实验四__抗生素抗菌谱测定

实验四__抗生素抗菌谱测定 实验目的和内容实验目的和内容 目的目的 11、学习抗生素抗菌谱的测定了解常见抗生素的、学习抗生素抗菌谱的测定方法了解常见抗生素的抗菌谱。抗菌谱。 22、学习微生物耐药性的测定方法了解微生物对抗生、学习微生物耐药性的测定方法了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策素耐药性产生的原因及对策 内容内容 抗生素的抗菌谱确定抗生素的抗菌谱确定 微生物耐药性的测定微生物耐药性的测定 抗生素——是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级代谢产物或其人工衍生物在低浓度时就能抑制或干扰它种生物包括病原菌、病毒、癌细胞等的生命活动可作为优良的化学治疗剂。 各种抗生素有其不同的制菌范围即抗菌谱。如青霉素一般对G细菌有抗性。 实验原理 不同抗生素抑制细菌生长的机制不同如青霉素抑制细菌细胞壁的合成而四环素抑制细菌蛋白质的合成。 菌种菌种 各种不同来源的细菌。各种不同来源的细菌。 培养基培养基 牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素供试抗生素 四环素四环素母液浓度母液浓度50mg/mL溶于水 设备与用具设备与用具 恒温培养箱、接种环、培养皿。恒温培养箱、接种环、培养皿。 1 1 倒牛肉膏蛋白胨倒牛肉膏蛋白胨25mg/L25mg/L四环素四环素平板平板 2 2 将平板将平板皿底划分为皿底划分为66等份每一等份内标明一种细等份每一等份内标明一种细菌的名称菌的名称 3 3 用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域 4 4 将划好线的细菌平板置将划好线的细菌平板置37?37?倒置培养倒置培养24h24h--48h48h。。 5 5 记录细菌的生长情况根据记录细菌的生长情况根据细菌的生长情况细菌的生长情况可初步可初步确定卡那霉素的抗菌谱。确定卡那霉素的抗菌谱。 123456 记录各种不同来源的细菌的生长情况记录各种不同来源的细菌的生长情况 耐药性antibiotic resistance——即抗药性指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生药物的化疗作用就明显下降。 实验原理 耐药性产生的原因主要有产生一种使药物失去活性的酶把药物作用的靶位加以修饰和改变使药物不能透过细胞膜通过主动外排系统把进入细胞内的药物泵出细胞外 菌种菌种 大肠杆菌。大肠杆菌。 培养基培养基 牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素供试抗生素 庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮观霉素和链霉素、无菌水观霉素和链霉素、无菌水 设备与用具设备与用具 恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。 滤纸片法测定微生物的耐药性滤纸片法测定微生物的耐药性 所需浓度抗生素溶液配制 A A 氨苄青霉素氨苄青霉素50μg/mL B B 卡那霉素卡那霉素50μg/mL C C 四环素四环素5μg/mL D D 氯霉素氯霉素50μg/mL EE 链霉素链霉素50μg/mL F F 壮观霉素壮观霉素50μg/mL 1 1 倒牛肉膏蛋白胨平板倒牛肉膏蛋白胨平板 2 2 取取0.2ml0.2ml大肠杆菌菌液加入平板中涂布均匀。大肠杆菌菌液加入平板中涂布均匀。 3 3 将平板将平板皿底划分为皿底划分为66等份每一等份内标明一种抗等份每一等份内标明一种抗生素的名称分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴生素的名称分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。在平板的每一等份中。 4 4 将贴好滤纸片的含菌平板置将贴好滤纸片的含菌平板置37?37?倒置培养倒置培养2424--48h48h。。 5 5 测量并记录抑菌圈的直径抑测量并记录抑菌圈的直径抑杀杀菌圈的大小能够菌圈的大小能够反映抗生素抑反映抗生素抑杀杀菌能力的大小根据其直径的大小菌能力的大小根据其直径的大小可初步确 定大肠杆菌对各种抗生素的耐药性情况可初步确定大肠杆菌对各种抗生素的耐药性情况或或敏感性情况敏感性情况自带尺子自带尺子 123456 ? 抗生素 抑杀菌圈直径/mm 抗生素 抑杀菌圈直径/mm 氨苄青霉素 庆大霉素庆大霉素 卡那霉素 链霉素链霉素 四环素四环素 壮观霉素壮观霉素 1、什么叫抗生素什么是耐药性 2、微生物产生耐药性的原因有哪些