注射用A型肉毒毒素
Zhusheyong A Xing Roudu Dusu
Botulinum Toxin Type A for Injection
本品系用A型肉毒结晶毒素经稀释,加入稳定剂后冻干制成。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.1 名称与来源
生产用菌种为产毒力高的A型肉毒梭菌Hall株或其他A型肉毒梭菌。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3 种子批的传代
主种子批应不超过5代,工作种子批应不超过10代。
2.1.4 种子批菌种的检定
检定菌种可采用明胶琼脂半固体培养基、血琼脂平板培养基、乳糖卵黄琼脂平板培养基或其他适宜培养基。
5菌种应具有典型的形态、培养和生化特性,应产生不低于1.0×10LD/ml的A型肉毒毒素。 50
2.1.5种子批保存
主种子批和工作种子批均应冻干保存于2,8?以下;工作种子批也可用明胶琼脂半固体培养基于-20?保存接种于适宜培养基于8?以下保存。
2.2 原液
2.2.1生产用种子
启开工作种子批菌种复苏后,在适宜培养基上扩增培养,制备生产用种子。 2.2.2 产毒培养基
采用含胰酶消化酪蛋白、酵母透析液(或酵母浸出粉)、葡萄糖培养基,或经批准的其他适宜培养基。
2.2.3 菌种接种和培养
每瓶取样镜检,应无杂菌,经除生产用种子接种产毒培养基后,在适宜温度培养一定时间。565菌过滤,即为原制毒素,其毒力应为10,10LD/ml不低于1.0×10LD/ml。 5050
2.2.4 毒素纯化及结晶
2.2.2.1 原制毒素可经等电点沉淀、核糖核酸酶处理、离子交换色谱、硫酸铵浓缩和透析及自然结晶等程序,或用经批准的其他适宜方法进行纯化。纯化毒素经自然结晶后即为结晶毒
素,检定合格后,置2,8?避光保存。
2.2.5 结晶毒素的透析
结晶毒素,经透析去除硫酸铵,除菌过滤后即为原液。 用PB溶解
2.2.6原液检定
按3.2项进行。
2.3半成品
2.3.1配制
2.3.1.1用PB溶解及透析毒素,除菌过滤后测定毒力。
2.3.1.2用生理氯化钠溶液将已知毒力的毒素溶液稀释至适当浓度。
2.3.1.32.3.1半成品配制
将适量的稀释毒素加入适宜稳定剂中,使每1ml中毒素毒力在规定范围内。 2.3.2半成品检定
按3.3项进行。
2.4成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装及冻干
应符合“生物制品分装冻干规程”规定。在冻干过程中制品温度应不高于35?,真空或充氮封口。
2.4.3
每瓶含A型肉毒毒素50,100U 50U、100U。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1结晶毒素检定
3.1.1结晶毒素在普通光学显微镜高倍镜下观察,应呈均一的针状或棒状结晶。 3.1.2毒力测定
56可选择下列一种方法进行。结晶毒素毒力应为1.0×10,1.0×10LD50/ml不低于
61.0Χ10LD/ml。 50
3.1.2.1本品溶解透析后做适当倍数稀释,按Broff法测定毒力,计算出本品的毒力。即取体重14,16g小鼠5只,每只尾静脉注射0.1ml本品(或稀释的供试品),求其平均死亡时间(以分钟计),从毒素剂量与死亡时间的
曲线中求得毒素的毒力。
3.1.2.2按常规方法稀释本品,各稀释度腹腔注射体重14,16g小鼠4只,每只注射0.5ml,根据动物4天内死亡情况,用统计学方法(Reed Muench法)计算本品的毒力。 3.1.3纯度测定
3.1.3.1根据波长280nm处吸光度计算的蛋白质浓度及3.1.2项测定的毒力,求出结晶毒素的
7纯度,每1mg蛋白质纯度应在1.0×10LD以上。 50
3.1.3.2结晶毒素在波长260nm处吸光度与波长280nm处吸光度之比(A/A)应不高于0.6。 2602803.1.4特异性检查
取注射用水1ml,溶解A、B、C、D、E、F型冻干肉毒诊断血清,分别于各血清管中加1ml含100LD50左右的本品。另取2支试管,各加1ml生理氯化钠溶液,再分别加入上述同浓度的本品溶液,其中1支煮沸20分钟作为毒素阴性对照,另1支与混有毒素的诊断血清管同时置37?结合45分钟,作为毒素阳性对照。各组分别腹腔注射体重14,16g小鼠2,3只,每只注射0.5ml,观察4天,记录动物存亡情况。本品应为A型。
3.2 原液检定
按3.1.2-3.1.4项进行。
3.3 半成品检定
3.2.1无菌检查
依法检查(附录? A),应符合规定。
3.2.2效价测定
按3.3.4项进行,应为标示量的80%,120%。
3.4成品检定
除水分测定外,每瓶加入0.5ml灭菌生理氯化钠注射液,复溶后进行以下检定。 3.4.1鉴别试验
按3.1.4项进行,应符合规定。每批成品至少抽取1瓶做鉴别试验。 3.4.2外观
应为白色疏松体,复溶后轻轻摇动,应呈无色或淡黄色澄明液体。 3.4.3水分
应不高于3.0%(附录? D)。
3.4.4效价测定
取本品10,20瓶混合测定效价。每瓶加入1ml生理氯化钠溶液溶解复溶后,将等量混合的溶
解毒素进行不同倍数稀释,各稀释度分别腹腔注射体重14,16g小鼠4只,每只注射0.5ml,
观察4天,记录小鼠死亡数,用统计学方法计算每瓶本品的LD(1LD定为1U)。应为标示量5050的80,,120,。
3.4.5无菌检查
依法检查(附录? A),应符合规定。
3.4.6 细菌内毒素检查
依法检查(附录? E),应不高于7.5EU/瓶。
3.4.7稀释剂
稀释剂为氯化钠注射液,应符合本版药典(二部)的相关规定。 4保存、运输及有效期
于-5,-202,8?避光保存和运输。自生产之日起有效期为3年。 5 使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的
。