入1.4ml含lO%十六烷基三甲基溴 化铵的0.7MNaC1溶液充分混匀,置65?水 浴中孵育30分钟,加入等体积的酚,酚一氯 仿,氯仿各抽提1次,上清液加入2倍体积的 冷无水乙醇沉淀,离心沉淀DNA,自然干燥 后用200ul三蒸水溶解,置一20?备用. 2)在LB肉汤培养基中振汤培养细菌l2 , l6小时,收集3ml细菌培养物,用0.85% 的NaCl溶液洗涤细菌沉淀物1次,加400ul 蔗糖溶液(6.7%).40ul溶菌酶(10mg/m1), 1OulRNaSeA(10ma/m1).混匀置37?孵育 30~45分钟,加100ulSDS溶液(10%),充分 混匀置37?裂解30分钟,加10ul蛋白酶K 溶液(20ma/m1),充分混匀置65?孵育3O分 钟,用等体积的酚和氯仿(1:1)抽提2,3次. 上清液加1/10体积的3M醋酸钠和2.5倍 体积的冷乙醇沉淀,离心沉淀DNA,自然干 燥后用100ul三蒸水溶解置一20?备用. 上述两种方法均能够获得较为理想的革 兰氏阳性杆菌染色体DNA. 一 起炭疽病暴发的调查报告 贵州省开阳县卫生防疫站(550300)车代铭李太尧 1997年8月24日贵州省开阳县米坪多 大坝村发生了一起炭疽病暴发流行,发病率 3.8%(12/312),病死率8.3%(1/12). 米坪多1993年以前曾发生过散在炭疽 病.1997年7月31日米坪多大坝村村民李 某途经高岩村发现一匹死马骨头,拖回家中 放在猪,牛圈处,煮骨头汤喂猪.1997年8 月3日李某猪,牛死亡.立即请7人杀猪剖牛 食用和销售,由于在解剖途中.李某未洗手就 拿西红柿吃.8月4日发病(主要现手,背, 胸部出现疱疹和胃肠遭症状).8月lO,18 日又发病4例,8月21--25日再发病4例,9 月5日1例,9月儿,13日2例.共l2例,死 亡l例(李某1997年8月20日死亡).发病 最小年龄5岁,最大58岁,l8,50岁发病9 例,占75%.除1例患者是幼儿外,其余u 例都是农民.男发病9例,女3例.12例炭 疽病中皮肤型u例,占91.6%.混合型(肠 道和皮肤型并存)1例,占8.4%.Ascolis试 验均呈阳性. 疫情发生后.通过防疫和兽医部门采取 综合性防制措施,控制了疫情的扩展.在医学 观察l5天后未发生新病人和新病畜.