存放5d尿液检验DNA成功1例

存放5d尿液检验DNA成功1例 ? 474? 载:+牙?度松动,+之间一多生牙?度松动,牙龈 红肿.牙片示+-牙根尖1/3折断,多生牙较小,呈圆锥 形.牙根较短.当日行+牙,多生牙拔除.法医门诊检 查见+-牙及多生牙拔除术后,牙槽窝可见红肿,+牙 向唇位畸形生长. 2讨论 多生牙就是比正常人牙数多长出的牙,也叫"额 外牙".多生牙可以发生在上,下颌骨任何部位.多数 为单发,也有多发的.多见于两个上中切牙f俗称门牙) 之间,所以又叫"正中牙".多生牙有的长在上中切牙 腭侧f内侧),有的未到换牙年龄而把乳中切牙替换掉, 占去了上中切牙的位置.而多数从唇侧侧)长出,造 成牙列不齐.有的多生牙横位埋在颌骨内.上颌前边 的多生牙与正常上前牙的外形差别较大.多生牙较 小,牙冠常呈圆锥状,牙根短. 不论是什么多生牙,位于牙列以外的均要拔除 例如.上颌前牙的多生牙,无论长在什么部位都应及 时拔除.尤其是影响上前牙排列的多生牙.如"正中 牙"和"抢占"上中切牙位置的多生牙."正中牙"应 在l4岁前拔除,空隙可逐渐变小,最后消失.空隙 不能完全消失时可用正畸方法矫治."抢占"上中切 牙位置的多生牙应及时拔除,相应部位的上中切牙 可以正位萌出.有些多生牙排列整齐,可不必给予 特殊处理 在本例多生牙的鉴定中,一种意见认为应定轻 伤.理由是多生牙在客观上也是一颗牙,在牙列中有 其自身位置,具有正常牙的基本功能,且医院病历显 示查体时多生牙呈?度松动,其拔除与外伤有直接 因果关系,应评定为轻伤.但笔者认为,正常牙具有 咀嚼,发音,美观三大功能本例多生牙位于两个上 中切牙f俗称门牙)之间,又叫正中牙,牙较小,不完全 具备正常牙的咀嚼,发音功能,且不仅自身与正常上 前牙的外形差别较大影响美观,还导致.+牙向唇位 畸形生长影响了上牙列的排列和美观:更重要的是 正常牙的单纯外伤性?度松动多可予以同定保留, 并不易导致拔除的结果.本例多生牙的拔除主要是 因为其牙根植入牙槽较短,在+牙的外伤性拔除后 其自身无法固定而需拔除.闪此,审慎考虑之后最终 将其鉴定为轻微伤. (收稿日期:2007—08—16) (本文编辑:夏文涛) JournalofForensicMedicine,December2007,Vo1.23,N0_ 存放5d尿液检验DNA成功1例 杨彦梅1.曹永林-,聂胜洁 (1.曲靖市公安局.云南曲靖655000:2.昆明医学院法 医学院,云南昆明650031) f关键词1尿液;STR;法医物证学 [中图分类号】DF795.2【文献标志码】B [文章编号】1004—5619(2007)06—0474--02 尿液中的尿素,尿酸等对细胞中的DNA有破坏 降锯作用,因此存放时间是影响尿液DNA检验 成功率的主要因素之一.本例对室温放置5d的尿液 进行成功检测,现报道如下. 1案情 2007年5月,曲靖市某企业一办公室被盗,在现 场垃圾桶塑料袋内发现有浓烈尿臊味淡黄色液体.据 调查,垃圾桶中塑料袋为新换干净塑料袋,分析其内 液体为嫌疑人作案期间所留尿液,遂提取送检.受当 地条件限制,该尿样一直室温保存,提取样本至检验 时间间隔5d. 2检验 样本DNA提取:将尿液混匀后取10mL分别置 1.5m1离心管中,10000r/rain离心5min(离心半径 80mm),沉渣收集于同一离心管中,加5%Chelex一100 200L,10mg/mL蛋白酶K10L,56cI=水浴6h,取出 高速振荡5,10S,100oC加热8min,高速振荡5—10s; 10000r/rain离心5min(离心半径80mm).用Micro. con一100柱浓缩至20L,取上清液2L作PCR扩增 反应体积10L). DNA扩增及产物分离检测:DNA提取物用美国 ABI公司的AmpF1STRIdentifiler试剂盒进行扩增,产 物用ABI3130型自动遗传分析仪电泳,GeneMapper IDV3.2软件分型分析.尿液基因分型结果见图1. … =罂=;=臻与;一 I一1.I.11.^.4. 回回圈函国日霜 ?? hm— 嗡鬻;=],嚼嘲;罅qF;]嘲;= } 1 {l一 uw窗蛐霉 "m-?一? —l一一…_ …1………………………- }l... …'-一'?? 崤.;…嚼;;;=;; 广一——————————?————一,珊lti . L.一——————吉———-_———山——舞——蛩——————————— —————一 图1尿液STR基因分型图谱 法医学杂志2007年12月第23卷第6期 3讨论 尿液中含有的少量脱落细胞使DNA检验成为可 能,但受尿液中的尿素,尿酸,肌酸,无机盐等成分影 响,随存放时间延长,样本DNA的降解破坏更加明 显.本案中的尿样虽然已经室温存放5d,但样本提取 前是在干净的塑料袋内,未丢人任何杂物,使得嫌疑 人留下的尿液未被污染,通过较多的尿液用量,采用 Chelex一100法消化.Microcon一100柱纯化浓缩DNA, 虽然STR基因分型峰值只能在150个相对荧光强度 左右,但已可对该尿样的15基因座STR分型结果进 行判读. (收稿日期:2007—08—22) (本文编辑:柳燕) 游离缘指甲DNA检验1例 聂胜洁-.一,杨彦梅.贺艮峰.许冰莹.景强2肖春杰 f1.云南大学人类遗传研究中心,云南昆明650091;2.昆 明医学院法医学院,云南昆明650031;3.曲靖市公安 局刑侦支队四大队,云南曲靖655000) 【关键词】DNA检验;游离缘指甲;STR分型 【中图分类号]DF795.2【文献标志码]B 【文章编号]1004-5619(2007)06—0475—01 在法医日常检案中,指甲DNA检验需要拔取整 枚指甲.消化指甲的甲体或甲根部分才能得到满意的 DNA检验结果.甲体的前部DNA分型效果差,因此 指甲的游离缘(freemarginofnail),即指甲前缘延伸 到离开甲床的部分,通常不作为核DNA检验的样本. 本例在处理一起抛尸粪池尸体时,以剪下的指甲游离 缘作为检验对象,经有机法结合Chelex法提取DNA, 取得了满意的STR分型. 1与方法 1.1简要案情 2007年3月.在云南兰坪某地的一农村公用厕 所粪池中发现一具约9岁男孩尸体,尸体轻度腐败. 因办案需要,需确认涉案人与死者之间是否存在亲子 关系.但死者家属坚决不同意提取尸体血样或组织, 最终提取死者的游离缘指甲送检. 1.2检验 指甲肉眼观察:10枚游离缘指甲宽度在0.5,1.0 cm间.长度在0.2,0.4cm间,质地较硬,有弹性,面 附着黑色污物. ? 475? 取送检指甲5枚.在蒸馏水中浸泡10min,以细毛 刷小心刷洗1次,双蒸水振荡漂洗2次,每次5min.将 指甲剪碎,置于1.5mL离心管中,加入STE缓冲液 400L,10%SDS200L,10mg/mL蛋白酶K40L, 1mol/LDTr40L,置56qC水浴消化9h,酚一氯仿法 提取DNA,2倍体积冰无水乙醇沉淀DNA后,一20qC静 置15min.10000r/min离心30min(离心半径9cm),倾 去无水乙醇,沉淀置4qC冰箱挥干;干燥的DNA加入 10%Chelex一100200L,lOmg/mL蛋白酶K40txL,1mol/L DTr40L'置56qC水浴消化9h,100oC加热10min,剧 烈振荡,10000r/min离心5min(离心半径9cm),取上 清液备用.采用AmpF1STRIdentifile试剂盒(ABI, USA),10L扩增体系(含模板DNA1L,ReactionMix 4.0L,PrimerSet2.0L,GoldTaq酶(5U/tzL)0.2L,双 蒸水补足10L)在9700型扩增仪上进行复合扩增, PCR产物在ABI3130遗传分析仪上分型. 2结果 游离缘指甲经上述处理获得满意STR分型结 果,其平均峰高在1000相对荧光强度左右(见图1). 图1游离缘指甲的STR分型图谱 3讨论 指甲南表皮细胞角化而来,南多层连接牢固的角 化细胞构成,细胞内充满富含二硫键的角质蛋白,核 DNA提取相对困难.指甲的游离缘部分因细胞高度 角化,胞核退化,DNA降解较指甲的其余部分更为严 重.因此实践中游离缘指甲通常只进行mtDNA多态 性测定而不做核DNA基因分型.在本案,通过调整SDS(终浓度2.9%),DTr(终质量浓度58.8mmol/L)以 及蛋白酶K(终浓度588I.zg/mL)浓度来充分消化指 甲.结合Chelex一100法进一步消化并螫合抑制PCR 反应的金属离子,最终获得较高质量的核DNA,得到 令人满意的STR分型结果. (收稿日期:2007—08—22) (本文编辑:柳燕)