生物芯片诊断系统应用指南生物芯片诊断系统应用指南

生物芯片诊断系统应用指南生物芯片诊断系统应用指南 生物芯片诊断系统应用指南生物芯片诊断系统应用指南生物芯片诊断系统应用指南生物芯片诊断系统应用指南 品种篇品种篇品种篇品种篇 深圳欣康基因数码科技有限公司 2 品种品种品种品种 深圳欣康公司开发的蛋白芯片主要应用于临床常见感染性疾病抗体检测、病原体分型检测和疾病相关蛋白检测目前已经形成的产品系列和品种包括 1、幽门螺旋杆菌HP抗体谱检测芯片 2、孕期感染TORCH抗体检测芯片 3、性传播疾病免疫诊断芯片 4、心血管病感染因子抗体检测芯片 5、免疫性不孕不育抗体检测芯片 6、呼吸道病毒抗体检测芯片 7、孕期唐氏综合征筛查芯片 8、乙肝表面抗原与E抗原定量芯片 新品 9、心肌梗塞联检芯片 新品 生物芯片诊断的特点和优点生物芯片诊断的特点和优点生物芯片诊断的特点和优点生物芯片诊断的特点和优点 1、高通量多种项目一次性检测完成。避免了多个项目连续多次的检测大大缩短检验和分析的时间提高临床检验的工作效率。 2、芯片项目根据临床需求设计针对性强满足临床对疾病相关微生物和蛋白以及进一步分型的检验要求。 见各品种指标设计依据 3、选择、设计和制备高效能探针提高项目检测的 见各品种指标检测特点 4、生物芯片平台技术有利于对制备敏感性和特异性。 过程实施严格的定量化质控减少人工操作干扰反应的重复性高于传统检测方法。 见芯片系统的重复性 5、检测结果定性、半定量和定量相结合有力配合临床要求强大的数据储存和调用功能支持进一步的深入研究。 见各品种解读 6、操作可单人份进行简便快速自动化程度高检验报告立等可取。 7、强大的信息化和网络化管理功能报表和统计工作轻松完成。 3 一一一一、、、、幽门螺杆菌抗体谱检测生物芯片应用指南幽门螺杆菌抗体谱检测生物芯片应用指南幽门螺杆菌抗体谱检测生物芯片应用指南幽门螺杆菌抗体谱检测生物芯片应用指南 概念概念概念概念 2005年的诺贝尔生理学或医学奖授予了澳大利亚科学家沃伦和马歇尔。因为他们发现了导致胃炎和胃溃疡的细菌——幽门螺旋杆菌他们的研究使人们认识到胃溃疡是一种细菌感染性疾病推翻了先前人们认为这是一种生理性疾病的认识。在1982年发现这种细菌之前胃溃疡的主要引发原因一直被认为是生活压力和生活习惯。事实上90的十二指肠溃疡和80的胃溃疡都是由幽门螺旋杆菌引起的。 幽门螺杆菌 Helicobacter pyloriHp 是1982年Marshall和Warren从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜中分离出的一种革兰氏阴性杆的菌一般情况下定植于胃黏膜可引起慢性胃炎、消化性溃疡等消化道疾病与胃癌的发生关系密切。近年来研究表明幽门螺杆菌还是心血管疾病、糖尿病的致病因子。幽门螺杆菌在胃黏膜部位繁殖后能产生丰富的尿素酶有极强的分解尿素的作用尿素分解后产生的氨对胃黏膜产生毒性作用致使组织损伤破坏胃黏膜。 幽门螺杆菌感染目前呈全球性分布多数地区感染率在50左右。我国是幽门螺杆菌感染的高发区感染率为50-80。与其他发展中国家相似我国属儿童期易感型在儿童期感染率每年以3-10的速度上升至10岁时感染率已达40-60成人以后每年以0.5-1的较低速度增加。一般认为幽门螺杆菌仅寄居于人类人是唯一的传染源。幽门螺杆菌多系口 口传染粪 口传染途径尚未得到证实。 幽门螺杆菌感染引发胃黏膜炎症是慢性活动性胃炎的主要原因也是糜烂性胃炎和胃溃疡的重要元凶与胃癌发生密切相关WHO已将幽门螺杆菌列为第?类致癌因子。由于幽门螺杆菌菌株不同其所含细胞毒素相关蛋白CagA、VacA及其他致病因子也不尽相同因而临床表现也各异。 下面几种疾病与幽门螺杆菌感染关系最为密切 消化道疾病如消化道疾病如消化道疾病如消化道疾病如慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、黏膜相关性淋巴组织淋 巴瘤 以及胃肠道外疾病心脑血管疾病中的冠状动脉粥状硬化性心脏病 简称冠心病 、脑血管疾病、偏头痛 自身免疫性自身免疫性自身免疫性自身免疫性疾病疾病疾病疾病紫癜、干燥综合症、膜性肾病、自身免疫性甲状腺炎、糖 4 尿病 皮肤病皮肤病皮肤病皮肤病酒糟鼻、慢性寻麻疹 其他与其他与其他与其他与HpHpHpHp感染有关的疾病感染有关的疾病感染有关的疾病感染有关的疾病缺铁性贫血、肝硬化病人和高氨血症、儿童和胎儿生长发育迟缓、胆石症、非胃部MALT淋巴瘤、支气管扩张等 总之Hp感染是多种疾病发生的直接或间接原因多数已经定论而有些有待于进一步研究。由此可见预防和根除Hp感染不仅对胃部疾病而且对胃部以外的疾病的预防和治疗有非常重要的意义。 幽门螺杆菌感染诊断方法幽门螺杆菌感染诊断方法幽门螺杆菌感染诊断方法幽门螺杆菌感染诊断方法 方法方法方法方法 分类分类分类分类 优点优点优点优点 缺点缺点缺点缺点 光镜法 直观易确证幽门螺杆菌感染。 技术要求较高费用较贵易出现假阴性结果 组织细胞学方法 电镜法 可观察幽门螺杆菌的形态、结构、特征及与胃黏膜上皮细胞间的关系 受到 阳性率低 项目单一 设备条件限制及费时、费事、费用很高。 直接镜检 简便易行 快速尿素酶实验 敏感性和特异性较高 创伤性 取样要求高 微生物学方法 分离培养 形态学和生化学方法鉴定精确 需要一些特殊条件 可致假阴性结果 同位素示踪方法 C13、C14呼气试验 体内测定胃内感染幽门螺杆菌的总体情况可做定性和定量测定。 C14设备和试剂价格昂贵 C13有可能对机体造成慢性、长期的内照射损伤孕妇、小孩特别不宜使用成人亦应慎用。受设备灵敏度制约存在假阴性结果其他菌株产生相关代谢产物导致假阳性。 5 15N-尿素排出试验 同呼气试验 检测费用较高 肝、肾功能不全者不宜使用 血清学方法 抗体检测 血清学方法操作简便 项目单一 分子生物学方法 PCR 高敏感性 实验条件高易出现假阳性结果 生物芯片技术 生物芯片 低创伤、适应广范群体 、特异性、灵敏性好 高通量、多指标、微型化和自动化 除菌治疗后阳性结果可持续一段时间。。。。 总之幽门螺杆菌感染有多种诊断方法都由不同的优缺点综合起来评价蛋白芯片检测方法是操作最简便、成本最低廉、仅有极小侵袭性既可用于临床辅助诊断又可用于人群流行病学普查是目前较为理想的检测方法。幽门螺杆菌经7 14天1 2个疗程根治后2年内重感率和复发率在1 2左右。 生物芯片检测指标介绍生物芯片检测指标介绍生物芯片检测指标介绍生物芯片检测指标介绍 经过多年对幽门螺杆菌的研究人们对该菌的许多抗原性蛋白有了较深入的了解。其中CagA、VacA、Ure、Hsp60和RdxA的功能目前了解的较为清楚。本芯片的设计指标及相应功能如下 检测对象各相关蛋白IgG抗体。 检测指标检测指标检测指标检测指标 功能功能功能功能 细胞毒素相关蛋白ACytotoxin associated gene ACagA CagA蛋白具有很强的免疫原性能诱导宿主胃黏膜局部产生多种细胞因子进而通过促进中性粒细胞的聚集和活化启动炎症过程CagA与幽门螺杆菌毒力呈高度相关。 细胞空泡毒素A蛋白Vacuolating cytotoxin A VacA VacA因其可致细胞空泡变性而得名与消化性溃疡密切相关。在小鼠动物模型中纯化的VacA能诱导小鼠形成胃溃疡。 6 尿素酶 Ure 尿素酶是幽门螺杆菌主要抗原之一所有的野生型幽门螺杆菌均产生尿素酶它可以引起患者产生IgG和IgA。 热休克蛋白60 Heat shock protein 60Hsp60 Hsp60是一类蛋白家族幽门螺杆菌特有的Hsp60与十二指肠溃疡、胃溃疡、十二指肠炎、黏膜相关性淋巴组织淋巴瘤及功能性消化不良有相关性但与胃癌的关系更为密切。 氮素还原酶 RdxA 含有RdxA蛋白的菌 株对甲硝唑敏感而不含RdxA的菌株则对甲硝唑有抗药性。 检测适用范围检测适用范围检测适用范围检测适用范围 1、普通人群筛检 2、Hp感染血清餍胁?У鞑樘乇鹗屎锨嗌倌闔p感染状况的调查 3、急慢性胃炎 慢性浅表性胃炎、慢性肥厚性胃炎、慢性萎缩性胃炎 、胃溃疡、十二指肠球部溃疡、胃癌等多种消化道疾病患者的辅助诊断 4、Hp清除效果观察。 幽门螺杆菌抗体谱检测的临床意义幽门螺杆菌抗体谱检测的临床意义幽门螺杆菌抗体谱检测的临床意义幽门螺杆菌抗体谱检测的临床意义 检测项目检测项目检测项目检测项目 临床意义临床意义临床意义临床意义 细胞毒素相关蛋白细胞毒素相关蛋白细胞毒素相关蛋白细胞毒素相关蛋白AAAA CagA 阳性“”提示感染Hp CagA毒力株致病力较强 细胞空泡毒素细胞空泡毒素细胞空泡毒素细胞空泡毒素AAAA蛋白蛋白蛋白蛋白 VacA 阳性“”提示感染Hp VacA毒力株致病力较强 尿素酶尿素酶尿素酶尿素酶 Ure 阳性“” 提示感染Hp 热休克蛋白热休克蛋白热休克蛋白热休克蛋白60606060 Hsp60 阳性“” 与胃炎的严重程度及胃癌发生关系密切 氮素还原酶氮素还原酶氮素还原酶氮素还原酶 RdxA 阳性“” 提示Hp对甲硝唑类药物敏感 7 幽门螺杆菌本身是一个复合抗原所含有的CagA、VacA、Ure、Hsp60和RdxA等抗原蛋白可以在不同阶段刺激机体免疫系统产生各种针对不同抗原决定簇的抗 体在体液中组成了特殊的幽门螺杆菌抗体谱。不同的抗体成分或是揭示了幽门 螺杆菌的致病特点或与幽门螺杆菌感染的预后及耐药密切相关研究并分析这些 抗体对于了解幽门螺杆菌在体内的状况如致病活力、变异情况、是否为再感 染、对药物的反应及活动状况等有重要价值。利用蛋白芯片技术可以同时检测幽 门螺杆菌多种抗体获得一个动态的、连续的抗体谱不仅能提高对幽门螺杆菌 检测的敏感性、特异性而且能够获得更多的感染病原体和疾病相关信息有助 于临床医生明确诊断、判断预后、疗效跟踪和药物选择为临床医生的诊断和治疗提供帮助。 定量分析和判断 本芯片检测具备半定量分析功能报告单每个检测指标显示阳性同时有反应的峰值图形并用数字显示可以帮助医生进一步观察和判断包括以下方面 1、定量数值代表患者抗体的相对滴度与患者患病程度和周期具备一定的关联性 但不绝对 可以帮助医生更为准确的判断病情 2、间隔一定时间的连续检测如果数值显著上升代表患者所感染因素正处于活跃期属于明显现症感染需要后续治疗 如果抗体显著下降代表患者所感染因素可能被清除或者潜伏需要进一步结合判断。 幽门螺杆菌感染治疗常用药物组合幽门螺杆菌感染治疗常用药物组合幽门螺杆菌感染治疗常用药物组合幽门螺杆菌感染治疗常用药物组合 1、质子泵抑制剂英文缩写“PPI”市上有售的如奥美拉唑、兰索拉唑等两种抗生素: PPI标准计量阿莫西林1.0g克拉霉素0.5g均一日两次1周为一个疗程 PPI标准计量阿莫西林1.0g甲硝唑0.4g均一日两次1周为一个疗程 PPI标准计量甲硝唑0.4g克拉霉素0.25g 均一日两次1周为一个疗程。 2、铋剂丽珠胃三联由铋剂 丽珠得乐 两种抗生素组成是目前根治幽门螺杆菌的一种十分有效的药物一个疗程连服七天根治率达90以上: 铋剂标准剂量阿莫西林0.5g甲硝唑0.4g 均一日两次2周为一个疗程 8 铋剂标准剂量四环素0.5g甲硝唑0.4g 均一日两次2周为一个疗程 铋剂标准剂量克拉霉素0.25g甲硝唑0.4g 均一日两次2周为一个疗程。 3、其他雷尼替丁枸橼酸铋 RBC 0.4g替代推荐方案1中的PPI。H2-受体拮抗剂H2-RA 或PPI推荐方案2组成四联疗法疗程一周。方案中的甲硝唑0.4g可用替硝唑0.5g替代。 二二二二、、、、优生优育优生优育优生优育优生优育RORCHRORCHRORCHRORCH抗体检测芯片 抗体检测芯片抗体检测芯片抗体检测芯片应用指南应用指南应用指南应用指南 概念概念概念概念 TORCH 是指一组以妊娠期感染为主的病原体可以通过胎盘、羊水或产道等引起胎儿宫内感染导致流产、早产、死胎、先天畸形、胎儿宫内生长迟缓和新生儿感染等围产医学称之为TORCH综合症。1971年美国学者Nahmias在向美国儿科学会提出研究申请时将这数种病原体英文名词的第一个字母组合而成TORCH。它门是弓形虫ToxoplasmagondiTOXO风疹病毒Rubella RUB巨细胞病毒CytomegalovirusCMV单纯疱疹病毒Herpes simplex virusHSV HSV又可分为两型即 HSV-?型和HSV-?型和其他感染因素Other agentsO。这组微生物感染有着共同的特征即可造成母婴感染。孕妇由于内分泌改变和免疫力下降易发生原发感染既往感染的孕妇体内潜在的病毒也容易被激活而发生复发感染。孕妇发生病毒血症时病毒可通过胎盘或产道传播感染胎儿引起早产、流产、死胎或畸胎等以及引起新生儿多个系统、多个器官的损害造成不同程度的智力障碍等症状。特别在怀孕初的三个月胚胎处于器官形成期此时受病毒感染可破坏细胞或抑制细胞的分裂和增值。器官形成期以后感染病毒可破坏组织和器官结构并可形成持续感染出生后继续排毒能引起相应的病变。实际上英文TORCH 一词就是火炬之意意为它将照亮围产医学的光辉前程。 优生优育致病病毒和常用诊断方法优生优育致病病毒和常用诊断方法优生优育致病病毒和常用诊断方法优生优育致病病毒和常用诊断方法 传统意义上的优生优育致病病毒包括弓行虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒我公司在此基础上添加了引起产道感染的病原体沙眼衣原体使优生优育的检测更加全面为临床提供更全面的辅助诊断依据更能降低新生儿的出生缺陷率。 9 类别 致病病毒 常用诊断方法 弓形虫病弓形虫病弓形虫病弓形虫病 弓形虫TOXO 1、病原检查 2、免疫学检查 风疹风疹风疹风疹综合症综合症综合症综合症 风疹病毒RV 1、病毒学检测 2、血清学检查 巨细胞病毒巨细胞病毒巨细胞病毒巨细胞病毒 巨细胞病毒CMV 1、包涵体检查 2、病毒分离 3、用单克隆抗体间接免疫荧光法 4、抗体检查 单纯疱疹单纯疱疹单纯疱疹单纯疱疹病毒病毒病毒病毒 单纯疱疹病毒HSV 1、疱疹病毒的细胞学检查 2、疱疹病毒组织培养 3、电镜检查 4、疱疹病毒的血清学诊断 衣原体宫衣原体宫衣原体宫衣原体宫颈炎颈炎颈炎颈炎 沙眼衣原体 CT 1、沙眼衣原体感染可通过阴茎或宫颈分泌物涂片镜检 2、衣原体培养法 3、血清学检验 4、DNA检测 生物芯片入选项目分析生物芯片入选项目分析生物芯片入选项目分析生物芯片入选项目分析 生物芯片选择项目和依据 1、TORCH检测的传统即为同时检测TOX/HSV/RV/CMV等4种感染因素使用生物芯片能一次性检测多项可能感染因素避免单项反复多查 2、入选项目在传统的检测项目基础上增加了较为常见的产道感染的项目CT 3、分别检测IgG和IgM抗体便于结合现症感染和既往感染情况综合诊治。 4、均适用于血清学检验 单项 检测特点 弓形虫弓形虫弓形虫弓形虫 TOXOTOXOTOXOTOXO 弓形虫引起的一种人畜共患的疾病是使用弓形虫天然提纯抗原与其他方法相比敏感性和特异性高检测可达到 10 围产期医学中的一个重要的寄生原虫病。当孕妇感染急性弓形虫病时无临床表现也可通过胎盘传给胎儿直接影响胎儿的发育严重致畸甚至死亡 也可使孕妇流产、死产、早产或增加妊娠并发症。故与优生关系极为密切。 半定量。还可根据抗体滴度的高低以及其动力学变化加以判断以区别现症感染或以往感染。 风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒 RVRVRVRV 儿童期常见的病毒性传染病特点是全 身症状轻微皮肤红色斑丘疹及枕后、耳后、颈后淋巴结肿大伴触痛合并症少见。母亲孕期感染时风疹病毒可通过胎盘传给胎儿而致各种先无缺陷称为先天性风疹综合征。 使用天然提纯抗原检测与常规办法相比操作简单快速有利于提高捡出率且特异性高 巨细胞病毒巨细胞病毒巨细胞病毒巨细胞病毒 CMVCMVCMVCMV 妊娠期宫内感染可对胎儿造成损害容易发生自然流产和死胎或是早产。新生儿症状可见肝脾肿大黄疸肝炎血小板减少性紫癜溶血性贫血神经系统的退行性变化小头畸形智力低下及视力、听力障碍等. 使用天然提纯抗原检测与常规办法相比操作简单快速有利于提高捡出率且特异性高 单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒 HSVHSVHSVHSV 2222 因受染的胎龄不同可有不同的临床表现。妊娠头8周感染则可发生先天畸形妊娠晚期感染则可与新生儿感染相似。主要表现有小头、小眼、脉络膜视网膜炎、晶状体混浊、心脏异常 如动脉导管未闭 、颅内钙化、肢体异常 如短指或短趾 、癫痫发作、痉挛性肢体瘫痪、精神性运动发育迟缓、子宫内发使用纯化抗原检测HSVHSVHSVHSV 2222抗体由于该病毒原发感染多为隐性仅有1—10出现临床症状因此使用血清学抗体检测更为适用和通常在症状出现4天后即可检测到HSV IgG抗体 若抗体呈不断上升趋势可提示近期感染。与传统方法比具备操作简单快捷敏感性高等特点。 11 育迟缓、脑发育不良、脑积水、精神神经障碍。 沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体 CTCTCTCT 沙眼衣原体生殖道感染是最常见性传播性疾病STD之一CTCTCTCT引起非淋菌性尿道炎的主要病原体之一并与多种生殖系疾病有关如输卵管炎、不孕不育、流产等 使用衣原体主要外膜蛋白MOMP特异性抗原检测特异性抗体与其他方法相比操作简单快速敏感性提高特异性有所降低。 在与培养法对照上在女性患者符合一致在男性方面表现一般。 检测适用范围检测适用范围检测适用范围检测适用范围 1、妇幼保健站常规检查 2、婚前、孕期检查 3、TORCH血清流行病学调查 生物芯片检测结果分析和判断生物芯片检测结果分析和判断生物芯片检测结果分析和判断生物芯片检测结果分析和判断 报告单的判读报告单的判读报告单的判读报告单的判读 定性分析 以TORCH IgM芯片为例 弓形虫弓形虫弓形虫弓形虫 TOXOTOXOTOXOTOXO 阳性阳性阳性阳性““““ ”””” 检测特异性IgM抗体可作为早期和现症病人的特异性诊断方法.IgM抗体阳性均提示为现症病人。新生儿血清中IgM抗体阳性提示为先天性感染。若仅弓形虫IgM抗体为阳性提示孕妇此时为原发性急性弓形虫感染。 风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒RVRVRVRV阳性阳性阳性阳性““““ ”””” 近期有风疹病毒感染。可能引起婴儿智力障碍、耳聋、小头畸形 巨细胞病毒巨细胞病毒巨细胞病毒巨细胞病毒 CMVCMVCMVCMV 阳性阳性阳性阳性““““ ”””” 提示体内有活动性感染可引起早产、流产、死胎及各种先天性畸形 单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒 HSVHSVHSVHSV 阳性阳性阳性阳性““““ ”””” 提示有HSV感染但脐血清中查出HSV IgM即可确诊为宫内感染。可引起婴儿小头症、小眼球、脑钙化或死亡 12 沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体 CTCTCTCT 阳性阳性阳性阳性““““ ”””” 主要是胎儿出生时引起产道感染的病原体。检出IgM提示CT感染 引起流产不育或异位妊娠、新生儿脑膜炎、结膜炎、肝炎。 定性分析和判断的其他方面 1、TORCH抗体检测芯片分为IgG IgM 因此可以联合使用以便于确认孕妇感染是否为原发性感染降低出生缺陷儿的风险但仍然需要结合多种情况进一步确诊。 2、凡TORCH检测IgM、IgG阴性育龄妇女都属于易感人群应关注孕期感染可能。 3、IgM阳性妇女为现症感染可疑患者如IgG和IgM均阳性的孕妇需治疗观察待IgM转阴后再怀孕 并建议六个月孕期时用B超监查是否有先天缺陷表征将发病风险降到最低。 4、IgM阴性IgG阳性孕妇的胎儿需密切关注建议间隔2周连续检测IgG抗体如抗体滴度显著上升可初步判断为感染活动期建议综合诊治。 5、TORCH的检测只是作为一种辅助诊断检测出阳性时建议进一步检测如基因检测等。 定量分析和判断 本芯片检测具备半定量分析功能报告单每个检测项目显示阳性后在图形中有数字显示可以帮助医生进一步观察和判断包括以下方面 1、定量数值代表患者抗体数量的程度与患者患病程度和周期具备一定的关联性 但不绝对 可以帮助医生更为准确判断病情 2、间隔一定时间的连续检测如果数值显.