血清肿瘤标志物检测方法的研究进展

血清肿瘤标志物检测方法的研究进展 血清肿瘤标志物检测方法的研究进展 ChineseModernMedical&Clinical,December.2005,Vo1.3,No.6 34-37 [19】唐小梅,孙焱,黄叔怀.不同负荷运动训练对大鼠心血管 内分泌功能的影响们.现代康复,2001,5(4):40 【20】MaedaS,T~mabeT,MiyauchiT,eta1.Aerobicexercise trainingr~ducespl~maendothelin一1concen~afioninolder women.【J].JApplPhysiol.2003Jul,95(1):336~41 [211高军,姚素芬,孙萍,等.医疗体育对高血压患者血压及血 浆内皮素水平的影响【J].临床军医杂志,2003,31(3):93~ 94 【22】秦伟,李令华,董群,等.运动时低危高血压患者血管活性 物质的影响【J].中国临床康复,2003,7(12):1854 f231邵兰真.有氧速动对原发性高血压患者血压及血浆内皮 素的影响叨.中国临床康复,2003,7(12):1885 【24]姚素芬,高军,宋广斗,等.运动训练对高血压患者血压, 内源性一氧化氮及内皮素的影响【J].中国康复医学杂 志.2Oo4.19(4):258—259 [25]刘向辉.刘桂华,陈松娥.等张运动与等长运动对高血压 患者血脂及内皮素的影响[J].北京体育大学学报, 2005.28(2):203—205 血清肿瘤标志物检测方法的研究进展 刘霞 【关键词】肿瘤标志物检测方法 中图分类号:R446.1文献标识码:A文章编号:1812—5859{2005)06-0058—02 肿瘤标志在肿瘤学中占有重要的地位,如用免疫组织化 学法检测出一个特定的肿瘤标志对肿瘤的组织学诊断和分 型有十分重要的价值.同样.用免疫或生化方法在血清中检 出一个显着增高的肿瘤标志也有助于该肿瘤的诊断.即使不 少肿瘤标志在良性疾患的血清中也可有轻,中度升高或暂时 升高.但肿瘤标志的连续动态测定不但有助于良,恶性疾患 的鉴别.对于一个已确诊的病人来说.还可用于预后及疗效 的观察.并且.肿瘤标志在研究肿瘤的发生,发展以及分化和 逆转的过程中也是极重要的指标【】l.因此,肿瘤标志物的检测 得到了从事肿瘤基础和临床工作者的重视.本文就近年来肿 瘤标志物检测方法的进展作一综述. 1肿瘤标志物的研究历史 自1846年英国内科医生HenryBence—Jones在诊断多 发性骨髓瘤病1人的尿中发现了Bence-Jones磕白,此乃利 用肿瘤标志物诊断肿瘤的开端.此后100多年内又陆续发现 了一些肿瘤分泌的异位激素以及促性腺激素等肿瘤标志.4O 年代报道了一些酶在肿瘤病人的血清中增高,如成骨肉瘤血 清中有碱性磷酸酶增高.5O年代发现某些同工酶也可以用 于肿瘤的诊断.1963年Abelev发现甲胎蛋白及1965年 Gold和Freeman发现癌胚抗原后.肿瘤标志才作为诊断用 的工具.近年来又相继发现了可用于乳腺癌,胰腺癌和卵巢 癌等肿瘤的多种标志.如MCA,CA199和CA125r-1. 在肿瘤标志物漫长的历史进程中.研究者从蛋白,激素, 酶和同工酶应用于癌的诊断,到找到肿瘤相关抗原,接下来 随着杂交瘤技术和酶联免疫技术的深入研究,单克隆抗体检 测的应用提高了肿瘤实验室诊断的准确性.8O年代后.肿瘤 研究进入癌基因时代后,使癌的诊断技术进入分子生物学阶 段.到目前为止有100多种癌基因被人们所认识.肿瘤是一 作者单位:广西桂林市人民医院检验科(541002) .44岁.主管检验师. 作者简介:刘霞.女 种基因病变.癌基因的激活和抑癌基因的失活是正常细胞转 化为癌细胞的主要原因. 2肿瘤标志物的检测方法的进展 在肿瘤标志的测试上.除一些血清酶可用活力的方法定 量外,对于无酶活力的蛋白类或其他肿瘤标志大多需用免疫 法测定.近年来,由于免疫定量技术的发展.已从半定量或灵 敏度较低的免疫双扩散,对流免疫电泳,火箭电泳或反相血 凝法过度到高灵敏度而能准确定量的放射免疫测定(RIA)或 酶联免疫吸附测定(ELISA),再加上单克隆抗体技术的应用, 使肿瘤标记检测的灵敏度和特异性大为提高.免疫分析反应 的实质是被测物占据抗体结合位点的过程啪.实践中.方法学 发展成两个分支.即竞争性和非竞争性免疫分析.在这个发 展过程中最有意义的变革是非竞争原则的出现.肿瘤标志物 多属于分子结构尚不明确的大分子蛋白质.最适合于抗体标 记的非竞争性分析.因此,在肿瘤临床化学方面.比传统竞争 结合分析更为灵敏,精确,快速和操作更为简便的非竞争性 分析方法已得到了迅速普及和发展I41. 2.1放射免疫分析(RIA)放射免疫分析是一种通过高比 放射性示踪物观察抗原与抗体结合反应产物来定量微量物 质的一种分析方法.它的基本立足点是抗体结合反应的高特 异性和放射性核素标记的高灵敏度的巧妙结合.放射免疫分 析是标记免疫分析发展最早的一种.其作为一项超微量的分 析技术,以灵敏,特异,精确,简便等优越性渗入到了医学生 物的各个领域,为医学检验树起了新的里程碑,同时,也为目 前各种非放射性标记免疫分析的飞速发展奠定了基础.我国 的放射免疫分析技术及其应用始于2O世纪6O年代后期.经 历了几个阶段,现已成为一个十分成熟和重要的体外检测技 术. 2.2酶联免疫分析(EIJA)EIJA在RIA基础理论的基础 上发展起来的一种非放射性标记免疫分析技术.该技术使酶 与抗体或抗原共价连接(结合),故又称为酶联免疫吸附测定 中华现代医学与临床.2005年12月.第3卷.第6期 (ELISA)[51.早期只有一种反映模式,只限于病原微生物抗原 或抗体的快速定性测定.近二十多年来.无论是在显示某种 抗原的存在的定性研究,还是确定某种抗原数量的定量研究 方面取得巨大的进展.与RIA相比.EUSA具有特异性,敏感 性和可检测性高;测定迅速简便,不需要昂贵的设备;无放射 性污染;试剂相对比较便宜;保存期长等优点.可以用肉眼或 由酶标仪测定显色强度.从已知抗体浓度与颜色强度的关 系,推算出待测样品中的抗体浓度.由于酶的特异性和多样 性使测定方法层出不穷.发展迅速.现已广泛采用的酶标仪 的灵敏度已达ng水平.如使用生物索一亲和素一HRP复合物 作为信号,灵敏度可进一步提高.目前,一些肿瘤标志物,如 AFP,CEA,CA125,CA199等ELISA试剂盒已广泛应用于中 小型医院. 2.3化学发光免疫分析(CLIA)1977年Halman将酶的化学 发光与免疫反应结合起来.建立了化学发光免疫分析方法 (CUA).CLIA的基本原理是将发光物质或酶标记在抗原或抗 体上,免疫反应结束后,加入氧化剂或酶底物发光,通过测量 发射光强度.根据曲线测定待测物的浓度.CLIA以其灵敏 度高,可实现自动化,使用简便,安全,无放射性污染等优势, 倍受人们的青睐,成为标记免疫分析的一个重要方向[61. 2.4时问分辨荧光免疫分析(TRFIA)时间分辨荧光免疫 是继放免,酶免和化学发光后成为一种更新,更敏感的检测 方法.主要取决于标记稀土离子的独特的荧光谱特性:激发 谱宽,发射谱窄,STOKES位移大,荧光寿命长;通过采用高 灵敏的时间分辨荧光分辨技术.完全排除自然界一般荧光的 干扰.此项技术具有灵敏度高,稳定性好,线性范围宽,标记 物制备简便,有效期长,不污染环境,操作简单,应用范围广 等优点,是取代放免和酶标的最佳免疫分析技术.时间分辨 免疫荧光技术虽然问世仅十余年,但在方法学研究和应用方 面均发展迅速.目前,荧光测量仪已进入第三代,该项分析技 术已实现高度自动化.现已有肿瘤系列的试剂种类十几种. 如:AFP,CEA,PSA,CA125,CA199等. 2.5基因芯片的应用基因芯片又称DNA芯片,DNA阵 列,DNA微集阵列等.是生物芯片的一种.具有快速,高效, 高通量,高度并行性及高度敏感性,自动化程度高等优点171. 基因芯片技术的出现,为在全基因组范围内寻找与肿瘤发 生,发展相关的基因变化提供了一个强有力的手段.自De. Risi等聊利用基因芯片技术研究人类肿瘤以来,这一崭新技 术已成功地应用于多种肿瘤的基因达谱分析,肿瘤进展相 关基因及诊断指标筛选.特别是用于多种恶性肿瘤分子学分 类,分型及对治疗的反应,肿瘤转移复发和预后的预测等研 究u1.由于技术的原因,以前我们很难想象对某一肿瘤进行 几十种标志的测定,而基因芯片技术将这种理想成为了现 实. 2.6表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI_T0F— MS)表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI—T0F— MS)是一种新的蛋白质检测技术.其测定过程迅速,方法敏 感,特异性高.不会破坏所测定的蛋白质.目前的肿瘤标志物 敏感性和特异性不高.急需找到新的标志物.SEL1)I—TOF一 59 MS技术因其快速,灵敏,高通量等优点得到人们的青睐.已 广泛应用于寻找肿瘤标志物研究旧. 3结论 综上所述,无论何种方法检测.均是针对单个肿瘤标志 物.由于目前临床常用的肿瘤标志物在诊断恶性肿瘤时灵敏 度和特异性不够高,故目前主要用于肿瘤的辅助诊断,不能 作为肿瘤诊断的依据,也不提倡对无症状人群进行普查【l31. 由于同一种肿瘤标志物可在不同的肿瘤中出现,为提高肿瘤 标志物的辅助诊断价值和确定何种标志物.可进行肿瘤标志 物的联合检测.然而,用传统的检测技术对几十种肿瘤标志 物检测是不现实的.随着人类基因组计划的完成,新技术层 出不穷,生物芯片技术,飞行质谱技术等相继出现,为癌症的 早期诊断带来了希望.基因组学从宏观上为发现肿瘤成为可 能,而蛋白质组学在蛋白质肿瘤标志物的帮助下,使寻找和 定位肿瘤成为可能.两种或多种类型的肿瘤标志联合应用, 互相补充,将使人类对肿瘤早期诊断的梦想成为现实. 【参考文献】 【1]汤钊猷,主编.现代肿瘤学.上海:上海医科大学出版社, 1993.264 【2]SellS.Cancermarkerofthe1990sclinlabMed,1990,10:1 [3]3EkinsRP,Lagandassays:Fromelectrophoresisto miniaturizedmicroarrays.ClinicalChemistry,1998,44(9): 2015 【4J陈智周,范飞舟,范振符,等.肿瘤标志物放射免疫分析发 展.癌症进展杂志,2004,2(1):51 【5]方福德,周吕,丁谦,张德昌,主编.现代医学实验技巧权 术全书.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出 版.1995.332 【6]郭玉华,屈檩凌波,昊拥军,等.化学发光免疫分析在肿瘤 标志物检测中的应用.国外医学放射医学核医学分册. 2oo4,28(5):220 【7]蝴蝶,廖静,等.基因芯片技术在肿瘤研究中的应用.首都 医科大学学报,2004,25(1):129 【8]DeRiJ,peulandL,BrownPO,eta1.UseofaeDNA microarraytoanalysegeneexpressionpauemsinhuman cflBcer.NatGenet,1996,14(4):457-460 【9]GolubTR,SlonimDK,TamayoP,eta1.Molecular classificationofcancerclassdiscoveryandclassprediction bygeneexpressionmonitoring.Science,1999,286(5439):531 【lO]AlizadchAA,EisenMB,DavisRE,eta1.Distincttypesof diffuselargeB-celllymphomaidentifiedbygeneexpression profiling,.Nature,2000,403(6769):503 【11】PerouCM,SoftieT,EisenMB,eta1.Molecularportraitsof humanbreastmmours.Nature,2000,406(6797):747 【12】宋森涛,等.蛋白质芯片质谱仪在肿瘤标志物研究中的应 用.国外医学肿瘤学分册.2003.30(6):415 【l3】中华医学会检验医学分会肿瘤标志物专家委员会.肿瘤 标志物检测临床应用的基本原则(讨论稿).中华检验医 学杂志,2004,27:393