泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究

泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单 位疫苗免疫效果的研究 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取 得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或 集体,均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意 学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允 许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制 手段保存论文和汇编本学位论文,同时授权中国科学技术信息研究所将 本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并向社会公众提供信 息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名: 导 师签名: 日 期:符号说明 英文缩写 英文全称 中文名称泰山松花粉多糖 外膜蛋白 自然杀伤细胞 细胞毒细胞? 淋巴因子激活的杀伤细胞干扰素 ? 抗体依赖性细胞介导的细 胞毒活性 新城疫病毒 丙二醛脂质过氧化物 ? 型单胺氧化酶超氧化物歧化酶 . 谷胱甘肽过氧化物酶血尿素氮 线性吸收系数 . 粒细胞巨噬细胞集落形成 单位 . 红细胞集落生成单位? . 成纤维细胞集落生成单位 ? 嗜多染红细胞群体信息感应 集落刺激因子 脂磷壁酸 完整肽聚糖肽聚糖 型凝集素受体 样受体样受体 嗜酸乳杆菌 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰 . 胺凝胶电泳 血凝试验 姒国际单位 ? 免疫球蛋白 伴刀豆球蛋白 ‰ 噻唑兰 姗 碘化丙啶 小时 .口 分钟 天 克微克 烬 转/分钟 呷毫升 微升 目 录 中文摘要 ......?.....?...?.??....?.?..??...?.??........?..?......?....??.. ....?..?..?........ .引言??.. .多糖的研究进展?. ,.多糖的主要种类一 ..多糖的生物学活性..多糖的开发应用 .松花粉多糖的研究进展? .乳酸杆菌的研究进展..乳酸杆菌的生物学功能 ..乳酸杆菌在畜牧业上的应用??..本试验的目的意义 .材料与, .试验材料? ..菌种和病毒..试验动物 ..主要化学试剂? ..主要仪器 .方法?.. ..泰山松花粉多糖的提取 ..禽波氏杆菌亚单位疫苗的制备. ..松花粉多糖和乳酸杆菌协同对禽波氏杆菌亚单位疫苗的免疫增强作用? ..松花粉多糖对乳酸杆菌生长的影响一 ..松花粉多糖和乳酸杆菌抗病毒试验一 ..松花粉多糖和乳酸杆菌对小鼠淋巴细胞增殖的影响??一 ..松花粉多糖和乳酸杆菌培养液对.的影响??. ..松花粉多糖和乳酸杆菌对小鼠免疫功能的影响?一 .结果与分析..松花粉多糖和乳酸杆菌对禽波氏杆菌亚单位疫苗的免疫增强 作用? ..血清抗体水平的变化? ..小肠内含量变化. ..血清.水平的变化? ..外周血淋巴细胞比率变化??. ..外周血淋巴细胞转化率变化? .松花粉多糖对乳酸杆菌生长的影响结果 .松花粉多糖和乳酸杆菌抗病毒试验结果 .松花粉多糖和乳酸杆菌对淋巴细胞增殖以及分泌.的影响结果一 .松花粉多糖和乳酸杆菌对小鼠免疫功能的影响 ..血清抗体效价的变化? ..小鼠小肠内含量的变化? ..小鼠淋巴细胞转化率的变化? ..小鼠血清.含量的变化.讨论??. .泰山松花粉多糖和乳酸杆菌对禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫增强作用 .松花粉多糖对乳酸杆菌生长的影响及抗病毒作用的研究?一 .松花粉多糖和乳酸杆菌对小鼠免疫功能的影响 结 论??一 参考文献??一 致 谢??一 个人简介??.. 攻读硕士学位期间发表的论文??..山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 松花粉多糖具有非常高的营养价值和免疫增强作用。松花粉多糖与某些化学合成 的免疫调节剂相比,具有来源广泛、毒副作用低、无致癌作用、安全性高等众多优点。 乳酸杆菌是世界公认的应用最早,应用历史最长的微生物添加剂,也是动物肠道的优势 菌群之一,众多研究表明它具有改善机体代谢、促进肠道有益菌增殖、抑制有害菌生长 和增强机体免疫等作用。随着抗生素所产生的一系列问逐渐得到人们的关注和重视, 研究新型安全、有效的免疫增强剂成为畜牧业发展的需要。松花粉多糖和乳酸杆菌均有 一定的免疫增强作用,但对二者的共同研究国内外未有报道。本试验从本实验室保存的 禽波氏杆菌菌株中筛选出交叉免疫性好同时毒力强的株作为疫苗用菌株,采用超声波 破碎、一处理技术提取了禽波氏杆菌,然后用方法测定禽波氏杆 菌含量,进行.检测。同时用水提醇沉法提取松花粉多糖,最后采取一定 加工工艺配制松花粉多糖含量为/,禽波氏杆菌含量为/的亚单位疫 苗和不含松花粉多糖的禽波氏杆菌亚单位疫苗,将制备好的疫苗进行无菌检验和安全性 检验。 第一部分泰山松花粉多糖和乳酸杆菌对禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫 增强的协同作用 为了研究泰山松花粉多糖和乳酸杆菌对禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫力的影响, 取日龄雏鸡只,随机分为组,~组分别免疫含有松花粉多糖/的禽 波氏杆菌亚单位疫苗,组只免疫禽波氏杆菌亚单位疫苗,、组在前两周 分别口服高、低剂量的乳酸杆菌活菌菌液, 、分别口服高、低剂量的乳酸杆菌 热灭活菌菌液。在首免后,每周采取血液和小肠,用间接法检测血清抗体水 平、法检测外周血淋巴细胞转化率、全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞比 率、法检测小肠含量和.水平。结果表明,~?组抗体水平、一含量、 淋巴细胞比率、淋巴细胞转化率、含量显著高于.幺、组.;组各检测 指标显著高于?组.;乳酸杆菌活菌组各检测指标比灭活菌组略高,高剂量组 略高于低剂量组。因此,泰山松花粉多糖作为免疫佐剂能显著提高疫苗的免疫效果,同泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 时:服乳酸杆菌能进一步增强动物对疫苗的免疫应答能力,乳酸杆菌活菌比热灭活菌、 高剂量组比低剂量组免疫增强效果好,但差异均不显著。由此得出,泰山松花粉多糖和 乳酸杆菌对增强禽波氏杆菌疫苗的免疫力有协同作用。 第二部分松花粉多糖对乳酸杆菌生长的影响及抗病毒作用的研究 用提取的松花粉多糖配制不同浓度液体培养基,将相同剂量乳酸杆菌在不同浓度松 花粉培养液中培养,分别测定在、 和稀释 倍后含不同浓度松花粉多糖的细菌 培养液和对照组细菌培养液在波长处的吸光度值,计算各培养基吸光度增加值 ,结果表明松花粉多糖能促进乳酸杆菌的生长,而且浓度为/时效果最好。 用鸡胚接种法检测松花粉多糖、二者共同培养液滤菌之后不同作用时间对新城疫病 毒的抑制作用,结果显示,松花粉多糖和乳酸杆菌共同培养发酵组血凝价低于松花粉多 糖单独刺激组,两组的血凝价均低于病毒对照组,且均随作用时间的延长而降低。 第三部分松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强小鼠免疫功能的研究 为了研究口服乳酸杆菌和泰山松花粉多糖对小鼠免疫功能的影响,本研究通过体 外试验测定不同浓度的松花粉多糖对乳酸杆菌的体外生长的影响,选取效果最好的浓度 /共同培养,用二者共同培养液 的松花粉多糖/与乳酸杆菌 刺激小鼠淋巴细胞,观察淋巴细胞的增殖和.的分泌情况;然后体内试验选取清洁级 昆明小鼠雌性只,随机分为组~,在试验的前两周,组灌喂定量乳 酸杆菌;组灌喂定量乳酸杆菌和泰山松花粉多糖;组灌喂定量泰山松花粉多糖;? 组为对照组。试验的第天,各组均注射禽波氏杆菌亚单位疫苗。在免疫后,每 周采取血液和小肠,用间接法检测血清抗体、全自动血细胞分析仪测定外周血 淋巴细胞比率,法检测小肠含量和血清.含量。结果表明,松花粉多 糖和乳酸杆菌培养液具有促进小鼠淋巴细胞的增殖和的分泌的作用,而且二者共同 培养液效果最显著.:体内试验证明,在大部分检测时间点,、、组的 各指标均显著高于组对照组.,组的各指标显著高于、?组.。 结合体内和体外试验,可见乳酸杆菌和泰山松花粉多糖对提高小鼠的免疫功能有协同作 用。 关键词:泰山松花粉多糖;乳酸杆菌;协同;禽波氏杆菌;;免疫增强 山东农业大学硕士学位论文, . , , , .,. , , , . , ’ . , . .,一 . ?. ., / . ./ .: . . ? . , ,,, ./, ..,? 泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫西免疫效果的研 冗 . , . ,, . . ,, .; .; . , .,, , 优. . . . , .. ,, /. .. , , ? . ,. .山东农业大学硕士学位论文 .., ., . , , , ,, . .. ,一. , , , , ,.. , , ., .. .: ;;;.;;泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单 位疫苗免疫效果的研究 .引言 .多糖的研究进展 多糖是由糖苷键结合的糖链,至少要超过个以上的单糖 组成的聚合糖高分子碳水化合物,不同类型的多糖不仅所含的单糖种类不同, 而 且聚合程度、糖苷键的性质、链的构象也不同。多糖是来自高等植物、动物 细胞 膜、微生物细胞壁中的一类天然大分子物质,几乎存在于所有有机体中,是天然 化合物中最大族之一。人们对多糖的研究已有上百年的历史,美国、日本、欧盟 对多糖的研究较早。近些年来,随着提取多糖的方法和技术的不断提高,各国越 来越多的学者从各种生物体中提取了大量的生物活性多糖,它们在各个领域得到 很好的利用。 ..多糖的主要种类 多糖按在生物体内的功能分为两类:一类为不溶于水的,主要是形成动植物 的支持组织,如纤维素,分子呈直糖链型;另一类为动植物的贮藏养料,溶于热 水成胶体溶液,借酶水解释放单糖以供应能量,如淀粉、菊糖等。有直链型分子, 但多数是支糖链分子。同时,有一种单糖组成的均多糖较多,由多种单糖组成的 杂多糖中往往根据单糖的种类程度,进行着相同结构单位的重复。多糖又可分为 植物多糖、动物多糖和微生物多糖。 ...植物多糖 纤维素 纤维素是植物细胞壁的组成部分,为直链葡聚糖,分子结构成直线型。分子 量为万左右,大概?个分子的葡聚糖缩合而成。不易被稀酸和碱分解, 由于分子量大,不溶于水和有机溶剂。纤维素是地球上最古老、最丰富的天然高 分子,是人类最宝贵的天然可再生资源。纤维素的化学和工业研究开始于多 年前,是高分子化学诞生及发展的主要研究对象,可作为纸类、衣料纤维、可塑 剂等的制造原料。纤维素主要生理功能是吸附水分,增加粪便量,促进肠蠕动, 从而加快粪便的排泄,减少对肠道的不良刺激,可预防肠癌发生。 淀粉’ 山东农业大学硕士学位论文 淀粉是日常生活中常见的物质,中草药中也普遍存在,尤其种子、果实和某 些根类中含量较高。淀粉有直链的糖淀粉和支链的胶淀粉 之分。糖淀粉以一连接的.葡萄吡喃聚糖,聚合度为.,可溶于热水成 澄清溶液;胶淀粉聚合度为左右,也是一葡聚糖,但有一的分支链, 不溶于冷水,溶于热水成粘胶状。在淀粉中二者的含量比约为:~。淀粉虽然 没有显著的疗效,但是是一类有价值的营养物质。淀粉除了食用价值外,还被用 于制印花浆、纸张的上胶、药物片剂的压制等。 果聚糖 高等植物含有的养料中,除了淀粉外,葡聚糖含量也较多。果聚糖不能被人 体消化吸收,因为人体内没有分解果聚糖的酶,但是果聚糖进去结肠后能成为有 益菌的营养物质。果聚糖还能刺激增强细胞、巨噬细胞等免疫细胞的吞噬活性, 刺激释放白介素,增强机体防御有害物质的能力,从而提高机体免疫力。菊糖 是果聚糖的一种,又称“菊粉”,菊科植物中最为多见,是一种储备性 多糖。菊糖是一种颗粒状结晶体,在潮湿的空气中有潮解性,可溶于热水,微溶 于冷水和有机溶剂,可作为果糖的制造原料。菊粉是一种新型的饲料添加剂,值 得在畜牧业中开发利用。 半纤维素 半纤维素、纤维素和木质素共同组成植物的支持组织.细胞壁。半纤维素是不 溶于水而溶于稀碱%~%的酸性多糖。包括木糖、甘露糖 、半乳糖等,也包括含两种以上糖的杂多糖,如葡萄甘 露聚糖、半乳甘露聚糖等。半纤维素可发酵酒精, 这是利用生物技术由可再生的植物纤维原料制取酒精,这一直是国际关注的研究 热点。木糖可用来制木糖醇,还可用作增甜剂、增稠剂、表面活性剂等。 植物树胶和粘液质 树胶是植物受伤害或毒菌类侵袭后分泌的物质,干后形成半透明的块状物。 粘液质是植物种子、果实根、茎和海藻中存在的一类多糖,油滑不成冻状,是保 持植物水分的基本物质。例如车前子中的粘液质车前子聚糖。 果胶质 果胶质根据其成分和理化性质可分为果胶酸、果胶和原果胶。果胶酸多存在 泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 于果实、根中。果胶酸是组成果胶质的物质成分之一,是以钙盐或镁盐的形态构 成细胞壁中胶层的主要成分;果胶是是植物中的一种酸性多糖物质:原果胶非水 溶性果胶质,含于植物的细胞壁中。而这几种物质,也可以转化的,羧基完全去 甲酯化的果胶称果胶酸,原果胶经果胶酶处理可变为果胶。果胶质具有止泻的作 用。 ...动物多糖 糖原 糖原是动物体内贮存的一种多糖,又称为动物淀粉。主要存在于肝脏和肌肉 中,因此有肝糖原和肌糖原之分。糖原在体内的贮存有重要意义,肌糖原分解为 肌肉自身收缩供给能量,肝糖原分解主要维持血糖浓度。当血液中葡萄糖含 量增 高时,多余的葡萄糖就转变成糖原贮存于肝脏中,当血液中葡萄糖含量降低时, 肝糖原就分解为葡萄糖进入血液中,以保持血液中葡萄糖的一定含量。糖原是无 定形粉末,溶于热水,溶解后呈胶体溶液。糖原溶液遇碘呈紫红色。糖原水解的 最终产物是葡萄糖。 甲壳素 甲壳素又名甲壳质、壳聚糖,甲壳素由.乙酰葡萄糖胺以.连接的直链状 结构,是一种化学结构与纤维类似的高分子多糖。自然界中,甲壳素广泛存在于 甲壳素又名甲壳质、壳聚糖,它广泛存在于昆虫、甲壳类动物的硬壳以及菌类的 细胞壁中,其每年生物合成的资源量高达亿吨,是地球上仅次于植物纤维的 第二大生物资源,其中海洋生物的生成量在亿吨以上,可以说是一种用之不竭 的生物资源。化学性质非常稳定,不溶于水,也不溶于一般的有机溶剂和酸碱, 应用有限。甲壳素经浓碱高温处理,脱去分子中的乙酰氨基就可以转化为可溶性 甲壳素或称壳聚糖。这时它的溶解性大为改善,因而其在工业、农业、医药、 化 妆品、环境保护、水处理等领域有极其广泛的用途。 肝素 肝素是高度硫酸酯化的右旋多糖与蛋白质结合。肝素存在于动物的肝、肺、 血管壁、肌肉和肠粘膜等部位。因最初在肝中发现,所以叫做肝素。肝素是凝血 酶的对抗物质,能使凝血酶失去作用,因而血液在体内的不致凝固。临床利用肝 素抗凝血的作用,用肝素钠盐预防或治疗血栓的形成,还有消除血液中脂质的作山东农业大学硕士学位论文 用。肝素可与类固醇类药物合用治疗肿瘤,还可用于放疗综合征、肿瘤并发症的 治疗。肝素与肥大细胞的关系、肝素抑制白细胞粘附于血管内皮及其随后向组织 的迁移等方面表明,肝素对炎症的作用机制是有影响的 硫酸软骨素 作为软骨的主成分主要存在与结缔组织中,保持组织的水份和弹性。硫酸软 骨素是酸性黏多糖。白色粉末,无臭,无味,易吸湿,易溶于水,不溶于乙醇和 丙酮等有机溶剂,遇水即膨胀或成黏浆,对热较不稳定。它具有澄清脂质,提高 机体解毒功能,利尿和镇痛等作用。己知的有、、三种。近年来在临床上用 硫酸软骨素治疗肾炎、急慢性肝炎、细胞赋活、角膜保护、偏头痛、动脉硬 化及 冠心病等。 透明质酸 透明质酸与蛋白质结合,存在于眼球玻璃体、关节液、角膜及脐带中,结缔 组织中也含有。它与水形成粘稠凝胶,有润滑和保护细胞的作用。透明质酸的水 溶液具有高度粘性,它可被透明质酸酶水解而降低其粘性。透明质酸还是皮肤和 其它组织中广泛存在的天然生物分子,具有极好的保湿作用,被国际上称为理想 的天然保湿因子,它是目前自然界中发现的化妆品用保湿性能最好的物质。 硫酸角质素 又称硫酸角质与蛋白质形成结合体存在于哺乳类的角膜、椎间板、软骨和动 脉中,也就是以蛋白多糖的形式存在的一种粘多糖。在多数情况下和硫酸软骨素 共存,也有时两者只有一个蛋白质部分。在胎儿期软骨的蛋白多糖中几乎不含有 硫酸角质素,但随着年龄增加其含量渐增,这可作为动物结缔组织伴随年龄发生 变化的例证。 ...微生物多糖 微生物多糖可由许多细菌和真菌产生。根据多糖在微生物细胞中的位置,可 分为胞内多糖、胞壁多糖和胞外多糖。其中胞外多糖由于产生量大,且易与菌体 分离,而得到广泛关注。微生物多糖有着独特的药物疗效和独特的理化特性,使 其成为新药物的重要来源,并被作为稳定剂、胶凝剂、增稠剂、成膜剂、乳化剂、 悬浮剂和润滑剂等广泛应用于石油、化工、食品和制药等各个行业。近几年,世 界上微生物多糖的产量年增长率在%以上。例如黄原胶、结冷胶、热凝多糖、、 泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 小核菌葡聚糖、短梗霉多糖等,由于它们具有粘着性、稳定性、凝胶性、乳化性 等特点,被广泛应用于食品行业作为食品添加剂、凝结剂、保鲜剂等。在医药领 域得到广泛应用研究的微生物多糖主要是真菌多糖,大多数真菌多糖具有抗肿瘤、 免疫调节、抗衰老、抗感染等生物学功能。目前用于石油开采的微生物多糖主要 有黄原胶、酸性胞外多糖与胞外多糖等,其中尤以黄原胶在油田的 应用最为引入注目。 ..多糖的生物学活性 ...调节免疫功能 随着现代科技不断进步,医学、微生物学及分子生物学的快速发展,人们对 免疫系统的研究和认识更加深入。机体的免疫系统如果发生紊乱,会导致多种疾 病的发生。目前研究表明,多糖的免疫调节作用主要是通过激活巨噬细胞吞噬能 力;促进和淋巴细胞的产生;增强、细胞的活性;通过不同途径激活网 状内皮系统和补体系统;促进干扰素、白细胞介素等细胞因子的生成等这些途径 来完成的。例如孙振红等研究发现芦荟多糖能促进鸡淋巴细胞的增殖, 提高雏鸡体液和细胞免疫;等报道燕麦葡聚糖可促进体外培养的 小鼠腹腔巨噬细胞分泌一,并呈剂量和时间依赖关系,同时还能促进脾脏淋巴细 胞分泌.、.丫和.;屈洪岩等研究发现玉米花粉多糖能显著促进 抗体新城疫血凝抑制抗体的产生,使抗体提前产生并长时间维持较高滴度。 此外,多糖对黏膜免疫也有一定增强作用;邱妍等证明种中药多糖黄芪 多糖、板蓝根多糖、牛膝多糖和山药多糖可 以有效的增强雏鸡黏膜的屏障作用。菌类植物多糖中也有很多早己应用于临床, 例如现有的多糖药物有云芝多糖片、灵芝多糖胶囊、茯苓多糖口服液、银耳芽孢 糖浆、香菇多糖注射液等。 ...抗肿瘤 一些多糖具有抗肿瘤活性,对癌细胞具有很强的抑制作用。目前研究认为抗 肿瘤作用与机体免疫功能有关,多数多糖通过直接抑制肿瘤细胞的生长,改变肿 瘤细胞膜的生长特性,抗氧化、清除自由基,影响癌基因的表达,抑制肿瘤细胞 周期和抑制肿瘤组织中活性、诱导分化以及提高机体免疫力等途径达到抗肿 瘤作用。例如金瑾实等发现掌叶大黄多糖对肿瘤细胞具有直接杀 山东农业大学硕士学位论文 伤作用,对肿瘤干细胞有抑制作用;香菇多糖已被用作原发性肝癌等恶性肿瘤的 辅助治疗药物;黄添友等研究证实,茯苓多糖与刺五加多糖的直接抗瘤 机理与膜生化特性改变有关,其中对膜磷脂的含量、脂肪酸的组成和肌醇磷脂的 代谢的影响是重要环节;枸杞多糖具有增强抗癌免疫监视系统的功能;杨桦等 通过研究认为人参多糖具有一定的抗肿瘤活性,其机制可能是人参多糖诱 生了肿瘤坏死因子;吴波等证明茯苓多糖对小鼠肉瘤细胞 和人白血病细胞的增殖均有抑制作用。还有部分多糖是具有细胞毒性的多糖,可以直接杀死肿瘤细胞,例如茶多糖 .,可抑制癌细胞的体 外增长其他一些多糖如螺旋藻多糖、银耳多糖、海带多糖、黄芪多糖、柴胡多糖 灵芝多糖、淫羊藿多糖、竹叶多糖、茶树花多糖、虫草多糖等也均有不同程度的 抗肿瘤作用。 ...延缓衰老 在传统的延缓衰老的古方中,大多是以植物药为主,含量较高的成分多数是 糖类。植物多糖抗衰老的作用机制主要涉及以下三个方面:作为免疫调节剂调节 机体免疫功能,提供必须的微量元素与营养来延长动物的生长期;抗脂质过氧化 与抑制脂褐质作用;清除机体内脂质过氧化物和丙二醛,抑制 的作用,增强机体超氧化物歧化酶活力。金针菇多糖、银耳多糖 等可显著降低机体心肌组织的脂褐素的含量,增加脑和肝脏组织的酶活力, 从而起到延缓机体衰老的作用;黄忠仕等发现龙眼参多糖具有提高小鼠 血清、.含量,减少含量的作用,显著地延长小鼠游泳时间、耐 缺氧时间及耐高温时间,能较好地清除氧自由基,对防止细胞损伤、延缓衰老具 有较好的作用;周慧萍等人报道,黑木耳多糖能明显延长果蝇寿命,提 高老年小鼠对有害刺激的非特异性抵抗力,降低动物血浆中过氧化脂质含量,减 少脂褐素形成;枸杞多糖的抗衰老作用更为突出,对机体多种生理、生化功能的 促进与调节作用更为全;张振明等研究发现女贞子多糖有抗衰老作用, 其机制可能与提高免疫功能,清除氧自由基和活性氧,增强机体抗氧化酶活力有 关。除此之外,何首乌、人参、黄芪等多糖都有一定程度的抗衰老作用。 ...抗疲劳 某些多糖具有降低机体乳酸脱氢酶活性的作用,可使肝糖原含量显著增加而泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 提高机体的运动能力,并使机体在运动后各项指标迅速恢复正常,因而具有抗疲 劳作用。例如研究证明,芦荟多糖能降低和的含量,延长小鼠的游泳 时间叶金峰等,。杨晓杰等发现蒲公英多糖能明显延长小鼠负重 游泳时间,显著提高小鼠肝糖原含量,为机体提供能量达到抗疲劳的作用。另外, 枸杞多糖、五味子粗多糖、百合多糖等也有抗疲劳的作用。 ...降血糖、降血脂作用 有些植物活性多糖具有降血糖,降血脂作用。韩春然等发现当质量分 数在 /以上,黑木耳多糖能够显著降低糖尿病小鼠的血糖值,但对正常小鼠的 血糖值没有影响,还证明黑木耳多糖能够增加糖尿病小鼠的糖耐量。据张拥军等 报道,南瓜多糖具有降低血糖作用,对糖尿病的防治效果已获确认。另外,番石 榴多糖、人参多糖、苍术多糖、薏苡仁多糖、山药多糖、黄芪多糖、灵芝多 糖、 紫菜多糖、甘草多糖等也具有降血糖作用。孙庆生等报道南瓜多糖有降 血脂作用,动物实验表明,南瓜多糖是较理想的能改善脂类代谢的食疗剂。海带 多糖能明显降低糖尿病小鼠的血糖和尿素氮,并对胰岛损伤有修复作用。韦璐等 研究发现金花茶多糖具有降低血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白 的功能,对冠心病及动脉粥样硬化具有一定的预防作用。此外,有降血脂功能的 还有海带多糖、褐藻多糖、紫菜多糖、灵芝多糖等。银耳多糖、茶叶多糖、魔芋 多糖等既能降血糖又能降血脂。 ...抗辐射 随着科学技术的发挥在展和人们生活的现代化,电子电器越来越普遍,人们 越来越多的接触辐射,尤其是放疗的肿瘤患者、职业受照人员的辐射性损害日益 受到重视。田生礼等研究发现人参多糖减轻造血系统的损伤,增强细胞 免疫功能,降低线诱发的染色体畸变率;郎杏彩等报道酸枣多糖能延 长受照射小鼠的存活时间,增强单核巨噬细胞的吞噬功能;红毛五加多糖具有抗 氧化作用,能减轻辐射引起的、损伤鞠洋等,。除此之外,动 物实验显示,黄芪多糖、当归多糖、柴胡多糖、枸杞多糖、黄精多糖、虫草 多糖、 芦荟多糖等都能保护小鼠免受辐射损伤。许多菌类多糖,尤其是真菌类也具有明 显的抗辐射作用。例如黑木耳多糖能提高小鼠天存活率,增加骨髓含量; 梁金菇能提升放射损伤小鼠.、?、.的数量,促进外周血白细山东农业大学硕士学位论文 胞恢复;银耳多糖能加速辐射损伤造血细胞的修复。海带、螺旋藻、褐藻、紫球 藻等藻类多糖由于生长在高盐、高压和强辐射的海水中,其多糖的组成和结构比 较特殊,大多都具有较好的抗抗辐射作用。其实,不论是植物、动物或微生物来 源的多糖,都具有一定的抗辐射作用,其机理尚不明确,一般认为是与抗氧化、 强化造血系统、活化吞噬细胞和增强抗免疫等作用有关。 ...抗菌、抗病毒 大量研究表明,许多多糖对细菌和病毒有抑制作用。因此,利用植物多糖的 抑菌作用,把植物多糖作为食品中的一种成分,既可以防腐,有可以为产品增加 附加值。于荣敏等证明,银杏胞外多糖与银杏叶多糖可显著抑制致炎剂 引起小鼠耳肿胀和毛细血管通透性增加,表明它们具有抗炎作用;紫萁多糖不仅 能抑制如金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌,对藤黄色八叠球菌等革兰氏阴性菌也 有抑制作用陆海南等,。目前,对多糖及其衍生物的抗病毒研究已有了相 当的发展,有部分多糖制剂己用于临床,很多研究发现,多糖跟其他药物具有协 同作用,这为治疗病毒病提供了广阔的前景。大多数多糖的抗病毒机制主要是通 过抑制病毒对细胞的吸附,这可能与多糖大分子机械性或化学性竞争病毒与细胞 的结合位点有关。此外还能抑制病毒抗原的表达,抑制病毒逆转录酶的活性。王 学兵等研究发现板蓝根多糖体外对具有较好的阻断和抑制作用。 盐藻多糖具有良好的抗副流感病毒的作用,其不仅能阻止病毒的吸附与穿入,而 且在一定程度上能够灭活病毒朱红红等,。于红等报道螺旋藻多 糖能干扰单纯疱疹病毒对宿主细胞的吸附,有效的抑制病毒的复制和糖蛋白 的表达。 ...抗突变功能 在细胞分裂时,可能由于遗传或非遗传的因素导致基因突变。多糖的抗突变 作用主要是通过阻断致突变物使正常细胞变为突变细胞而实现的,也包括部分去 突变作用。阚建全等研究发现,甘薯活性多糖具有显著的抗突变作用,当其 剂量为/平皿时对一氨基芴、苯并芘、黄曲霉素的致突变性抑制率均达到%以 上,并且呈明显的剂量一效应关系;海藻多糖能消除免疫抑制剂环磷酰对机体免疫 系统的抑制作用,对环磷酰胺诱发的小鼠嗜多染红细胞微核率和精子畸形 率均有显著的抑制作用项华等,。刘伟等研究发现香菇多糖能显泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 著抑制小鼠染色体的畸变和微核的形成,而且抑制率随剂量的增加而升高。有研 究证明,人参多糖、波叶大黄多糖、香菇多糖、紫云多糖等均具有抗突变作用。 ...保肝功能 有研究表明,北五味子粗多糖有保肝作用,可能与它抗脂质过氧化、促进胆 汁的分泌和肝的再生作用有关高普军等,;李立华等报道芦根多 糖大小剂量组对肝细胞都有保护作用,推测芦根多糖可通过抗氧化、保护肝细胞、 抑制胶原沉淀等途径来抑制肝纤维化;迟国兵等研究结果表明枸杞多糖 可降低肝组织丙二醛的含量,可显著提高肝损伤小鼠的肝糖含量,从而提高机体 的能量储备,有利于抵抗有害物质对肝脏的损害。 ..多糖的开发应用 多糖是生命有机体的重要组成部分,广泛存在动植物和微生物有机体中,是 除了核酸和蛋白质外的又一类重要生物分子。目前,多糖的研究以日本、美国、 德国、俄罗斯等国处于领先地位。近些年,我国的研究人员也做了不少工作,尤 其是植物多糖方面。多糖的已经被广泛应用于众多领域。 ...多糖在医药方面的应用 多糖具有多种药理作用,主要体现在降血糖、降血脂、抗肿瘤等方面,现在 已经广泛应用于医学临床。据文献报道,多糖具有抑制.肉瘤及艾氏腹水瘤等 细胞生长的生物学效应,明显促进肝脏蛋白质和核酸合成及骨髓造血功能,促进 体细胞免疫和体液免疫功能。香菇多糖与免疫抑制伏福定合用用于治疗胃 癌。目前,经过卫生部门批准的作为抗肿瘤免疫治疗药物的有香菇多糖、云芝多 糖、猪苓多糖等。 ...多糖在食品方面的应用 在饮料中的应用 从生物体中提取的一类具有生物生理活性和良好水溶性的多糖类物质生物 活性多糖是研发保健饮料重要原料之一,它们可以赋予饮料一定的保健功能, 并且能起到一定的增稠、稳定和提高口感的作用。例如李新明等调制的 红枣多糖饮料经理化检测,具有浓郁的红枣鲜果味,清?爽口,具有很好的稳定 性。可溶性大豆多糖能稳定蛋白质分子而且具有一定的乳化功效,但不会增加体系 的粘度,可作为饮料、乳饮料等产品的乳化剂,也可以作为乳化性产品的乳化剂 山东农业大学硕士学位论文 和稳定剂,像乳化香精等。硒酸脂多糖用于饮料生产时,既可以作为硒营养强化 剂,又可作为增稠剂、胶凝剂、悬浮剂和澄清助剂等。多糖饮料通常不能达到立 即为机体补充能量的作用,但是能帮助消化,排除体内毒素,起到调节肠胃的作 用。 在糕点及面制品中的应用 开发制作功能多、营养性高,感官特性好的产品,一直是食品行业开发研究 的热点。多糖不仅具有良好的营养作用,还具有增稠、稳定等一系列独特食品加 工性能,因此既可以增强糕点及面制品的保健功能,还可有效改善食品质感,控 制产品水分,延长保质期,为新型糕点及面制品的开发提供了方向。陈卫梅等 研究发现在面包中仅添加少量的水溶性多糖就可使食感变得更为柔软可 口,在蛋糕中添加相当于小麦粉%的大豆多糖类有极为柔软的食感,增加面团产 出量,延长保质期;添加到饼干中,饼干成型性好,断裂及表面裂纹减少。在糕 点及面团中加入适量菊糖,可以有效控制黏度,柔软性和保质期也都有所改善。 普鲁兰多糖与适量的小麦粉、豌豆粉混合可制成低热值人造米、面等:糕点中添加 部分普鲁兰多糖可提高其风味 在肉制品中的应用 多糖可单独作为营养强化剂直接加入肉制品。如硒酸脂多糖在肉制品中添加 量为.%.%,既可作为硒源营养补充剂,例如生产富硒火腿肠、午餐肉等, 还可增强肉的持水性,改善肉制品弹性及切片性能,提高产品品质刘建林等, 。利用淀粉的增稠性,用于碎牛和羊肉罐头中,可增加制品的黏结性和持 水性。卡拉胶用于肉制品可提高口感并能保持水分、风味、质构,起到凝胶、乳 化、保水、增强弹性的作用。往肉制品加入.%.%的琼脂也可起到胶凝作用。 利用多糖的生物活性还可开发一些特殊人群如宇航员、高血压和糖尿病患者等食 用肉制品。 在冰淇淋和果冻中的应用 多糖具有凝胶性、稳定性、耐热冷性和保形性,在冰淇淋和果冻生产中可作 为良好的品质改良剂。例如硒酸酯多糖可以与牛奶中的阳离子发生反应形成独特 的凝胶,与蛋白质发生络合作用,因此在冰淇淋生产时加入可以增加冰淇淋 的成 型性、抗融性、稳定性和乳蛋白受热时的稳定性。此外在冰淇淋中加入.葡聚糖 泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 能抑制冰晶的形成。在果冻中加入果胶,胶凝效果较好。 .松花粉多糖的研究进展 松花粉是松树体精华的所在,是松树花蕊的精细胞,它包含着孕育新生命所必需的 全部营养物质,因而被认为是世界上最完美的一种阴阳平衡体。松花粉集聚了大量生命 元素,其中含有人体所需的多种营养元素,有种维生素、种氨基酸、多 种矿物质、多种酶,以及核酸、不饱和脂肪酸、类黄铜、卵磷脂、多糖、单糖等。 松花粉具有花源单一、品质纯净、成份稳定、无农药残留物,不含任何动物激素等许多 优点,堪称“花粉之王”。松花粉作为中国传统药材,已有数千年药食兼用的历史, 从年前的《神农本草经》到今天的《中华药典》等医药典籍中都有记载,因为其 神奇的功效,在民间更是被奉为“仙药”。 随着提取和分离技术的提高,多糖研究有了长足的发展,越来越多的植物多 糖被开 发利用。松花粉的开发利用正逐步产业化,但是主要集中于人类的医药行业的抗高脂血 症、抗疲劳、美容养颜等方面的研究,而对畜禽方面的研究报道极少。近几年,松花粉 在增强免疫方面的功效逐渐引起了畜牧界的关注,而且具有天然、无毒、少副作用、来 源广泛等特点,探索将其研制成为新型的免疫增强剂,对防治畜禽的传染病,生产绿色 安全的畜禽产品等具有十分重要的意义。本课题组孟秀彦等研究证明直接饲喂 松花粉能够显著提高鸡、兔的免疫功能,而且这种增强作用是非特异性的,并且对机体 没有任何毒副作用。刘辉等发现马尾松花粉酯化%多糖对肿瘤细胞、癌细胞 均有一定的抑制作用,对免疫细胞的增殖和吞噬有很强的促进作用。范国栋等 对云南松花粉进行了成分分析及其安全性和功能评价,经检测证实,云南松花粉营养及 功能成分全面、丰富,使用安全,并且具有抗疲劳、调节血脂。延缓衰老、提高人体免 疫功能的药用及保健功效。本课题组魏凯等研究发现不同剂量泰山松花粉多糖 均能提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的全身抗体水平、血液淋巴细胞比率、脾 / 脏淋巴细胞转化率以及小肠含量, /剂量组的效果显著, 剂量组的能使诱导的免疫抑制完全恢复到正常水平。不同剂量泰山松花粉 多糖佐剂均能够提高兔的平均日采食量和平均日增重,还能够从整体上提高兔的免疫功 能和生产性能,延长各指标峰值出现的时间,从而延长兔瘟病毒的免疫期和獭兔的生长 期。 .乳酸杆菌的研究进展 山东农业大学硕士学位论文 ..乳酸杆菌的生物学功能 乳酸杆菌 是一群杆状或球状的革兰氏阳性细菌,其中 含量范围为.?...?.%。在乳酸菌中,乳酸杆菌是最大的一个属, 属于乳酸杆菌科。不液化明胶,不还原硝酸盐,接触酶和细胞色素阴性,联苯胺反应 阴性,菌落多数呈白色,偶亦有呈黄红色者。乳酸杆菌微需氧,在%~%环境内 生长更好。生长温度~?最适温度为一,嗜酸性,生存最适为.., 在..的环境中仍然能生存,它在无芽胞杆菌中是耐酸力最强的。乳酸杆菌 在自然界中分布广泛,目前,人们己从哺乳动物的口腔、肠道、粪便、阴道分泌 物、奶酪、酸菜等分离到多种乳酸杆菌。乳酸杆菌还是是动物和人肠道等处 重 要的生理性菌群之一,该类群细菌绝大多数对动物和人无毒、无害,而且负担着 动物体内重要的生理功能。 ...产生特殊物质 乳酸杆菌的分泌部分特殊蛋白质可以不经过直接的细胞接触而发挥对肠道的促健 康作用。例如研究发现,鼠李糖乳酸杆菌分泌的和这种蛋白质能通过特 异的信号通路改善肠道上皮的稳定性,抑制.仅诱导的上皮细胞的凋亡,促进肠上皮 细胞的生长 .,。还可以产生一些特殊的酶系,如产生有机酸的酶系、 合成多糖的酶系、分解乳酸菌生长因子的酶系、分解亚硝胺的酶系、降低胆固醇的酶系、 控制内毒素的酶系、分解脂肪的酶系、合成各种维生素的酶系和分解胆酸的酶系等。这 些酶不仅在加速乳酸菌的生长,维持肠道微生态平衡,促进机体健康方面起作用,而且 还被用于改善产品的风味,促进乳制品、发酵香肠等食品的成熟等方面。乳酸杆菌产生 的可溶性肽在调节肠道上皮的屏障功能上起着重要的作用。例如,枯草芽孢杆菌 .中的群体信息感应分子集落刺激因子能够诱导产生保护性 热应激蛋白来防止肠道上皮功能的紊乱肛 .,。 ...具有粘附性和定植能力 乳酸菌通过粘附素与肠粘膜上层的粘蛋白以及肠粘膜细胞的特定受体完成特异性 结合,粘附素主要有细胞壁毛缘、脂磷壁酸.、完整肽聚糖、?、多糖和表 层单蛋白.层蛋白等。粘附是定植的前提,不能粘附于肠上皮细胞表面的细菌,只 能是过路菌,不能在肠道内定植。在肠粘膜表面定植占位。乳酸杆菌和致病菌都需要通 过粘附、定植来发挥作用。乳酸菌黏附定植于肠粘膜上皮细胞表面后,可以形成一层“生 泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 物膜”,一方面通过竞争性地占位,抑制有害菌的粘附,有益菌成为优势菌群后,可优 先吸收利用小肠食糜中的营养物质进行生存和繁殖,抑制有害菌的增殖。另一方面,乳 酸杆菌能够产生蛋白质促凝聚因子来促进病原体凝聚,抑制其它条件致病菌的黏附和侵袭 .,。这个屏障一旦遭到破坏,宿主丧失了对外来有害菌的抵抗, 或者有耐药性的肠内有害菌异常增殖而占据优势地位时,肠道内的微生态平衡就会发生 失调。人们通常使用乳酸杆菌、双歧杆菌等制剂来修复肠道菌群屏障,达到治病的目的。 ...产生抑菌活性的代谢产物 乳酸杆菌代谢可以产生乳酸、过氧化氢和细菌素等多种代谢产物,对一些腐败菌和 低温细菌有较好的抑制作用,其抗菌机制可能包括以下几个方面:一是产生的乳酸等有 机酸螯合金属离子等和改变革兰氏阳性菌细胞膜的通透性,例如加氏乳酸杆菌. 产生的乳酸能使金黄色葡萄球菌.细胞膜瓦解,致使细胞内容物.,;此外还能显著降低环境 渗出,进而对其起到抑制作用 值和,使肠道处于酸性环境,对于部分致病菌有拮抗作用。例如,程秀芳等 通过体外试验证明嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌对致病性大肠埃希菌和致病性金黄色葡萄 球菌有很好的抑制作用。干酪乳杆菌、嗜酸乳酸杆菌和短乳杆菌产生的非解离乳酸能够有效地抑制大肠杆菌生长 .,:最后,低 值和,能促进肠道蠕动,使机体维持正常生理功能,减少致病菌的定植。二是产生 的过氧化氢是一种重要的抗菌化合物,能够激活机体肠道中的过氧化氢酶.硫氰酸系统, 抑制或杀灭革兰氏阴性菌和过氧化氢酶阳性细菌,例如假单孢菌属、大肠杆 菌类和沙门 分 氏菌属等。等发现约氏乳酸杆菌. 泌的对体外抑制沙门氏菌有重要作用。三是产生的细菌素是一类选择性地作用于 细菌靶细胞的抗菌物质。大多数乳酸杆菌产生的细菌素体积小,为具有高等电点的热稳 定性蛋白质,称之为类细菌素,可吸附在细胞膜上形成孔道,使通透性增加,导致致 病菌的胞内物质外漏,进而发挥杀菌作用 .,。单春乔等 报道嗜酸性乳酸杆菌产生的细菌素对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均有抑制作 能产生大量的类细菌素 用。等的研究显示,唾液乳酸杆菌 ,在体内具有有效的抗菌功能。因此筛选抑菌活性高、抑菌谱宽的乳酸菌细菌素 产生菌仍然是国内外细菌素研究的热点之一。 ...降低胆固醇 山东农业大学硕士学位论文 胆固醇是人体必需的营养成分,但如果不注意饮食就会造成血清中胆固醇含量过 高。部分乳酸杆菌能减少肠管对胆固醇的吸收,将外源性胆固醇转化为为人 体不吸收利 用的粪固醇排出体外,另一方面还抑制内源性胆固醇的合成,增加机体组织对胆固醇的 转化和利用,从而使胆固醇下降。等将高血清胆固醇的人群分为三组,均 服用相同剂量的嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌制剂,个月后发现被测人群的血清中总 胆固醇含量和低密度脂蛋白浓度均有不同程度的下降,而且血清中胆固醇含量越高,总 胆固醇含量和低密度脂蛋白浓度下降越显著。肖琳琳等从西藏传统发酵乳西 藏灵菇中分离筛选得到一株干酪乳杆菌 一,在液体培养基 中降胆固醇能达到.%。.制备的菌悬液灌胃高脂血症模型小鼠后。发现实 验组小鼠血清中胆固醇和甘油三酯浓度显著低于对照组.,高密度脂蛋白浓度 有所增加,动脉硬化指数要比对照组的水平低。 ...增强免疫功能 乳酸杆菌在肠道内的定植,可以通过诱导黏液素的分泌和阻止上皮细胞凋亡等机制 来增强肠道上皮细胞的屏障作用,从而提高机体的抵抗力,引导非特异性免疫调节机制。 马雪云等报道乳酸杆菌对鸡肠道上皮有较强的黏附作用,能够提高鸡肠黏膜 的滴度,增强鸡的抗病能力。乳酸杆菌还能促进机体免疫器官的生长发育和免疫 细胞的成熟分化,促进免疫球蛋白的分泌,还能增强巨噬细胞和细胞的活性,诱导 它们产生多种细胞因子,从而提高机体的免疫力。等报道干酪乳酸杆菌 能诱导小鼠脾细胞产生促炎症因子.,从而诱导的产生,产生一系列的免疫 应答。巨噬细胞还能诱导的产生,高荣琨等研究证明乳酸杆菌能促进鸡免 疫器官的生长发育和淋巴细胞增殖,还能提高新城疫抗体水平。等 小鼠口服乳酸杆菌后能激活吞噬细胞的吞噬能力。乳酸杆菌的免疫促健康功能离不 开其表面的配体和肠道上的受体,、细胞壁肽聚糖、细胞表面蛋白 以及一些未知的细胞表面提取物在增强宿主免疫中起着重要的作用,乳酸杆菌的这些表 面物质作为配体被样受体、、等受体识别后通过激活不同的免疫 信号通路,实现免疫调控作用。 ...具有营养作用 乳酸杆菌产生的酶能水解摄取食物中或内源性碳水化合物如淀粉、多糖等,为 机体提供能量。乳糖是双糖,不能被人体直接吸收,必须被半乳糖酶分解成葡萄糖和半 泰山松花粉多糖和乳酸杆菌协同增强禽波氏杆菌亚单位疫苗免疫效果的研究 乳糖后才能被肠道吸收利用。德氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌等含有半乳糖苷酶,能够 分解乳糖,减轻乳糖不耐受患者的症状。乳糖的分解产物.半乳糖是脑苷脂和神经物质 的合成原料,能促进脑组织和神经系统的发育。同样,有些结构比较复杂、分子量比较 大的蛋白质在酶的作用下,被降解为小分子肽和多种游离氨基酸,利于被肠胃吸收利用, 提高蛋白的利用率。例如保加利亚乳杆菌能分解乳蛋白,来提高牛奶的利用率。部分乳 酸杆菌菌体蛋白质还能增加发酵乳的蛋白质含量和氨基态氮含量,使品质更佳。一些食 物经乳杆菌发酵能提高营养价值,例如毕德成等用保加利亚乳杆菌和嗜热链球 菌发酵一些谷物,发现发酵后的玉米粉、小麦粉和豆浆粉中赖氨酸含量分别增强了%、 %和%,蛋氨酸分别增加了%、%和%,硫胺素和核黄素 均有所增加,游离氮分别增加了.倍、.倍和.倍,游离钙分别增加了.倍、. 倍和倍,游离铁分别增加了.倍、.倍和.倍,总体营养价值有明显提高。部分 乳酸杆菌还能合成维生素,但合成的量因菌株不同而异。乳酸杆菌还参与胆汁酸的代谢, 肝脏利用胆固醇合成胆汁酸初级胆酸,通过肝脏系统进入肠道,经乳杆菌、类杆菌、 双歧杆菌等脱氢作用会形成次级胆酸。此外,机体所摄入的钙大半部分被食 物中所含的 草酸沉淀掉了,不能被机体很好的吸收利用,而乳酸杆菌产生的有机酸使钙、磷等元素 处于易吸收的离子状态,有利于骨骼的生长发育,可防治由于缺铁、缺钙引起的贫血病 和软骨病等。 ...抗癌抗肿瘤作用 目前,治疗肿瘤的方法主要是手术和化疗、放疗等,但是手术存在复发率、并发症 发生率高等缺点,化疗存在依赖性强、治疗时程长、毒副作用大等缺点。因此,研发安 全、特异性强、毒副作用小的抗肿瘤生物制剂已经能够成为防治肿瘤的趋势。乳酸杆菌 分泌的代谢产物降低肠道病原菌酶的产生和活性,使前致癌物质无法活化成致癌物质, 还能结合致癌物质随粪便排出,减少其形成、活化和滞留的机会。乳酸杆菌还通过激活 免疫途径,直接杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞的形成和生长。等用嗜酸 乳杆菌饲喂大鼠,能明显降低,.二甲基肼,诱发产生结肠癌的发生率。 进一步证实了经常性的摄入发酵液可显著降低结直肠癌、胃癌、膀胱癌的 发生率。等报道,保加利亚乳杆菌细胞壁成分能显著抑制小鼠 腹水瘤的生长。能抑制小鼠结肠癌实体瘤,并可诱导实体瘤细胞的凋亡。 ..乳酸杆菌在畜牧业的应用山东农业大学硕士学位论文 ...乳酸杆菌作为载体 乳酸杆菌是安全、无毒、无侵袭性的微生物,因此国内外越来越多的学者开始把乳 酸杆菌作为外源基因的表达载体,有目的、有选择地研制新一代微生态制剂。近些年, 研究者们已经构建了多种乳酸杆菌载体,并表达了多种蛋白。但与大肠杆菌相比,乳酸 杆菌的基因工程还存在一定难度,目前处于开发阶段。乳酸杆菌可以作为免疫疫苗的载 体,例如李云岗等给猪采用口服和肌肉注射以乳酸杆菌为载体的口蹄疫病毒 基因疫苗. .,都能达到较高的抗体效价,诱导特异性细胞增殖反 应,对免疫和预防猪口蹄疫提供了思路。等在干酪乳杆菌中表达了猪流行 性腹泻病毒核蛋白抗原,经口腔或鼻内接种妊娠母猪和小鼠后,发现能产生长时间较高 水平的特异性抗体和,且的水平要高;王春风等在质粒 中成功地表达了鸡球虫基因,将该重组的乳酸杆菌给刚出壳的雏鸡饲喂,一周后攻 球虫卵囊×个/只,结果试验组雏鸡的体重未发生变化,组织病理学变化最轻微,表 明了基因工程乳酸杆菌的有效性。乳酸杆菌可以作为食品级载体,例如质粒干 酪瑞士乳杆菌..携带有的红霉素基因启动子及编码一半乳糖苷酶 基因,将.的一淀粉酶结构基因插入的红霉素抗性 基因启动子区下游,即可在干酪乳杆菌中获得成功表达,这有利于牛奶中以 乳糖作为唯一能源的转化子的筛选。 ...乳酸杆菌的免疫作用 乳酸杆菌能促进动物免疫器官的发育、增强免疫细胞的活性并促进抗体的产生,从 而提高动物的免疫力。任贵强等用两株乳酸杆菌..和.制成 乳酸杆菌液和发酵乳,对免疫新城疫疫苗的雏鸡均有免疫促进作用。此外,死菌、菌液、 裂解物、细胞壁、等也有提高免疫的作用。双杰、宋新宇等从内蒙古乳 制品中分离到的株乳酸杆菌. 和.,分别提取肽聚糖和作为免 疫佐剂,发现可明显促进新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感亚型油乳剂灭活疫苗对 雏鸡的免疫效果,而且抗体滴度随着肽聚糖剂量的增加也相应增加。 ...治疗肠道性疾病 乳酸杆菌是肠道内的有益菌,对维持肠道内环境和发挥黏膜免疫起重要作用,常用 于预防和治疗一些动物肠道疾病,例如腹泻、肠应激综合