医院检验科门诊常规检查作业指导书

医院检验科门诊常规检查作业指导书 XXXX医院检验科?门诊? , 目 录 采集末梢血(MYCH/DL-5-SC-01)------------------------------------------------1 采集静脉血(MYCH/DL-5-SC-02)------------------------------------------------2 尿沉渣检查(MYCH/DL-5-SC-03)------------------------------------------------5 尿液化学成份检查(MYCH/DL-5-SC-04)-----------------------------------------10 粪便常规(MYCH/DL-5-SC-05)-------------------------------------------------14 粪便隐血试验(MYCH/DL-5-SC-06)---------------------------------------------16 尿液蛋白定性(磺柳酸法)(MYCH/DL-5-SC-07)-----------------------------------19 尿液蛋白定性(加热醋酸法)(MYCH/DL-5-SC-08)---------------------------------20 尿本周氏蛋白定性(MYCH/DL-5-SC-09)-----------------------------------------22 尿液HCG定性(MYCH/DL-5-SC-10)---------------------------------------------24 RBC(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-11)----------------------------------------------25 Hb(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-12)-----------------------------------------------29 MCV(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-13)----------------------------------------------33 MCH(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-14)----------------------------------------------34 MCHC(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-15)---------------------------------------------36 RDW(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-16)----------------------------------------------37 WBC(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-17)----------------------------------------------39 WBC分类(三分群)(MYCH/DL-5-SC-18)-----------------------------------------43 ABO血型鉴定(MYCH/DL-5-SC-19)---------------------------------------------46 PLT(仪器法)(MYCH/DL-5-SC-20)----------------------------------------------49 脑脊液常规(MYCH/DL-5-SC-21)-----------------------------------------------51 浆膜腔积液常规(MYCH/DL-5-SC-22)-------------------------------------------55 阴道分泌物常规(MYCH/DL-5-SC-23)-------------------------------------------57 前列腺常规(MYCH/DL-5-SC-24)-----------------------------------------------59 WBC(手工法)(MYCH/DL-5-SC-25)----------------------------------------------60 PLT(手工法)(MYCH/DL-5-SC-26)----------------------------------------------62 幽门螺杆菌抗体检测(MYCH/DL-5-SC-27)---------------------------------------64 精液常规(MYCH/DL-5-SC-28)-------------------------------------------------68 , 采集末梢血 1(采集部位:受检者中指或无名指指尖腹内侧～婴、幼儿可采集拇 指、脚趾或脚跟内、外侧缘～采集部位的皮肤应该完整～不能有 烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。 2(采集方法:轻轻按摩采集部位～使采集部位自然充血。将皮肤消 毒液均匀喷洒于采集部位～1-3分钟后～左手拇指和食指固定采 集部位～右手持一次性消毒采血针～自指尖腹内侧迅速刺入～立 即拔出采血针。血液自然流出后～用消毒纸巾擦去第一滴血液～ 血液自然流出,不能自然流出时～在采集部位两侧轻轻挤压,并 成滴～用一次性微量吸管采集约30μl血液(检查项目增加～采 集血液量增加)。血液采集完成后～用消毒纸巾压住穿刺部位～ 嘱咐受检者按压约10分钟。用将20μl刻度线以外的血液加到 干净玻片上用于制作血液涂片～用干净纸巾沿一次性微量吸管管 口方向擦净管外～将吸管插入盛有稀释液的离心管底部～慢慢排 出管内血液～用上层液体洗净管内余血～盖紧管盖～轻轻颠倒混 匀。 3(血液涂片的制作:取血液一滴于载玻片右端～左手持载玻片～右 手持推玻片～从血滴前方向后移动～接触血滴～使其沿推玻片下 缘散开～推玻片与载玻片保持约30?平面夹角～以平稳的速度 将血液向前推进。血液在载玻片上形成一舌形,厚薄均匀,边缘 整齐,头、体、尾明显的血膜。 4(血液涂片的染色 , 4(1瑞特-吉姆萨染色原理:酸性染料伊红与细胞中的碱性物质,血 红蛋白、嗜酸性颗粒,结合～使其染成红色,碱性染料美蓝或天 青与细胞中的酸性物质,核染色质、嗜碱性颗粒、血小板、富含 核蛋白的细胞质,结合～使其染成蓝色,中性物质,白细胞核染 色质、中性粒细胞颗粒、血小板颗粒区,被染成紫色。 4(2染色试剂:I液:瑞特染料、吉姆萨染料、甲醇。 II液:磷酸盐缓冲液:pH6.4-6.8 4(3染色方法 4(3(1在干燥血膜的两端化线～防止染液外溢。 4(3(2在干燥血膜上滴加I液数滴～覆盖整个血膜～静臵1-2分钟。 4(3(3加II液,约为I液的2倍,～混匀后静臵5-6分钟。 4(3(4平持血片用流水缓缓冲洗干净～干燥后备用。 5(参考文献 朱立华～主编.临床基础检验学实验指导.北京:人民卫生出版社～1999～第1版。 寇丽筠～主编. 临床基础检验学.北京:人民卫生出版社～2001～第2版。 采集静脉血 1( 准备采血器具 1( 1双向采血针:打开采血针包装～旋下采血针白色盖子～将采 血针套进采血器并旋紧～备用。 , 1( 2一次性注射器:打开一次性注射器包装～不要取下无菌针帽～ 左手持针头下座～右手持针管～将针头与针管旋紧～使针头斜面 对准针管刻度～检查针管有无破损～备用。 2(选择静脉:受检者取坐位～前臂水平伸直臵于枕垫上。暴露穿刺 部位～让受检者穿刺部位上端衣袖保持宽松～选择容易固定～明 显可见的肘前静脉。肘部静脉不明显时～可以用手背静脉或内踝 静脉～婴、幼儿可于颈外静脉采血。 3(消毒:将皮肤消毒液距离穿刺部位皮肤表面5cm处均匀喷雾～喷 2洒面积不小于3cm。 4(扎压脉带:在采血部位之上扎压脉带,不能污染消毒部位,～嘱受 检者握紧拳头～让静脉充盈暴露。最好不使用压脉带～非使用不 可时～压脉带扎压时间不能过长～穿刺成功后～马上松开压脉带～ 扎压时间最好不超过半分钟。 5(穿刺采血 5( 1一次性注射器穿刺采血:取下针头无菌帽～以左手拇指固定 静脉穿刺部位下端～右手拇指和中指持注射器针筒～食指固定针 头下座～针头斜面和针筒刻度向上～沿静脉走向使针头与皮肤成 30?角斜行快速刺入皮肤～然后成5?角向前刺破静脉壁进入静脉 腔。见回血后～将针头顺势深入少许～以免采血时针钭滑出～但 不可用力深刺～以免穿破静脉造成血肿。以右手固定注射器～左 手松开压脉带～缓缓抽动注射器内芯至所需血量。 5(2双向采血针穿刺采血:取下针头无菌帽～以左手拇指固定静脉 , 穿刺部位下端～右手拇指和中指持采血器～食指固定针头下座～ 针头斜面和针筒刻度向上～沿静脉走向使针头与皮肤成30?角 斜行快速刺入皮肤～然后成5?角向前刺破静脉壁进入静脉腔。 见回血后～将针头顺势深入少许～以免采血时针钭滑出～但不可 用力深刺～以免穿破静脉造成血肿。以左手固定采血器～右手持 真空采血管～将采血针后端针头刺入采血管帽盖～采血管内的真 空被破坏～血液流入采血管内～根据需要采足所需血液。 6( 止血:采足所需血液后～嘱受检者松开拳头～用消毒棉签压住穿 刺孔～拔出针头～嘱受检者继续按压10-15分钟。 7( 放血和混匀:用注射器采集血液时～拔下针头～取下采血管帽盖～ 破坏真空～根据要求量将血液注入采血管内～盖紧帽盖～轻轻颠 倒4-6次,用双向采血针采集血液时～采足所需血液后～拔出采 血管～轻轻颠倒4-6次。 8( 注意事项 8(1尽量选择明显暴露静脉穿刺。当静脉暴露不明显时～可以用左 手食指经消毒液消毒后～在受检者采血部位触摸～发现静脉走向 后凭借手感的方向与深度进行试探性穿刺。 8(2用一次性注射器采血时～切忌将注射器回推～以免注射器中的 空气进入血管形成空气栓塞～造成严重后果。 8(3采血时～若遇受检者发生晕针～应立即拔出针头～让其平卧～ 休息片刻可以恢复。发生严重情况时～应立即启动紧急预案。 9(参考文献 , 朱立华～主编.临床基础检验学实验指导.北京:人民卫生出版社～1999～第1版。 寇丽筠～主编. 临床基础检验学.北京:人民卫生出版社～2001～第2版。 尿沉渣检查(仪器法) 1(实验原理 UF-50运用了流式细胞和电阻抗的原理。尿液被稀释和染色后～靠液压作用通过鞘液流动池。当反应样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动室时～它被一种无粒子颗粒的鞘液包围。然后～每个细胞以单个纵列的形式通过流动池中心,竖直,轴线～在这儿每个尿液细胞将被氩激光光束照射。每个细胞有不同程度的荧光强度,F1,～从染色尿液细胞发出的荧光主要反映细胞的定量特性,如细胞膜、核膜、线粒体、核酸,、散射光强度,测定的是前向角散射光～Fsc～它成比例地反映细胞的大小,和电阻抗的大小,电阻抗电信号主要与细胞的体积成正比,。仪器正是将这种荧光、散射光和电阻抗的信号转化为电信号～这些电信号～才能使得每个尿液标本产生直方图和散射图～然后分析这些图形～即可区分每个细胞并得出每个细胞的形态。UF-50可定量检测RBC、WBC、管型、上皮细胞、和细菌～还能标记出病理管型、小圆上皮细胞、结晶、酵母细胞、精子、其它、红细胞信息～还可测定总计数和电导率等。 2(样本采集 , 实验室工作人员必须对病人留取尿液进行正确指导。 建议受检者使用实验室提供的专用样本容器。不推荐受检者使用自己准备的样本容器～非使用不可时～实验室人员应将样本容器的要求告知受检者。 晨尿:清晨起床后第一次尿～为较浓缩和酸化的样本～血细胞、上皮细胞及管型等有形成分相对集中且保存较好～便于比较～适于可疑或已知泌尿系统疾病的动态观察和早孕试验。 随机尿:留取任何时间的尿液～易受饮食、运动、药物等的影响～可致低浓度或病理临界浓度的物质和有形成分漏检～也可出现饮食性糖尿或药物的干扰。 餐后尿:午餐后2小时留取的尿液～该样本对病理性糖尿和蛋白尿的检出更为敏感。 无论留取任何尿液样本～务必使尿道口保持清洁。 必须有足够的送检尿量,10ml以上,。 3(样本的运送 留取的样本应该在2小时内完成检验～如果样本收集后2小时内无法完成分析～可臵2-8?冷藏～6小时内完成检验,如仅做尿沉渣检查～可在样本中加适量防腐剂(400g/L甲醛溶液～每升尿液加入5ml。应注意甲醛过量时可与尿素产生沉淀物～干扰显微镜检查)。 4(样本的接收 在接受样本时,实验室工作人员应该检查以下内容:样本容器是否符合要求,留取样本的时间是否过长,样本是否被污染,样本量是 , 否足够,不少于10ml,～在特殊病例不可能达到此要求时如婴幼儿、烧伤、肾衰无尿期等～这些情况应在检验单上注明收到的样本量。 5(实验材料 5.1采用Sysmex公司配套试剂。 5.1.1试剂组成:UF-50专用稀释液,URINOPACK,、清洁剂、鞘液、UF-50专用染液,URINOSEARCH, 5.1.2贮存条件及稳定性: 清洁剂密闭避光保存可稳定半年。 UF-50专用稀释液密闭避光贮存可稳定10个月。 UF-50专用染液密闭避光贮存可稳定8个月。 鞘液密闭避光贮存可稳定12个月 5.2 校准品:由Sysmex公司提供。 质控品:由Sysmex公司提供～2-8?密闭避光保存可稳定12个月。 6(仪器设备 6.1 仪器 6.1.1 仪器名称:Sysmex尿沉渣分析仪 6.1 2 仪器厂家:Sysmex公司 6.1.3 仪器型号:Sysmex UF-50 6.1.4 仪器校准程序:由厂家提供的校准～具体由厂家工程师操作～满足相关。 7(操作步骤 , 7.1 见Sysmex UF-50尿沉渣分析仪操作维护规程,编号:MYCH/DL-5-PM-05, 7.2 分析流程:见图1。 8(结果判断与分析:UF-50提示REVIEW、UF-50结果与尿干化学结 果不相符～均应做显微镜检查。 9(计算方式:仪器自动计算。 10(参考值范围 白细胞,WBC,:0-25个/ul 红细胞,RBC,:0-25个/ul 小圆上皮细胞,SRC,:0-3个/ul 细菌,BACT,:0-8000个/ul 管型,CAST,:0-2个/ul 病理管型,Path CAST,:0-1个/ul 上皮细胞,EC,:0-20个/ul 精子,SPERM,:0-3个/ul 电导率,CONDCT,:19.8-42.5Ms/cm 结晶,XˊTAL,:0-15个/ul 类酵母细胞,YLC,:0-10个/ul 总粒子数,Total,:0-40000个/ul 11(质量控制: 作标本时同时测定质控品～以2S为警告限～3S为失控限～绘制 质控图～判断分析是否在控。 ,, 12(临床意义 12.1 红细胞增加～主要见于肾小球肾炎、泌尿系结石、结核或恶性 肿瘤、泌尿系血管畸形和出血性疾病等。利用红细胞信息可了解 红细胞形态从而鉴别血尿来源。 12.2 白细胞增加～见于泌尿系统感染、结石、结核和肿瘤。泌尿系 感染疾病的尿中往往同时存在白细胞和细菌～因此～检查尿液中 白细胞和细菌的存在是诊断泌尿系感染的重要指标。 12.3 上皮细胞:正常尿液中可见少量上皮细胞主要是鳞状上皮细胞 和移行上皮细胞,如数量增多～且可见小圆上皮细胞～提示泌尿 道有炎症或肾实质损害。 12.4 管型:透明管型可偶见于正常人清晨浓缩尿中,当有轻度或暂 时性肾或循环功能改变时～尿内可有少量透明管型,在肾实质性 病变如肾小球肾炎时～可见较多的颗粒管型。红细胞管型的出现 常见于急性肾小球肾炎等。颗粒管型的出现～提示肾单位有淤滞 的现象。脂肪管型的出现～见于慢性肾炎肾病型及类脂性肾病。 在慢性肾功能不全时～尿内出现肾衰竭管型～提示预后不良。蜡 样管型的出现提示肾脏有长期而严重的病变～见于慢性肾小球肾 炎的晚期和肾淀粉样变时。 12.5 细菌:主要用于泌尿系细菌感染的诊断。 12.6 导电率:对糖尿病、尿崩症的鉴别诊断、治疗具有十分重要的 意义,通过对尿导电率的高低监控～可以预防某些结石疾病的发 生～有利于结石疾病的治疗。 ,, 13(参考文献 13.1 叶应妩、王毓三～等～全国临床检验～东南大学出版社～第二版～1997,133 13.2 丛玉隆～王淑娟～等～今日临床检验学～中国科学技术出版社～第一版～1997～267-275 13.3寇丽筠～主编. 临床基础检验学.北京:人民卫生出版社～2001～第2版。 尿液化学成份测定,试带法, 1(实验原理 1.1 空白,校正块,:尿液在试纸上分布的状态和尿液本身的颜色～ 一般都会给测定结果带来误差～设空白块就是为了排除这些产生 误差的因素～各个项目都使用同一块空白块。 1.2 pH:通过pH指示剂,甲基红与溴麝香草酚蓝适量配合,测定4.5-9 的范围的pH值～正常人的新鲜尿液pH值在5-7之间。 1.3 亚硝酸盐,NIT,:反应依赖于尿中革兰氏阴性菌把硝酸盐还原成 亚硝酸盐～亚硝酸盐与对氨基苯砷酸反应生成重氮化合物～重氮 化合物再与萘基乙二胺二盐酸结合呈现出桃红色。 1.4 葡萄糖,GLU,:根据葡萄糖氧化酶反应原理～葡萄糖氧化酶特异 性氧化β-D-葡萄糖～生成葡萄糖醛酸和过氧化氢～过氧化氢在 过氧化物酶的作用下～是指示剂氧化而呈现蓝色。 1.5 蛋白质,PRO,:根据指示剂蛋白误差法原理～蛋白质与染料结合 ,, 形成复合物产生色变～特别是对白蛋白的反应比对球蛋白、血红 蛋白、本-周氏蛋白和粘蛋白更为灵敏。 1.6 隐血,BLD,:根据血红蛋白接触活性法原理～通过血红蛋白的类 过氧化物酶样作用催化分解过氧化物～使邻联甲苯胺氧化呈色。 1.7 尿比重,SG,:利用多聚电解质方法～尿中电解质与聚电解质发 生离子交换的原理。阳离子存在时～多聚物氢离子通过交换释出～ 使溴百里酚蓝指示剂发生颜色变化～颜色有蓝经过蓝绿最后变成 黄色。 1.8胆红素,BIL,:根据偶氮偶合法的原理～2～4-二氯苯胺重氮盐 与胆红素进行特异性反应～并与胆红素的浓度相对应产生的颜 色。 1.9 尿胆原,URO,:根据偶氮结合法的原理～尿胆原在强酸条件下和重氮盐偶联形成胭脂红色素。 1.10酮体,KET,:根据硝普酸钠法原理～硝普酸钠和酮体在碱性条 件下相互作用而呈现紫色～特别是乙酰乙酸对此特别灵敏。 1.11白细胞,WBC,:粒细胞胞浆内含有酯酶～这种酶能水解一种3 —羟基吡咯酯类底物～释放出酚从而与重氮试剂反应生成紫红色 化合物。 1.12维生素C,Vc,:根据Tillman’Reagent原理～Vc将染料有蓝 色还原成红色。本项目的测定目的是为了给使用者提供样本中 Vc的含量以判断其可能存在的干扰。 2(样本采集、运送、接收:同尿沉渣检查,编号:MYCH/DL-5-SC-03, ,, 3(实验材料 3.1试剂:采用桂林市医疗电子仪器厂生产的优利特Uritest A 11A 尿试纸条。2?-10?或30?以下干燥阴凉处保存～可稳定12个 月。 3.2校准品:由桂林市医疗电子仪器厂提供。 3.3质控品:由长春迪瑞实业有限公司提供～2-8?保存可稳定12个月。 4(仪器设备:优利特 Uritest-200B尿液分析仪。由厂家提供的校 准～具体由厂家工程师操作～满足相关标准。 5(操作步骤:见优利特 Uritest-200B尿液分析仪操作维护规程,文 件编号:MYCH/DL-5-PM-04, 6(结果的判断与分析:,不适用, 7(质量控制:作标本时同时测定质控品～以在质控品结果允许范围 内为在控。 8(参考值范围: pH:5.0-7.0 NIT:阴性 GLU:阴性 PRO:阴性 BLD:阴性 KET:阴性 BIL:阴性 URO:阴性或弱阳性 WBC:阴性 SG:1.015-1.025 9(临床意义: 9.1 pH降低:酸中毒、慢性肾小球肾炎、痛风、糖尿病等排酸增加, 呼吸性酸中毒～因CO2潴留～尿多呈酸性。 ,, 9.2 pH升高:频繁呕吐丢失胃酸、服用重碳酸盐、尿路感染、换气 过度及丢失CO2过多的呼吸性碱中毒～尿呈碱性。 9.3 比重增高:尿少时～比重可增高～见于急性肾炎、高热、心功能 不全、脱水等,尿量增多同时比重增加～常见于糖尿病。 9.4 比重降低:慢性肾小球肾炎、肾功能不全、尿崩症等。 9.5 蛋白阳性:分为功能性、体位性、病理性蛋白尿,病理性蛋白尿见于肾炎、肾病综合征等。 9.6 尿糖阳性:见于糖尿病、肾性糖尿病、甲状腺机能亢进等。内服 或注射大量葡萄糖及精神激动等也可致阳性反应。 9.7 酮体阳性:严重未治疗的糖尿病酸中毒患者可呈强阳性反应。妊 娠呕吐、长期饥饿、营养不良、剧烈运动后也可呈阳性反应。 9.8 胆红素阳性:肝实质性及阻塞性黄疸时～均可呈阳性反应。 9.9 尿胆原阳性:溶血性疾患及肝实质性病变如肝炎时为阳性。 9.10 隐血阳性:见于各种引起血管内溶血的疾病,血型不合引起急 性溶血、阵发性寒冷性或睡眠性Hb尿症,重度烧伤、毒蕈中毒、 毒蛇咬伤,自身免疫性溶血性贫血、SLE等。 9.11 NIT阳性:提示有大肠埃希菌感染。 9.12 白细胞阳性:同尿沉渣检查,编号:MYCH/DL-3-SC-13, 10(方法的局限性: 尿蛋白假阳性用10%磺柳酸确证～尿WBC假阳性用镜检确证。 11(参考文献 11.1叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南 ,, 大学出版社～1997～118-131 11.2寇丽筠～主编. 临床基础检验学.北京:人民卫生出版社～2001～第2版。 粪便检查 1(一般性状检查 1.1 颜色 根据观察所见报告～如黄色、褐色、土灰色、绿色、红色、柏油 样等。正常粪便因粪胆素而呈棕黄色～但可因饮食、药物或病理 原因影响而改变粪便颜色。灰白色见于钡餐后、服硅酸铝、阻塞 性黄疸、胆汁减少或缺乏。绿色见于食用含叶绿素的蔬菜后及含 胆绿素时。红色见于下消化道出血、食用西红柿、西瓜等。柏油 样便见于上消化道出血等。酱色常见于阿米巴痢疾、食用大量咖 啡、巧克力等。米泔水样见于霍乱。 1.2 性状 报告为软、硬、糊状、泡沫样、稀汁样、血水样、血样、粘液血 样、粘液脓样、有不消化实物等。正常时为有形软便。便秘时可 见球形硬便。粘液稀便见于肠壁受刺激或发炎时～如肠炎、痢疾 和急性血吸虫病等。粘液脓性血便多见于细菌痢疾。酱色粘液,可 带脓,便多见于阿米巴痢疾。稀汁样便可见于急性肠胃炎～大量 时见于伪膜性肠炎及隐孢子虫感染。米泔样便并有大量肠粘膜脱 落～见于霍乱、副霍乱等。扁平带状便:可能因直肠或肛门匣窄 ,, 所致。 1.3 寄生虫虫体:蛔虫、饶虫～绦虫节片等较大虫体～肉眼即可分辨。钩虫虫体常需将粪便冲洗过筛后方可看到。服驱虫剂后排便时应检查有无虫体。驱绦虫后应仔细寻找有无虫头。 2(粪便的显微镜检查 2.1 直接涂片镜检 2.1.1操作步骤 2.1.1.1 洁净玻片上加等渗盐水1~2滴～选择粪便的不正常部分～或挑取不同部位的粪便做直接涂片检查。 2.1.1.2 最好取大玻片～制成涂片后～应覆以盖片。涂片的厚度以能透过印刷物字迹为准。 2.1.1.3 在涂片中如发现疑似包囊～则在该涂片上加一滴碘液～在高倍镜下仔细鉴别～如仍不能决定时～可取全量粪便浓缩法检查。 2.1.2 虫卵的报告方式:未找到者注明“未找到虫卵”～找到一种报告一种～找到几种报告几种～并在该虫卵后面注明数量若干～以低倍视野计算。 2.1.3 注意将植物纤维及其细胞与寄生虫、人体细胞相鉴别～并注意有肌纤维、结缔组织、弹力纤维、淀粉颗粒、脂肪小滴球等。若大量出现～则提示消化不良或胰腺外分泌功能不全。 2.1.3 细胞中应注意红细胞、白细胞、嗜酸性粒细胞,直接涂片干后用瑞氏染色,、上皮细胞、巨噬细胞等。 2.1.4 夏科—雷登,Charcot-Leyden,结晶:为无色或浅黄色两端尖 ,, 而透明具有折光性的菱形结晶～大小不一。常见于肠道溃烂～尤以阿米巴感染粪便中最易检出。过敏性腹泻及钩虫病患者粪便中亦常可见到。 3(漂浮法查虫卵 3.1 本法适用于钩虫卵等线虫类虫卵。 3.2 操作步骤: 取拇指,蚕豆,大小粪便1块～放于大号青霉素瓶或小酒杯内～先加入少量饱和盐水,粗盐400g加水1000ml～应成饱和液～煮沸、冷却后～取上清夜,～用玻棒将粪便充分混合～再加上饱和盐水至瓶口。用洁净载玻片覆盖瓶口～静臵30~40min后～平执载玻片向上提拿～翻转后镜检。 4(参考文献:叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～140-141 粪便隐血检查(胶体金法) 1(实验原理 粪便隐血胶体金法是一种夹心式酶联免疫测定法～该法采用抗人血红蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体～特异性地针对粪便样品中的人血红蛋白,Hb,。因此本方法不受饮食的限制～能准确检测无症状、少量、持续、肉眼和显微镜下看不到的消化道出血～并且不受动物血或铁剂等药物干扰。 2(样本采集 ,, 取新鲜指头大小即可～放入大便专用杯标记后尽快送检。 3(实验材料 3.1 试剂主要组成成分:胶体金、抗HB单克隆抗体、抗HB单克隆21抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体。 3.2 试剂规格:1人份/条×100条/盒 3.3 试剂储存条件及稳定性:于4-30?避光保存可保存18个月～不得冻存。 4(操作步骤 4.1 将小试管臵试管架上～向小试管中滴0.5-1ml蒸馏水。 4.2 用采便棒在粪便样本的6个不同部位取便～并臵装有蒸馏水的小试管中～搅拌均匀。 4.3 将试纸条MAX线一端插入小试管中。1-3分钟后观察结果～最长不超过5分钟。 5(结果判断 5.1 阳性:在控制线,C,与反应线,T,均有色带出现～即两条色带～表明标本中有隐性出血。 5.2 阴性:只在控制线,C,出现一条色带～反应线,T,无色带出现～即一条色带～表明标本中无隐性出血。 5.3 无效,控制线,C,与反应线,T,均无色带出现～或只在反应线,T,出现一条色带～表明试验无效。请用新检测试纸重试。 6(检测性能 检测血红蛋白的范围是0.2μg/ml-2000μg/ml。 ,, 7(试验局限性 7.1可以帮助医生早期发现胃肠道病变～然而～由于家族性息肉或直肠癌可能不出血～或间断性出血～或出血在粪便中分布不均匀～都可造成阴性结果。所以需要连查三次以获得准确结果～只要有一次结果为阳性～就可认为有隐性出血存在。 7.2便隐血对正常人结果阳性～可能是由于某些药物,如阿司匹林等,刺激胃肠道造成的隐性出血。 7.3 如果处于月经期或有尿血～口鼻腔出血都将引起试验的假阳性。 7.3 便隐血胶体金检测试纸只是一种定性的筛查大便隐血的方法～并不能确定标本中的血量。 7.4 出现柏油样便～血红蛋白浓度超过2000μg/ml检测范围时会出现假阴性结果～此时需要充分稀释,50-100倍,便样后再进行测试。若血红蛋白在消化道内存留的时间太长～被肠道内细菌分泌的酶所降解～使其免疫原性被破坏而失去与抗体结合的能力～可导致反应线颜色变浅或假阴性的结果。此时应再连续检测2-3次～并结合临床进行判断。 7.5 对于可疑的结果应做进一步检查～并再进行连续检测。 7.6 像其他检测方法一样～便隐血胶体金检测试纸不能对胃肠道出血性病变做结论性的诊断～只能作为筛查或辅助诊断用。对于阳性结果～应结合临床做进一步的检查。 8(参考范围:阴性 9(临床意义 ,, 9.1 消化道出血时,如溃疡病、恶性肿瘤、肠结核、伤寒、钩虫病等,本试验可阳性。 9.2 消化道恶性肿瘤时～粪便隐血可持续阳性～溃疡病时呈间断阳性。 9.3 本法可作为消化道恶性肿瘤普查初筛试验。 10(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～142-143 尿液蛋白质定性检查(磺柳酸法) 1(实验原理:磺柳酸(又名磺基水杨酸)为生物碱试剂～在酸性环境下～其阴离子可与带阳电荷的蛋白质结合成不溶性蛋白盐而沉淀。 2(实验试剂:100g/L磺基水杨酸乙醇溶液:取磺基水杨酸20g～加水至100ml～取此液与等量95%乙醇或甲醛液混合。 3(实验操作: 3.1 取小试管加尿液3~5ml。 3.2 叠加100g/L磺基水杨酸乙醇溶液3~4滴～形成界面。 3.3 如尿显浑浊～表示有蛋白存在～浑浊深浅表示含量多少。 4(结果判断: 阴性:不显浑浊。尿液外观仍清晰透明。 微量,+-,:轻微浑浊～隐约可见。 阳性,+,:明显白色浑浊～但无颗粒出现。 ,, ,2+,:稀薄乳样浑浊～出现颗粒。 ,3+,:乳浊～有絮片状沉淀。 ,4+,:絮状浑浊～有大凝块下沉。 5(附注: 5.1 磺基水杨酸法较敏感,0.05~0.1g/L,。 5.2 如尿液浑浊～应先离心或过滤,强碱性尿可出现假阴性～应加5%醋酸溶液数滴酸化后再作试验。 5.3 有机碘造影剂、超大剂量使用青霉素等均可致假阳性。 5.4 尿中含高浓度尿酸或尿酸盐时～可呈假阳性～但出现的反应与尿蛋白不同～加试剂1~2min后出现白色点状物～向周围呈毛刺状突起～并慢慢形成雾状。 6(参考值:阴性 7(临床意义:分为功能性、体位性、病理性蛋白尿～后者见于肾炎、肾病综合征等。 8(参考文献: 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～120-121 尿液蛋白质定性检查(加热醋酸法) 1(实验原理 加热可使蛋白质变性凝固,加酸可使蛋白质接近等电点,促使蛋白沉 ,, 淀。此外,加酸还可溶解碱性盐类沉淀物。 2(实验试剂 2.1 5%醋酸溶液 2.2 50%醋酸溶液 2.3 饱和氯化钠溶液 3(实验操作 3.1 倾约10ml新鲜清晰尿液于一耐热的12mm×100mm试管内。 3.2 将试管斜臵在火焰上～煮沸上部尿液。 3.3 滴加5%醋酸3~4滴～再煮沸后～立即观察结果。如有浑浊或沉淀～提示尿内含有蛋白质。 4(结果判断: 阴性:不显浑浊。 微量,+-,:在黑色背景下呈轻微浑浊。 弱阳性,+,:呈明显白雾状。含蛋白量约伪.1~0.5g/L 阳性,2+,:呈浑浊～有明显颗粒～含蛋白质量约伪.5~2.0g/L 强阳性,3+,:大量絮片状沉淀～浑浊～含蛋白质量约为2.~5.0g/L 最强阳性,4+,:出现凝块并有大量沉淀～含蛋白质量为>5.0g/L 5(附注: 5.1 加5ml尿液、1ml50%醋酸液及3ml饱和氯化钠溶液～如有粘蛋白存在～可防止其沉淀。 5.2 本试验干扰因素少～检出敏感度为0.15g/L。 5.3 加酸过多～远离蛋白等电点～蛋白质微粒获得电荷增加～可呈 ,, 假阴性。 5.4 无盐或低盐饮食的患者因尿内电解质含量少～可致假阴性。试验时可先加1~2滴饱和氯化钠溶液于尿液中～再进行操作。 6(临床意义 见尿液蛋白质检查(磺柳酸法)(编号:MYCH/DL-5-SC-07) 7(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～120-121 本-周氏,Bence-Jones,蛋白定性检查,过筛法-热沉淀反应法, 1(实验原理 本-周氏蛋白又称凝溶蛋白～是一种免疫球蛋白的轻链或其聚合 体。此种蛋白在一定的pH条件下加热至40-60?时有沉淀发生～ 温度升高至100?～沉淀消失～再冷却时又可重现沉淀。 2(试剂 2.1 200g/l磺基水杨酸溶液, 2.2 2mol/l醋酸盐缓冲溶液,pH4.9?0.1,, 3(操作步骤 3.1先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查～如呈阴性反应～则 可认为尿液标本中本- 周氏蛋白阴性。 3.2取透明尿液4ml于试管中～再加入醋酸盐缓冲液1ml～混匀后～ 放臵56?水浴中15min。如有浑浊或出现沉淀～再将试管放入 沸水中～煮沸3min～观察试管中浑浊或沉淀的变化～如浑浊 ,, 变清或浑浊减弱或沉淀减少～均提示本-周氏蛋白阳性。若煮 沸后～浑浊增加或沉淀增多～表明此尿液中还有其他蛋白质～ 此时应将试管从沸水中取出～立即过滤。如滤液开始透明～温 度下降后浑浊～再煮沸时又透明～提示本-周氏蛋白为阳性。 4(附注 4.1尿液应新鲜～否则因白蛋白)球蛋白分解变性而干扰试验。 4.2浑浊尿不能用～应离心沉淀～取用上清尿液作试验。 周氏蛋白～在90?以上不易完全溶解～故需与对照4.3过多的本- 管比较～也可将尿液稀释后再测。 4.4煮沸过滤除去尿中白)球蛋白时～动作要迅速～并需保持高温～ 否则本-周氏蛋白也会滤去。 4.5甲机苯磺酸法比沉淀反应法灵敏度高～但有假阳性。 5(临床意义 5.1一般认为～当浆细胞恶性增殖时～可能有过多的轻链产生或重 链的合成被抑制～致使过多的轻链通过尿液排出。 5.2约50%的多发性骨髓瘤患者及与约15%的巨球蛋白血症患者～ 其尿液可出现半-周氏蛋白。 5.3肾淀粉样变)慢性肾盂肾炎及恶性淋巴瘤患者等～亦可出现半-周氏蛋白。 6(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～123 ,, 绒毛促性腺激素检测(金标抗体检测法) 1(实验原理:应用层析双抗体夹心法的原理快速检测尿液中hCG。 两个抗人β-hCG单克隆抗体,抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体 和抗鼠lgG多克隆抗体,～一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜,NC 膜,上～另一个抗体结合于金溶胶颗粒表面。尿液中hCG先与 NC膜上的抗体结合～然后再与金标单抗溶液反应～于是形成抗 体–hCG-金标抗体的夹心式复合物～显现出红色的金斑点。 2(标本采集:随机尿即可 3(操作步骤 3.1 待测样品、检测试纸或其他检测用材料等均在室温平衡,20-30度,后取出试纸。 3.2 将测试纸有箭头的一端插入尿液标本容器中～至少5秒钟后取出平放～5分钟内观察显示结果。 3.3 测试纸插入尿液深度不可超过MAX标志线。 4(结果判断 阳性:在质控点和测定点各出现一条红色反应线。 阴性:仅在质控点出现出现一条红色反应线。 5(质量控制:若质控点与测定点均不呈现红色～表示试剂失效。 6(临床意义 6.1本试验主要用于妊娠的诊断。用敏感的方法～在受孕2-6天即可呈现阳性。 ,, 6.2 用于与妊娠相关疾病和肿瘤的诊断及鉴别诊断。 6.3 过期流产或不完全流产～子宫内仍有活胎盘组织时～本试验仍 呈阳性。 6.4 人工流产后～如果仍呈阳性～提示子宫内尚有残存胚胎组织。 6.5 宫外孕时～hCG低于正常妊娠～仅有60%阳性。 7(方法的局限性 7.1 本试纸检测结果仅供参考。 7.2 当hCG浓度很高时～检测线颜色可能变浅～属正常现象。 7.3 酒精可能干扰实验结果～建议饮酒后不宜使用。 7.4 怀孕初期尿液中的hCG尿液浓度很低～可能测定的结果为阴性。 这种情况下 若被测试者仍怀凝有受孕可能～可在48-72小时后 重新收集晨尿再次测定。 7.5子宫肿瘤～葡萄胎或更年期病人～因尿中hCG含量较高可能会出现阳性结果。 7.6怀凝异常妊娠时～应结合其他方法进行诊断。 8(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～135 红细胞(RBC)测定,直流检测法, 1(实验原理: ,, 直流电电阻法的直流电测量系统的红细胞检测部件带有口径与细胞大小尺寸相同计数孔的传感器～与每个传感器相毗连的是一个内电极和一个外电极。传感器和电极插在一种导电的稀释液中。在内外电极之间通过稀释液传导着一恒定的直流电电流(DC)。非导电性的白细胞悬浮在导电的稀释液中,在计数过程中当一个细胞通过计数孔时～使电极间的电阻增加。该电阻是与细胞体积成正比的。从而引起电极间电压差的改变。电压的改变被称为细胞脉冲。此原理是以欧姆定律为基础的。表达式如下: E=I×R 式中E为电压,I为电流,R为电阻。 由于电流(I)是恒定的,任何原因(如细胞)引起电阻(R)的升高。将导致电压差,E,成正比的改变。这些电压的微小改变被放大～电子干扰或假信号则被滤波电路所消除。经放大的细胞脉冲被传递至PDA(颗粒分布分析)电路以产生直方图。 2(样本采集 静脉:EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液2 +500μl稀释液～混匀。 3(样本存放 室温放臵不超过12小时～4?保存不超过48小时 4(样本运输 2—8?运输 5(样本拒收的标准 ,, 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6(实验材料 6.1 采用SySmex公司配套试剂。 6.2试剂组成: 稀释液、清洁液、溶血素 6.3贮存条件及稳定性 稀释液密闭避光贮存可稳定12个月。 清洁液密闭避光保存可稳定半年。 血红蛋白溶血素密闭避光保存可稳定10个月。 白细胞三分类溶血素密闭避光贮存可稳定10个月 6.4 校准品:由SySmex公司提供。 质控品:四川迈克公司生产～2-8?密闭避光保存可稳定6个月, 开瓶后2-8?密闭避光保存可稳定15天。 7(仪器设备 7.1 仪器名称:SySmex血细胞分析仪 7.2 仪器厂家:SySmex公司 7.3 仪器型号:SySmex KX-21 7.4 仪器校准程序:满足卫生部临床检验中心的厂家提供的校准 物～具体由厂家工程师操作～满足相关标准。 8(操作步骤 8.1 见SySmex KX-21血细胞分析仪操作维护规程,文件编号: MYCH/DL-5-PM-01或 MYCH/DL-5-PM-02, ,, 8.2 分析流程:全血样本从全血吸样针被吸入SRV内?4μl样本,在 SRV内量取,被1.996mL的稀释液作1:500倍的稀释～并被送 入混合室?40μl稀释样本,在SRV内量取,被1.960mL的稀释 液作1:25000倍的稀释～然后被送入RBC/PLT检测器?稀释的 样本通过计数孔～其中250μl被定量器测量～然后RBC检测器使 用DC法计算RBC数。预稀释,1:26,样本由旋转阀定量2.08 μl～用1.99792ml稀释液作1:25000稀释～送入RBC/PLT检测 器～250μl用于定量检测。 9(结果的判断与分析,不适用, 10(质量控制 作标本时同时测定质控品～以2S为警告限～3S为失控限～绘制质控图～判断分析是否在控。 11(计算方法 由仪器自动计算 12(参考值范围 12男:(4~5.5)×10/L 12女:,3.5~5,×10/L 12新生儿:,6~7,×10/L 13(临床意义 增加或减少见血红蛋白测定。一般情况下红细胞数与血红蛋白浓 度之间有一定的比例关系～但在部分贫血患者～同时测定二者～ 对贫血诊断和鉴别诊断有帮助。 ,, 14(分析性能 121214.1 线性范围: 0.30，0.99×10/L ,?0.03×10/L 以内 121.00，7.00×10/L, ?3.0 %以内 1214.2 重复性:,2,,4.0×10/L 以上,。 1214.3 准确性:全血?2%或?0.03×10/L 以内,预稀释样本?3%或 12?0.05×10/L 以内。 15(超出范围的结果处理,不适用, 16(病危报警值的处理,不适用, 17(方法的局限性 在冷凝集疾病、小红细胞增多症、红细胞碎裂、白细胞增多症 9,>100×10/L,等疾病可能引起RBC假性升高或降低。 18(参考文献 18.1 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～4 18.2 SySmex KX-21中文操作说明书 血红蛋白(Hb)测定,SLS-血红蛋白法, 1.实验原理 按照惯例～最常用的自动检测血红蛋白的方法是氰化高铁血红蛋白法。尽管它具有很多优点～但是当在运用于一台大型的全自动检测仪时～该法也显示出了一些不足之处。1966年～ICSH,国际血液 ,, 学标准化委员会,推荐氰化高铁血红蛋白法作为国际标准。但是血红蛋白的转化非常缓慢～这种方法并不适用于快速的自动化的多样本分析操作。此外～氰化物是一种有毒性的物质～需要对废液进行特殊的处理～从而在另一方面限制了氰化高铁血红蛋白法的应用。另一种测定血红蛋白的方法是氧合血红蛋白法。而SLS-血红蛋白测定法则综合地运用了上述两种方法中的精华部分。同氧合血红蛋白法一样～SLS-血红蛋白法适用于自动分析。因为血红蛋白的转化速度比较快且整个过程不涉及到任何有毒物质。由于高铁血红蛋白是可以被检测分析的～这就保证了含有高铁血红蛋白的质控样本可以被精确的检测。 2(样本采集 EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液+500μl2 稀释液～混匀。 3(样本存放 室温放臵不超过半小时～4?保存不超过48小时。 4(样本运输 2—8?运输。 5(样本拒收的标准 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6(实验材料 6.1 采用SySmex公司配套试剂。 6.2试剂组成:稀释液、清洁液、溶血素。 ,, 6.1.2贮存条件及稳定性 稀释液密闭避光贮存可稳定12个月。 清洁液密闭避光保存可稳定半年。 血红蛋白溶血素密闭避光保存可稳定10个月。 6.2 校准品:由SySmex公司提供。 质控品:四川迈克公司生产～2-8?密闭避光保存可稳定6个月, 开瓶后2-8?密闭避光保存可稳定15天。 7(仪器设备 7.1 仪器名称:SySmex血细胞分析仪 7.2 仪器厂家:SySmex公司 7.3 仪器型号:SySmex KX-21 7.4 仪器校准程序:满足卫生部临床检验中心规定的厂家提供的校 准～具体由厂家工程师操作～执行相关标准。 8(操作步骤 8.1见Sysmex KX-21血细胞分析仪操作维护规程,文件编号: MYCH/DL-5-PM-01或MYCH/DL-5-PM-02, 8.2 分析流程:全血样本从全血吸样针被吸入SRV内?6μl样本,在 SRV内量取,被1.994mL的稀释液作1:333倍的稀释～稀释样 本被送入流动池。同时～加入用于HGB测定的1.0mL的血红蛋白 溶血素以溶解红细胞～并将血红蛋白转化成SLS-血红蛋白～最 后的稀释比为1:500?从发光二极管中发出555纳米波长的光 波透过镜头照在比色池中～根据血红蛋白自身对光的吸收强弱与 ,, 加入样本之前空白质控的对比就可计算出SLS-血红蛋白的浓度。 预稀释样本,1:26,由旋转阀定量78μl～用稀释液1.922ml 被移送到WBC检测器～加入1.0ml溶血剂～并将血红蛋白转化成 SLS-血红蛋白～最后的稀释比为1:500?从发光二极管中发出 555纳米波长的光波透过镜头照在比色池中～根据血红蛋白自身 对光的吸收强弱与加入样本之前空白质控的对比就可计算出 SLS-血红蛋白的浓度。 9( 结果的判断与分析,不适用, 10(质量控制 作标本时同时测定质控品～以2S为警告限～3S为失控限～绘制 质控图～判断分析是否在控。 11(计算方法 由仪器自动计算 12(参考值范围 男:120-160g/L,女:110-150 g/L,新生儿:170-200 g/L。 13(临床意义 13.1 增加: 13.1.1 生理性增加:初生儿、高原居住者。 13.1.1 病理性增加:真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症,如先天性青紫性心脏病、慢性肺脏疾病、脱水,。 13.2 减少:各种贫血、白血病、产后、手术后、大量失血等。 14(精度 ,, 全血:,1.5%。预稀释样本:,2.5%。 15(超出范围的结果处理,不适用, 16(病危报警值的处理,不适用, 17(方法的局限性:严重脂血、黄疸、高白细胞、肝脏疾病等可影响 结果。 18(参考文献 18.1叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～169-173 18.2 SySmex KX-21中文操作说明书 红细胞平均体积(MCV)测定 1.实验原理 由微处理器计算而得:MCV由RBC和HCT计算得出: 1213MCV(fl),„HCT(%)/RBC(10/L)?×10 2.标本采集 EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液+500μl2 稀释液～混匀。 3.标本存放 室温放臵不超过12小时～4?保存不超过48小时。 4.标本运输 2—8?运输 ,, 5.标本拒收的标准 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6.实验材料 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 7.仪器设备 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 8.操作步骤,略, 9.结果的判断与分析,不适用, 10.参考值范围:82~95(fl) 11.临床意义 11.1大细胞性贫血:大于参考值高值。 11.2单纯小细胞性贫血和小细胞低色素性贫血:小于参考值低值。 12.超出范围的结果处理,不适用, 13.病危报警值的处理,不适用, 14.方法的局限性,不适用, 15.参考文献 15.1叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南 大学出版社～1997～13 15.2 SySmex KX-21中文操作说明书 平均红细胞血红蛋白含量(MCH)测定 ,, 1.实验原理 由微处理器计算而得:MCV由RBC和HGB计算得出: 1212MCH(pg),„HGB(g/L)/RBC(10/l)?×10 2.标本采集 EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液+500μl2 稀释液～混匀。 3.标本存放 室温放臵不超过12小时～4?保存不超过48小时。 4.标本运输 2—8?运输 5.标本拒收的标准 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6.实验材料 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 7.仪器设备 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 8.操作步骤,略, 9.结果的判断与分析,不适用, 10.参考值范围:27~32(pg) 11.临床意义 11.1大细胞性贫血:大于参考值高值。 11.2单纯小细胞性贫血和小细胞低色素性贫血:小于参考值低值。 ,, 12.超出范围的结果处理,不适用, 13.病危报警值的处理,不适用, 14.方法的局限性,不适用, 15.参考文献 15.1叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～13 15.2 SySmex KX-21中文操作说明书 平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)测定 1.实验原理 由微处理器计算而得:MCV由HCT和HGB计算得出: MCHC(g/L),„HGB(g/L)/HCT(%)?×10 2.标本采集 EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液+500μl2 稀释液～混匀。 3.标本存放 室温放臵不超过12小时～4?保存不超过48小时。 4.标本运输 2—8?运输 5.标本拒收的标准 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 ,, 6.实验材料 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 7.仪器设备 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 8.操作步骤,略, 9.结果的判断与分析,不适用, 10(参考值范围:320~360(g/L) 11(临床意义 小细胞低色素性贫血:小于参考值低值。其他贫血类型均正常。 12(超出范围的结果处理,不适用, 13(病危报警值的处理,不适用, 14(方法的局限性,不适用, 15(参考文献 15.1叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南 大学出版社～1997～13 15.2 SySmex KX-21中文操作说明书 红细胞分布宽度 (RDW)测定 1(实验原理 红细胞分布宽度,RDW,采用红细胞分布宽度变异系数,RDW-CV, ,, 和红细胞数学分布宽度,RDW-SD,来表示。 RDW-CV采用下面的公式计算X轴上68.26%的可信区间L1和L2。 L2-L1 RDW-CV,%,= ×100 L2+L1 RDW-SD是在波峰100%上的20%水平上测量的数学分布宽度。 2(标本采集 EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液+500μl2 稀释液～混匀。 3(标本存放 室温放臵不超过12小时～4?保存不超过48小时。 4(标本运输 2—8?运输。 5(标本拒收的标准 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6(实验材料 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 7(仪器设备 见血红蛋白测定,文件编号:MYCH/DL-5-SC-12, 8(操作步骤,略, 9(结果的判断与分析,不适用, ,, 10(参考值范围: RDW-CV:10-16% RDW-SD:37-54fl 11(临床意义 11.1用于缺铁性贫血,RDW增高,和β-轻型海洋性贫血的鉴别,RDW 88%正常,, 11.2用于缺铁性贫血早期诊断, 11.3用于贫血的形态学分类:RDW正常为均一性～RDW增高为不均一性。 12(超出范围的结果处理,不适用, 13(病危报警值的处理,不适用, 14(方法的局限性,不适用, 15(参考文献 15.1丛玉隆～王淑娟～今日临床检验学～第一版～中国科学技术出版社～1997～8-9 15.2 SySmex KX-21中文操作说明书 白细胞(WBC)测定,直流检测法 1(实验原理 仪器自动将一定量的血液样本,样品量已预先设定好,吸入～并以一个指定的稀释倍数将其稀释。稀释后的样本被送入各个检测室。在每一个检测室内都有一个被称为“小孔”的微小孔隙。在它的两侧各有一个电极～两电极之间有直流电通过。当悬浮在稀释液中的 ,, 血细胞通过小孔时～两电极之间的电阻将会发生改变。这种电阻的改变会产生了一个电脉冲～它的幅度和通过其间的血细胞的大小成正比。 通过记录这些脉冲的幅度就可以画出一张粒子大小的分布图。它反映了通过血细胞的大小。从这个粒子大小分布图上可以得到多种类型的数据分析资料。 2(标本采集 EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液+500μl2 稀释液～混匀。 3(标本存放 室温放臵不超过12小时～4?保存不超过48小时。 4(标本运输 2—8?运输 5(标本拒收的标准 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6(实验材料 6.1 采用SySmex公司配套试剂。 6.1.1试剂组成: 稀释液、清洁液、溶血素 6.1.2贮存条件及稳定性 稀释液密闭避光贮存可稳定12个月。 清洁液密闭避光保存可稳定半年。 ,, 血红蛋白溶血素密闭避光保存可稳定10个月。 白细胞三分类溶血素密闭避光贮存可稳定10个月。 6.2 校准品:由SySmex公司提供。 质控品:四川迈克公司生产～2-8?密闭避光保存可稳定6个月, 开瓶后2-8?密闭避光保存可稳定15天。 7(仪器设备 7.1 仪器 7.1.1 仪器名称:SySmex血细胞分析仪 7.1 2 仪器厂家:SySmex公司 7.1.3 仪器型号:SySmex KX-21 7.1.4 仪器校准程序:执行部检验中心规定的厂家提供的校准～具体 由厂家工程师操作～满足相关标准。 8(操作步骤,手动模式, 8.1见Sysmex KX-21血细胞分析仪操作维护规程,文件编号: MYCH/DL-5-PM-01或MYCH/DL-5-PM-02, 8.2分析流程:全血样本从全血吸样针被吸入SRV内?6μl样本,在 SRV内量取,被1.994mL的稀释液和1.0mLWBC溶血素作1:500 倍的稀释。在此条件下反应约10秒～红细胞被溶解而血小板则 收缩。?稀释的样本通过计数孔～其中500μl由定量器测量～然 后系统用 DC法计算血样本通过计数孔所产生的脉冲总数。预 稀释样本,1:26,由旋转阀定量78μl ～在WBC检测器被1.992mL 的稀释液和1.0mLWBC溶血素作1:1000的稀释。在此条件下反 ,, 应约10秒～红细胞被溶解而血小板则收缩。?稀释的样本通过 计数孔～其中500μl由定量器测量～然后系统用DC法计算血样 本通过计数孔所产生的脉冲总数。 9.结果的判断与分析,不适用, 10.质量控制 作标本时同时测定质控品～以2S为警告限～3S为失控限～绘制质控图～判断分析是否在控。 11.计算方法 由仪器自动计算 12.参考值范围 99成人:(3.2-9.7)×1O/L,儿童:(5-12) ×10/L , 9新生儿:(15-20) ×10/L 13.临床意义 13.1增加: 13.1.1生理性增加:初生儿、妊娠末期、分娩期、经期、饭后、剧 烈运动后、冷水浴后及极度恐惧与疼痛等。 13.1.1病理性增加:大部分化脓性细菌所引起的炎症、尿毒症、严重 烧伤、传染性单核细胞增多症、急性出血、组织损伤、手术创伤 后、白血病等。 13.2减少:病毒感染、伤寒、副伤寒、黑热病、疟疾、再生障碍性贫 血、极度严重感染、X线及镭照射、肿瘤化疗后、非白血性白血 病等。 ,, 14.分析性能 9914.1 线性范围: 1.0---9.9,×10/L, ?0.3,×10/L,以内 9 10.0-99.9,×10/L, ?3%以内 914.2 重复性:,3.5%(4.0×10/L以上) 914.2 准确性:全血?3%或?0.2,×10/L,以内,预稀释样本?5% 9或?0.3,×10/L,以内。 15.超出范围的结果处理,不适用, 16.病危报警值的处理 9<0.5×10表示病人受感染的危险性很大～应采取预防措施并仔细监测观察感染, 9>30×10有白血病的可能～应作分类计数、血涂片及骨髓检查。 17.方法的局限性 新生儿、肝脏疾病可因红细胞不能完全溶解而至WBC假性升高。 18.参考文献 18.1叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～4-5 18.2 Sysmex KX-21中文操作说明书 白细胞分群测定,直流检测法, 1(实验原理 经过溶血剂处理后的白细胞根据体积大小初步确认其相应的细胞 ,, 群:第一群,35-90fl,是小细胞区～主要是淋巴细胞。第二群,90-160fl,是单个核细胞区～也被称为中间细胞,MID,～包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞～核象左移或白血病可有的各阶段幼稚细胞及白血病细胞。第三群,160fl以上,是大细胞区～主要是中性粒细胞,GRAN,。仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率。各亚群的百分率与该标本的白细胞总数相乘～即得到各类细胞的绝对值。 2(样本采集 EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl血液+500μl2 稀释液～混匀。 3(样本存放 室温放臵不超过12小时～4?保存不超过48小时。 4(样本运输 2—8?运输 5(样本拒收的标准 细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6(实验材料:同白细胞测定,直流检测法,,编号:MYCH/DL-5-SC-17, 7(仪器设备:同白细胞测定,直流检测法 ,编号:MYCH/DL-5-SC-17, 8(操作步骤:同白细胞测定,直流检测法 ,编号:MYCH/DL-5-SC-17, 9(结果的判断与分析 根据白细胞直方图图形和各群细胞比例粗略判断是否需做显微镜检查～进一步作血涂片分类计数。 ,, 10(质量控制 作血涂片分类计数～其结果与仪器结果比较～不符合者以手工分 类为准。 11(计算方法 由仪器自动计算 12(参考值范围 9小细胞比值:0.178-0.470 小细胞绝对值:1.0-3.3×10/ L 9中间细胞比值:0.035-0.079 中间细胞绝对值:0.2-0.7×10/ L 9大细胞比值:0.460-0.765 大细胞绝对值:3.5-5.0×10/ L 13(临床意义 13.1增多: 13.1.1中性粒细胞:急性化脓感染、粒细胞白血病、急性出血、溶 血、手术后、尿毒症、酸中毒、急性汞中毒、急性铅中毒等。 13.1.2嗜酸性粒细胞:变态反应、寄生虫病、某些皮肤病、某些血液 病、手术后、烧伤等。 13.1. 3嗜碱性粒细胞:慢性粒细胞白血病、何杰金病、癌转移、铅 及铋中毒等。 13.1.4 淋巴细胞:百日咳、传单、慢淋、麻疹、腮腺炎、结核、传 染性肝炎等。 13.1.5 单核细胞:结核、伤寒、亚急性感染性心内膜炎、疟疾、黑 热病、单核细胞白血病、急性传染病的恢复期等。 13.2减少: ,, 13.2.1中性粒细胞:伤寒、副伤寒、疟疾、流感、化学药物中毒、X 线及镭照射、肿瘤化疗后、极度严重感染、再生障碍性贫血、粒 细胞缺乏等。 13.2.2嗜酸性粒细胞:伤寒、副伤寒、以及应用肾上腺皮质激素后。 13.2.3淋巴细胞:多见于传染病急性期、放射病、细胞免疫缺陷等。 14(危报警值的处理 异常白细胞直方图应作血涂片分类计数检查。 15(方法的局限性,不适用, 16(参考文献 16.1叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南 6 大学出版社～1997～ 16.2 Sysmex KX-21中文操作说明书 16.3 寇丽筠主编～临床基础检验学～第二版～人民卫生出版社～1997～37 ABO血型鉴定,单克隆抗体法 1(实验原理:根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原～将血型分为A型、B型、AB型、O型4种。可利用红细胞凝集试验～通过定型准确鉴定ABO血型。抗A、抗B血型定型试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。当已知的抗A、抗B定型试剂与受检者的红细胞混合时～与抗A定型试剂发生凝集者即为A型血型～与抗B定 ,, 型试剂发生凝集者即为B型血型～与抗A、抗B定型试剂均发生凝集者即为AB型血型～与抗A、抗B定型试剂均不凝集者即为O型血型。 2(试剂 2.1 试剂组成:抗A血型定型试剂～抗B血型定型试剂～生理盐水。 2.2 试剂储存及稳定性:2-8?避光保存,可稳定1年。 2.3 试剂厂家:南京华欣药业生物工程有限公司。 3(检查方法 3.1 平板法,玻片法, 3.1.1 取清洁玻片1张(或白瓷板1块)～用蜡笔划出小格～标明A、B字样。 3.1.2 将抗A定型试剂、抗B定型试剂各1滴分别于标明的小格内。 分别取等体积待检血样,5-10%红细胞悬液或全血,于抗A定 型试剂和抗B定型试剂处～用不同的竹签将定型试剂与待检血 样调匀～同时不停地摇动玻片～按照有无凝集判断结果。 3.2 试管法 3.2.1取洁净小试管(内径10mm×60mm)2支～分别标明A、B字样～ 向A管滴加抗A定型试剂1滴～向B管滴加抗B定型试剂1滴。 向A、B管各滴加待检血样的2%红细胞盐水悬液各1滴～摇匀 1000r/min离心1min或室温放臵1小时～按照有无凝集判断 结果。 4(结果判断 ,, 血型定型试剂 血型 抗A 抗B A + - B - + O - - AB + + 表示阴性即未见凝集，红细胞均匀分布。 + 表示阳性即发生了凝集;- 5(实验局限性 5.1 对含有较多自身冷凝集素的受检者～在鉴定血型时往往被误定为 AB血型～遇到此种情况～需用37?生理盐水洗涤受检者红细胞 2-3次～以除去吸附在红细胞上的冷凝集素～然后鉴定血型。 5.2观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。 6(实验注意事项 6.1本品如出现浑浊或变色则不能使用～用毕后应放臵冰箱保存～以免细菌污染。 6.2试管、滴管和玻片必须清洁干燥～防止溶血。 6.3离心时间不宜过长或过短～速度不宜过快或过慢～以防假阳性或假阴性结果。 7(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～89-90 ,, 血小板(PLT)测定,直流检测法, 1(实验原理: 仪器自动将一定量的血液样本,样品量已预先设定好,吸入～并以一个指定的稀释倍数将其稀释。稀释后的样本被送入RBC/PLT检测室。在检测室内有一个被称为“小孔”的微小孔隙。在它的两侧各有一个电极～两电极之间有直流电通过。当悬浮在稀释液中的PLT通过小孔时～两电极之间的电阻将会发生改变～电阻的改变引起电脉冲的改变～其脉冲的大小与PLT的大小成正比。 2(标本采集: EDTA-K抗凝～抽静脉血2.0ml,混匀。末梢血:20μl2 血液+500μl稀释液～混匀。 3(标本存放: 室温放臵不超过半小时～4?保存不超过48小时 4(标本运输: 2—8?运输 5(标本拒收的标准:细菌污染～出现凝块～抗凝剂不符合要求的标本不能作测定。 6(实验材料:同红细胞测定,编号:MYCH/DL-5-SC-11,。 7(仪器设备:同红细胞测定,编号:MYCH/DL-5-SC-11,。 8(操作步骤 8.1 见Sysmex KX-21血细胞分析仪操作维护规程,文件编号: MYCH/DL-5-PM-01或MYCH/DL-5-PM-02,。 8.2 分析流程:全血样本从全血吸样针被吸入SRV内?4μl样本,在 SRV内量取,被1.996mL的稀释液作1:500倍的稀释～并被送 ,, 入混合室?40μl稀释样本,在SRV内量取,被1.960mL的稀释 液作1:25000倍的稀释～然后被送入RBC/PLT检测器?稀释的 样本通过计数孔～其中250μl被定量器测量～然后RBC检测器使 用DC法计算PLT数。预稀释样本,1:26,由旋转阀定量2.08 μl ～用1.99792ml的稀释液作1:25000稀释～其中250μl被 定量器测量～然后RBC检测器使用DC法计算PLT数。 9(结果的判断与分析:根据PLT数和血小板直方图～若有异常需进行手工计数。 10(质量控制:作标本时同时测定质控品～以2S为警告限～3S为失 控限～绘制质控图～判断分析是否在控。 11(计算方法:由仪器自动计算 912(参考值范围:100-300×10/L 13(临床意义 913.1增多,>400×10/L,:骨髓增生综合征:慢性粒细胞白血病、真 性红细胞增多症等,急性反应:急性感染、急性失血、急性溶血 等,其它:脾切除术后。 913.2减少,<100×10/L,:血小板生成障碍:再生障碍性贫血、急性 白血病、急性放射病等,血小板破坏增多:ITP、脾亢,血小板 消耗过多:DIC,家族性血小板减少:巨大血小板综合征等。 14(分析性能 9914(1线性范围:0 – 199×10/ L～?10×10/ L以内 , 200 – 999 912×10/ L～?5.0%以内。,条件:RBC计数<7×10/ L,。 ,, 9914(2精密度:全血100×10/ L以上～,6.0%,稀释样本100×10/ L以上～,9.0%。 914(3准确度:全血?5.0%或?10×10/ L以内,稀释样本?8.0%或 9?15×10/ L以内。 15(参考文献 15.1 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～4 15.2 Sysmex KX-21中文操作说明书 脑脊液常规检查 1(标本处理 1.1 标本送检必须及时～收到标本后应立即检验～久臵会影响细胞计数和分类检查。 1.2 细胞计数应避免标本凝固～遇高蛋白标本时～可用EDTA盐抗凝。 2(一般性状检查 2.1 主要观察颜色与透明度～报告:无色透明、白雾状浑浊、微黄浑 浊、绿黄浑浊、灰白浑浊、红色浑浊、黄色浑浊等。 2.2 参考值:无色透明 2.3 临床意义 2.3.1 红色:将血性脑脊液试管离心沉淀,1500/min,～如上层液体呈黄色～多为蛛网膜下腔出血～且出血时间已超过4h。如上层液体 ,, 澄清无色～红细胞均沉管底～多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。 2.3.2 黄色:除陈旧性出血外～在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时～也可呈黄色。黄疸患者的脑脊液也可呈黄色。但前者呈黄色透明的胶冻状。 2.3.3 米汤样:见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。 2.3.4 绿色:可见于铜绿假单胞杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。 2.3.5 褐色或黑色:见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。 3(潘氏球蛋白定性试验 3.1 实验原理:脑脊液中球蛋白与苯酚结合～可形成不溶性蛋白盐而下沉～产生白色浑浊或沉淀。 3.2 实验试剂:5%苯酚溶液。 3.3 操作:取试剂2~3ml～臵于小试管内～用毛细滴管滴入脑脊液1~2滴～衬以黑背景～立即观察结果。 3.4 结果判断 阴性:清晰透明～不显雾状。 极弱阳性,?,:微呈白雾状～在黑色背景下～才能看到。 弱阳性,+,灰白色云雾状。 阳性,2+,:白色浑浊。 强阳性,3+,:白色浓絮状沉淀。 最强阳性,4+,:白色凝块。 3.5 参考值:正常是多为阴性。 ,, 3.6 临床意义 有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应～如化脓性脑膜炎)结核 性脑膜炎)梅毒性中枢神经系统疾病)脊髓灰白质炎)流行性 脑炎等。脑出血时多呈阳性反应～如外伤性血液混入脑脊液中～ 亦可呈阳性反应。 4(细胞计数 4.1 实验原理 4.1.1 红细胞计数,适用于浑浊或带血的标本,:用等渗稀释液将脑 脊液稀释并充入计数池后～于显微镜下计数。 4.1.2 白细胞计数,适用于血性标本,:同血液白细胞计数,编号:MYCH/DL-3-SC-10, 4.2 实验设备:OLYMPUS CH20显微镜、计数池 4.3 实验材料:红细胞稀释液、白细胞稀释液,1%冰乙酸溶液, 4.4红细胞计数操作步骤: 4.4.1 对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池～计数10个 6大方格内红、白细胞数～其总和即为每μl的细胞数～再×10即 为每升脑脊液的细胞数。如细胞较多～可计数1个大方格内的细 6胞～再×10×10即为每升脑脊液的细胞数。 4.4.2 浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20 μl～加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内～混匀后滴入计数 6池内～用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数～在×50×10即 为每升脑脊液的细胞总数。 ,, 64.4.3 红细胞数,×10/L,=细胞总数-白细胞数 4.5 白细胞计数操作步骤 4.5.1 非血性标本:小试管内放入冰乙酸1-2滴～转动试管～使内壁沾有冰乙酸后倾去之～然后滴加混匀的脑脊液3-4滴～数分钟后～混匀充入计数池～按细胞总数,澄清的脑脊液,操作中的方式进行白细胞计数。 4.5.2 血性标本:将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数～用下式进行校正。 每μl脑脊液内白细胞校正数= 每μl脑脊液内红细胞数×每μl血液内白细胞数 每μl脑脊液内白细胞未校正数- 每μl血液内红细胞数 4.6 参考值: 正常人脑脊液中无红细胞～仅有少量白细胞。 66成人:,0-8,×10/L 儿童:,0-15,×10/L 多为淋巴细胞及大单核细胞～两者之比约为7:3～偶见内皮细胞。 5(细胞分类 5.1 直接分类法:白细胞计数后～将低倍镜换为高倍镜～直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞,包括淋巴细胞及单核细胞,和多核细胞～应数100个白细胞～并以百分率表示。若白细胞少于100个～应直接写出单核、多核细胞的具体数字～也可换算成百分率表示。 ,, 5.2 染色分类法:如直接分类不易区分细胞时～可将脑脊液离心沉淀～取沉淀物2滴～加正常血清1滴～推片制成均匀薄膜～臵室温或37?温箱内待干～进行瑞氏染色后用油镜分类。如见有不能分类的细胞～应另行描述报告～如脑膜白血病或肿瘤时。 5.3 临床意义 5.3.1 中枢神经系统病变的脑脊液～细胞数可增多～其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。 5.3.1 中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时～细胞数可中度增加～常以淋巴细胞为主。 5.3.2 细菌感染时,化脓性脑膜炎,～细胞数显著增加～以中性粒细胞为主。 5.3.4 脑寄生虫病时～可见较多的嗜酸性粒细胞。 5.3.5 脑室或蛛网膜下腔出血时～脑脊液内可见多数红细胞。 6(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～145-147 浆膜腔积液常规检查 1(标本收集:由穿刺取得的标本为防止细胞变性出现凝块或细菌破坏溶解等～送检及检查必须及时。 2(理学检查:观察标本颜色、透明度～有无凝块形成～可按浆液性、 ,, 粘液性、黄色透明、脓样浑浊、乳糜样、血样等报告。 3(浆膜粘蛋白定性试验 3.1 原理:渗出夜中可含多量浆膜粘蛋白～在酸性条件下可产生白色雾状沉淀。 3.2 操作:取100ml量筒～加蒸馏水100ml～滴入冰醋酸0.1ml,pH3~5,～ 充分混匀～静止数分钟～将穿刺液靠近量筒液面逐滴轻轻滴下～ 在黑色背景下～观察白色雾状沉淀的发生及其下降速度等。 3.4 结果判断 阴性:清晰不显雾状,,?,渐呈白雾状,,+,加后呈白雾状,,2+,白薄云状,,3+,白浓云状。 3.5 附注:在滴下穿刺液后～如见浓厚的白色云雾状沉淀很快地下降～ 而且形成较长的沉淀物～即Rivalta反应阳性。如产生白色浑浊 不明显～下降缓慢～并较快消失者为阴性反应。 4(有核细胞计数: 4.1 计数方法同脑脊液白细胞计数,编号:MYCH/DL-5-SC-21, 64.2 漏出液有核细胞数常<100×10/L ～渗出液有核细胞数较多～ 6常>500×10/L。 5(细胞分类:穿刺液应在抽出后立即离心～用沉淀物涂片后以瑞氏染 色法进行分类。如有可疑细胞应建议送病检。 6(临床意义:主要用于漏出液与渗出液的鉴别。 6.1 穿刺液中以多形核白细胞为主～提示化脓性炎症或早期结核性积 液。在结核性渗出液的吸收期可见嗜酸性粒细胞增多。 ,, 6.2 以淋巴细胞增多为主～提示慢性炎症。可见于结核性渗出液、病毒感染、SLE的多发性浆膜炎等。 6.3 以间皮细胞及组织细胞增多为主～提示浆膜上皮脱落旺盛～可见于淤血、恶性肿瘤等。 7(参考文献:叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～148-149 阴道分泌物检查 1(样本采集 由临床医师采集～采集标本于清洁干燥玻片上～立即送检,冬季需保温,。 2(检查内容 清洁度、滴虫、霉菌。 2(1清洁度检查 2(1(1 检查步骤:取阴道分泌物～用生理盐水涂片～高倍镜检查。 2(1(2结果判断:根据镜下所含白细胞,或脓细胞,、上皮细胞、 杆菌、球菌的多少～分成?，?～判定结果见表。 清洁度 杆菌 球菌 上皮细胞 脓细胞或白细胞 ? 多 — 满视野 0，5/高倍镜 ? 少 少 1/2视野 5，15/高倍镜 ? 少 多 少 15，30/高倍镜 ,, ? — 大量 — 大于30/高倍镜 2(1(3临床意义:清洁度在?~?为正常～?、?为异常～多数为阴道炎～可发现阴道霉菌、阴道滴虫等病原体。单纯清洁度增高而不见滴虫、霉菌者～可见于非特异性阴道炎。 2(2滴虫检查 2(2(1检查步骤:取阴道分泌物～用生理盐水涂片～高倍镜检查。 2(2(2结果判断:阴道滴虫呈梨形～比白细胞大2倍～顶端有鞭毛 4根～在25~42?温度下可活动。因此～在寒冷天气～标本 要采取保温措施。滴虫活动的最适pH值为5.5~6.0。镜下 看见即报告查见滴虫～否则报告未查见滴虫。 2(2(3临床意义:镜下找到滴虫是滴虫性阴道炎的诊断依据。 2(3霉菌检查 2(3(1 检查步骤:取阴道分泌物～用生理盐水涂片～在高倍镜下 检查～或待涂片干后～用革兰氏染色～在油镜下检查。 2(3(2结果判断:湿片在高倍镜下见卵圆形孢子～革兰染色后在油 镜下可见革兰阳性孢子或假菌丝与出芽细胞相连接～成链状及 分枝状。即可报告找到霉菌孢子或菌丝。 2(3(3 临床意义:镜下找到阴道霉菌是霉菌性阴道炎的诊断依据。 3(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～151 ,, 前列腺液常规检查 1(样本收集 临床医师作前列腺按摩术后～采集样本于清洁玻片上～立即送检。 2(检查内容 记录液体颜色、是否混有血液、粘稠度,有无脓块,。湿片镜检～高倍镜下观察白细胞、红细胞、卵磷脂小体～其次为上皮细胞、精子、淀粉样体等。 3(报告方式 3.1 卵磷脂小体:报告在高倍视野中分布数量。 3.2 白细胞、红细胞:报告方式与尿液检查相同。 3.3 如找到精子、上皮细胞应报告。 4(参考值 正常人卵磷脂小体为多量或满视野～白细胞<10/HP～红细胞<5/HP。 5(临床意义 前列腺炎时～白细胞增多～可找到细菌～卵磷脂小体常减少。前列腺癌时～可有血性液体～镜检见多量红细胞、可见癌细胞。 6(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～151 ,, 白细胞计数,手工法, 1(实验原理 血液经稀酸稀释后～成熟红细胞全部被溶解～注入计数池后～在显微镜下计数白细胞。 2(标本采集、存放、运输、拒收标准:同WBC测定,编号:MYCH/DL-5-SC-17, 3(实验材料 冰醋酸 2ml 蒸馏水 98ml 10g/L亚甲蓝溶液 3滴 4(仪器设备:OLYMPUS CH20显微镜、计数池 5(操作步骤 5(1小试管1支～加白细胞稀释液0.38ml。 5(2用微量吸管准确吸取全血20μl～擦去管尖外部余血～将吸管插入小试管中稀释液的底部～轻轻将血放出～并吸取上层清液～嗽洗吸管二次～最后用手摇动试管混合。 5(3充池～静臵2，3min～待白细胞下沉。 5(4用低倍镜计数四角4个大方格内的白细胞数。 6(计算方法 64个大方格内的白细胞总数×10×20×10 白细胞数/L= 4 ,, 6 即:4个大方格内的白细胞总数×50×10=白细胞数/L 式中: ?4 为每个大方格,即0.1μl,内白细胞平均数, ×10 1个大方格容积为0.1μl～换算成1μl, ×20 血液稀释倍数, 6 ×10 由1μl换算成1L。 997(参考值范围:成人:,4，10,×10/L 儿童:,5，12,×10/L 9新生儿:,15，20,×10/L 8(质量控制: 8.1 大小方格内压线细胞应按数上不数下、数左不数右的原则进行计数。 8.2 稀释液要过滤～小试管、计数板均需清洁～以免杂质、微粒等被误认为细胞。 8.3 一些贫血患者血液中有核红细胞增多～影响白细胞计数～应校正除去。校正公式如下: 100 白细胞校正数= X× 100+ Y X=校正前白细胞数 Y=在分类计数中，计数100个WBC的同时计数到的有核红细胞数 8.4计数时～两次重复计数误差不得超过10%。 9(临床意义:同WBC测定,编号:MYCH/DL-5-SC-17, 10(参考文献: ,, 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～4-5 血小板计数,目视计数法, 1(实验原理: 将血液用适当的稀释液作一定量稀释后～混匀注入计数池内计数～再算出每升血液中血小板数。 2(标本采集、存放、运输、拒收的标准: 同血小板测定,编号:MYCH/DL-5-SC-20, 3(实验材料:草酸铵稀释液 分别溶解草酸铵1.0g及EDTA-Na0.012g～合并加蒸馏水至100ml～2 混匀。 4(仪器设备:OLYMPUS CH20显微镜、计数池 5(操作步骤 5.1 于清洁试管中加入稀释液0.38ml。 5.2 准确吸取全血20μl～擦去管尖外部余血～臵于血小板稀释液内～立即充分混匀。待完全溶解后再次混匀1分钟。 5.3 取上述均匀的血小板悬液1滴～注入计数池内～静臵10-15分钟～使血小板下沉。 5.4 用高倍镜计数中央1个大方格,即400个小格,内血小板～乘以 90.2×10即为每升血液中的血小板数。 ,, 6(质量控制: 6.1 血小板稀释液要清洁～配成后应过滤。防止微粒和细菌污染。试管及吸管也应清洁、干净。 6.2 血液加入稀释液内要充分混匀～滴入计数池后一定要静臵10-15分钟。室温高时注意保持计数池周围的湿度～以免水分蒸发而影响计数结果。 6.3计数时光线要适中～不可太强～应注意有折光性的血小板和杂质、灰尘相区别。附在血细胞旁边的血小板也要注意～不要漏数。 97(计算方法:血小板数/L=中央1个大方格内血小板×0.2×10 98(参考值范围:100-300×10/L 9(临床意义 99.1增多,>400×10/L,:骨髓增生综合征:慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症等,急性反应:急性感染、急性失血、急性溶血等,其它:脾切除术后。 99.2减少,<100×10/L,:血小板生成障碍:再生障碍性贫血、急性白血病、急性放射病等,血小板破坏增多:ITP、脾亢,血小板消耗过多:DIC,家族性血小板减少:巨大血小板综合征等。 10(参考文献 叶应妩～王毓三～等～全国临床检验操作规程～第二版～东南大学出版社～1997～4 ,, 幽门螺杆菌抗体检测(固相胶体金法) 1(试验原理 采用直接固相免疫分析技术定性检测幽门螺杆菌抗体 ,anti-Helicobacter pylori ,anti-HP,。检测膜中含有HP抗原～染料垫中的金颗粒包被HP抗原和抗人免疫球蛋白抗体。显色溶液激活染料与HP抗原和抗人免疫球蛋白抗体结合。如果样本中存在HP抗体～染料结合物与检测膜中的HP抗原结合～在检测区出现可见的抗原带。抗人免疫球蛋白抗体-染料结合物继续移动～被控制区的抗体捕获～在控制区产生可见的条带。检测区和控制区都出现可见条带～结果为阳性,只有控制区出现条带～结果为阴性。 2(样本 抗凝全血:肝素钠,锂,、枸橼酸、EDTA为可使用的抗凝剂,手指全血,血清,血浆。 2(1血清或血浆不能溶血。虽然溶血不影响试验结果～但是～中度溶血会产生浅红色的背景。 2(2样本中的颗粒会使结果不稳定～须离心除去。 2(3不能即时检测的样本应保存于2-8?～若血清和血浆在48小时内不能检测～应该保存于-20?～不能反复冻融。 3(试剂 3(1试剂组成:试剂盒由35份试验装臵和一瓶,6ml,显色溶液组成。 3(2试剂贮存和稳定性:封闭于袋内臵于2-30?贮存～可稳定至失 ,, 效期。 4(检测步骤 4(1将试剂从冰箱取出～恢复至室温,18-30?,。检测前不要打开试剂袋封口。 4(2将检测装臵从试剂袋中取出并放臵于平整台面。 4(3将25μl血清加入样本孔上方区域,靠近检测区,。 4(4滴加2滴显色溶液,Developer Solution,于样本孔下方区域。 注意:加入显色溶液时～将溶液瓶垂直于样本孔下方区域的上方。 4(5等待10分钟后观察结果～15分钟后不能观察结果。 5(判断结果 控制线,C,和检测线,T,同时出现为阳性,只出现控制线为阴性,控制线,C,和检测线,T,同时不出现或只出现检测线为无效试验～表明试剂不能用于检测～更换新的试剂～重新检测。 6(试验局限性 6(1该试剂盒获得的试验结果仅用于评估有胃肠道疾病症状的患者～不适用于无症状的的患者。 6(2由儿科患者样本获得的性能指标还未建立。 6(3阳性结果仅仅意味着HP抗体的存在～并不提示患者的任何疾病状态。 6(4阴性结果支持不存在HP抗体～或者HP抗体水平低于检测限。如果试验结果为阴性～怀疑HP的感染～建议做其它的试验～如培养和组织学检查。 ,, 7(性能特征 样本来自于有症状和无症状的做内窥镜检查的患者～共207例～年龄范围19-83岁～平均52岁。与活检/组织学、凝集试验及ELISA法检查HP抗体比较来评估本试剂的性能特点。 7(1以活检/组织学为参考～敏感度=95.9%～特异性=89.1%～符合率=91.6。 7(2以凝集试验为参考～符合率=93.2%. 7(3以ELISA为参考～符合率=92.3%。 7(4其它性能指标 59例样本试验结果显示～静脉全血、末梢全血、血浆、血清之间结果无明显差异,4个技术人员～在3个不同时间～4个不同地点重复10次的结果显示～与期望结果100%一致,试验显示～血液中胆红素、血红蛋白、甘油三酯、白蛋白等超过正常生理浓度的10倍对本试验结果无干扰。 8(期望值 成人十二指肠溃疡的100%、胃溃疡的80%检出HP。本试验证实～有溃疡症状患者94%、胃炎患者80%～结果为阳性。HP抗体阳性率随年龄增长而升高～儿童阳性率为5%～供血者阳性率为33%～在工业化国家～60岁人群的阳性率达50%。感染者超过25%没有症状～其它因素～如社会经济状况、少数民族、不同人群、地理位臵、与感染相关的临床症状类型～也是影响阳性率的因素。 ,, 检测示意图 加显色溶液 加血清 S T C 阳性 阴性 C C T T 样本孔,S, 样本孔,S, ,, 无效试验 C C 或 T T S S 精液常规 1(检查内容:精液量、颜色、液化时间、精子计数、精子活动率、 精子活力、精子形态、红细胞、白细胞。 2(操作步骤: 2(1嘱受检者禁止性生活3，7天～用清洁容器收集精液～最好30 分钟内送检～1小时内必须送检～冬季应保温送检。 2(2收到样本后～询问受检者收集样本时间～并立即观察是否液化～ 记录液化时间,记录精液量、颜色。 2(3检查精子活动率:受到样本后立即检查。将新鲜样本混匀后～ 取适量涂于清洁玻片上～在高倍镜,40×,下观察100个精子～ 计数活动精子数量～计算精子活动率。 ,, 活动精子数量 精子活动率= ×100% 精子总数 2(4精子活力:检查精子活动率的同时观察精子活力～按下述5级报告: 精子活力分级 分级 活动情况 0级 无活动力～加温后仍不活动 ?级 精子原地旋转、摆动或抖动～运动迟缓 ?级 精子活动方向不明确～不呈直线运动～不活泼 ?级 中速直线运动 ?级 快速直线运动～运动活泼 2(5精子形态:将精液样本涂片用瑞氏或革兰氏染色后～在油镜下 观察精子形态～计数100个精子中正常形态精子的数量～报告正 常精子形态百分率。 精子异常情况如下: 头部异常:过大、过小、尖细、外缘不齐、双头等, 中部异常:消失、分枝、肿胀, 尾部异常:双尾、卷曲度短或消失,缺尾,。 ,, 2(6精子计数 于小试管内加精子稀释液0.38ml～吸液化精液20μl加入稀 释液内。充分混匀后～滴入计数板内～静臵1，2分钟～以精 9子头部为基准～计数5个中方格内精子数～换算成×10/L报 告精子计数。 2(7精液白细胞和红细胞:在检查精子活动率和精子活力时～计数 高倍视野中红细胞和白细胞数量。 3(参考范围 3(1正常精液呈灰白色～久未排精者可呈淡黄色,离体30分钟后完全液化。 3(2 精子活动率:在排精后30，60分钟内～活动精子超过70%。 3(3精子活力:??级。 93(4精子计数:10，130×10/L 3(5红细胞、白细胞,5/高倍视野。 3(6正常形态率?80%。 4(临床意义 为临床诊断男性不育症提供实验信息。 5(注意事项 5(1不能使用安全套内的精液作为本试验的样本。 5(2出现异常结果～应隔一周后复查。 5(3不能仅依据试验结果作临床诊断。 ,,