布洛芬颗粒的人体药动学及生物等效性研究

布洛芬颗粒的人体药动学及生物等效性研究 布洛芬颗粒的人体药动学及生物等效性研 究 ?436? 药学服务与研究PharmCare&Res2009Dee;9(6) 杜震,等.布洛芬颗粒的人体药动学及生物等效性研究 布洛芬颗粒的人体药动学及生物等效性研究?论着? 杜震,田春莲.,隋杨,赵春杰. (1.中国医科大学附属第一医院药剂科,沈阳110001;2.沈阳药科大学药学院药物教研室,沈阳110016;3. 沈阳药科大学 药学院,沈阳110016) [摘要]目的:研究单剂量口服布洛芬颗粒的药动学特征,并评价两种制剂的生物等效性.方法:采用双周期交叉试验, 18名健康志愿者分别单剂量口服受试试剂或参比制剂布洛芬颗粒600mg,用HPLC法测定血药浓度,计算药动学参数,并进 行统计分析.结果:布洛芬颗粒受试制剂和参比制剂的主要药动学参数分别为t…(2.56?0.51)和(2.56?0.51)h,Cmax (42.81?8.00)和(42.76?7.84)/~g/mL,tl/2(1.79?0.17)和(1.75?0.21)h,AUC.,15(105.10?12.90)和(105.67? 10-32)p-g'h?mL,AUCo,(105.99士12.94)和(106.60?10.33)/lg?h?mL_..结论:受试制剂的相对生物利用度为 4.66),两种制剂具有生物等效性. (99.29? [关键词]布洛芬;药代动力学;生物等效性;色谱法,高压液相;颗粒剂 [中图分类号]R969.1,R971.1[文献标识码]A[文章编号]1671—2838(2009)06—0436—04 Pharmacokinetiesandbi0equiValenceofibuprofengranules DUZhen一,TIANChun— lian,SUIYang,ZHAOChun-jie.(1.DepartmentofPharmacy,theFirstHospitalaffiliatedtoChina MedicalUniversity,Shenyang110001,China;2.DepartmentofPharmaceuticalAnalysis,SchoolofPharmacy,ShenyangPharma— ceuticalUniversity,Shenyang110016,China;3.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016, China) [ABSTRACT]0bjective:Tostudythepharmacokineticsofibuprofengranulesandevaluatethebioequivalenceoftestandref— ereneeformulations.Methods:Eighteenhealthyvolunteersweregivenasingleoraldoseof600mgibuprofengranulesoftestand referenceformulationsrespectivelyinatwo-periodcross— overtest.PlasmaconcentrationofibuprofenwasdeterminedbyHPLC method.Pharmacokineticparametersofthetwoformulationswerecalculatedandstatisticallyanalyzed.Results:Themainphar— macokineticparametersoftestandrefeFenceformulationsofibuprofengranuleswereasfollows,t(2.56?0.51)and(2.56? 0.51)h,c…(42.81?8.00)and(42.76?7.84)/~g/mL,t1,2(1.79?0.17)and(1.75? 0.21)h,AUCo(105.104-_12.90)and (105.67?10.32)g?h?mL一,AUC0一..(105.99土12.94)and(106.60+10.33)g?h?mL 一.Conclusion:Relativebioavail— abilityofthetestformulationis(99.29?4.66)%.Thetwopreparationsarebioequivalent. [-KEYWORDS]ibuprofen;pharmacokinetics;bioequivalence;chromatography,highpressureliquid;granules ~PharmCare&Res,2009,9(6):436—439] 布洛芬又名异丁苯丙酸,1967年由美国Bouts 公司研发,作为一种疗效确切,毒副作用小,安全性 高的烷基丙酸类解热镇痛抗炎药在临床广泛应用. 布洛芬可以抑制血栓素A(TXA)的合成,改善患 者免疫功能,提高抗感染能力,使炎症前细胞因子产 物,氧自由基,氮氧化物,过氧化亚硝酸盐和白细胞 黏附因子表达降低,抑制损伤后纤维增生,损伤组织 周围血管收缩,缺血和血管重构,抑制休克,恢复血 压,纠正酸中毒,增加心输出量及提高由内毒素引起 的休克的存活率.布洛芬的抗炎,镇痛及解热作用 明显优于阿司匹林等其他非甾体抗炎药,口服吸收 迅速,见效快,降温持续时间长,且不良反应少.本 研究参考有关文献[1.],采用HPLC法测定了健康 人口服两种布洛芬颗粒后的血药浓度,计算有关药 动学参数并进行生物等效性评价,为临床合理用药 提供依据. 1材料和方法 1.1仪器LC_1OAT泵和SPI)一10A型紫外可见 分光光度检测器(日本岛津公司);KromasilCs色 谱柱(大连中汇达科学仪器有限公司);N2000型色 谱工作站(浙江大学智达信息有限公司); TGL一16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂); YKH一?型液体快速混合器(江西医疗器械厂). 1.2试剂和药品布洛芬对照品(中国药品生物制 品检定所,批号100179—200303);甲醇,乙腈(色谱 纯,天津市康科德科技有限公司);磷酸(分析纯,沈 [作者简介]杜震(1974一),男(汉族),硕士生,主管药师. E-mail:tianchun1ian823@163.com 药学服务与研究PharmCare&Res2009Dec;9(6) 杜震.等.布洛芬颗粒的人体药动学及生物等效性研究?437? 阳市试剂五厂);三重蒸馏水(沈阳药科大学药学院 药物分析教研室自制);布洛芬颗粒受试制剂(规格 200mg/包,哈尔滨华瑞生化药业有限责任公司,批 号0508O1);布洛芬颗粒参比制剂(规格200mg/包, 哈药集团哈尔滨中药三厂,批号050710).受试制 剂和参比制剂经检验均质量合格. 1.3受试对象和方法 1.3.1受试者的选择选择l8名男性健康在校大 学生作为受试者,年龄(20.9?1.3)岁,体重均> 5o,体重指数为19,24.受试者身体健康,无烟, 酒重瘾者,无心,肝,肾,消化道,神经系统疾病,无精 神异常和代谢异常等病史.试验前两周内及试验期 间禁服其他任何药物,试验期间禁烟,酒及含咖啡因 的饮料.受试者均签署知情同意书,试验经中国医科 大学附属第一医院医学伦理委员会批准后实施. 1.3.2给药采用双周期交叉试验,以简单随 机化分组法将健康受试者随机分为两组.受试者于 服药前一天晚上食用清淡食品,受试当日晨检测心 电图,早晨7:OO空腹口服受试制剂或参比制剂3袋 (含布洛芬600mg),分别于服药当时和服药后 0 A器 要 0.25,0.5,1.0,1.5,2.0,3.0,4.0,6.0,8.0,11.0, 15.0h取肘静脉血3.0,5.0mI,置于肝素抗凝的 离心试管中,4×10r/rain(离心半径3cm)离心 5min,分离血浆测试.服药后4h统一进食低脂肪 餐.两周后交叉服药. 2方法和结果 2.1HPIC法测定布洛芬血药浓度 2.1.1色谱条件色谱柱:KromasilC色谱柱 (250mill×4.6mm,5tim);柱温为室温;流动相:甲 醇一0.02mol/L磷酸二氢钾一乙腈一磷酸(80:25: 5:0.08);流速1.0mL/min;检测波长225nm;检 测器灵敏度0.O1AUFs;进样量2OI. 2.1.2血浆样品处理方法精密吸取血浆样品 0.5mI,加入1mI甲醇,涡旋混合振荡lrain,1× 10r/rain(离心半径3cm)离心3rain,取上清液 2OI进样. 2.1.3方法专属性血浆样品按本法分离测定,所 得色谱图见图1.由图1可见,布洛芬的保留时间约 为7.7rain,空白样品中内源性物质对测定无干扰. 0.Ol1.462.904.345.797.230.O01.442.884.335.777.2l 时间(timin) 图1布洛芬的HPLC谱图 Fig1ttPLCphotogramsofibuorofen A:空白人血浆;B:空白人血浆+布洛芬标准品(15t~g/ml);C:受试者H给药后lh的血 浆样品 2.2方法学验证 2.2.1标准曲线的制备分别取7份空白血浆 1.0mL置具塞离心管中,精密加入不同量的布洛芬 标准溶液使成O.2,0.8,1.4,5.0,15.0,3O.0, 6O.0tlg/mI的标准样品溶液,按2.1.2项下方法处 理,进样分析.以布洛芬峰面积(A)为纵坐标,浓度 (c)为横坐标,按加权最小二乘法进行回归,得标 准曲线方程为:A一3.48×10f一4.52×103,r一 0.9980(权重1/c),线性范围0.2,60.0ug/mI, 最低定量限为0.2Hg/mI. 2.2.2回收率实验配制低,中,高浓度分别为 1.0,15.0,60.0~g/mI的布洛芬模拟血浆样品各 7份,按2.1.2项下方法处理,以HPIC法测定布洛 芬的浓度.计算得到3种浓度的方法回收率分别为 (106.39?3.44),(101.49?3.22)和(100.04? 2.21)%,RSD分别为3.23,3.17和2.2l (n一7). 2.2.3精密度实验配制低,中,高浓度分别为 1.0,15.0,60.0~g/mL的布洛芬模拟血浆样品,按 2.1.2项下方法处理,1d内测定7次,连续测定 7d.计算得到低,中,高3个浓度的日内RSD分别 为3.83%,3.54和2.67,日问RSD分别为 4.26,3.68和2.83("一7). 2.2.4稳定性实验(1)室温稳定性取空白血浆 配制成1.0,15.0,60.0~g/mI布洛芬标准血浆质 控样本,于室温分别放置0,1,2,4,8h,按2.1.2项 下方法操作并进样分析.结果低,中,高浓度血浆样 品的RSD分别为5.40,1.O2和0.46("一5). (2)冻融稳定性取空白血浆加入一定量的布洛芬 ? 438? 1SSN1671—2838PharmCare&Res药学服务与研究2009Dec;9(6) WWW.pcarjourna1.net.caE—mailPharmCR@yahoo.com.caPhn/Fax86—21— 65519829 对照品溶液,配制成1.4,15.0,60.0g/mL的标准 血浆质控样本,于一2o?冰冻24h,取出待完全融 解后按2.1.2项下方法操作并进样分析,反复冻融 3次.结果低,中,高浓度的RSD分别为0.63, 2.31和0.06(一3).(3)长期稳定性同法制 备上述系列标准血浆质控样本各3份,于一2O?分 别冷冻0,7,14,21d后,取出待完全融解后,按 2.1.2项下方法操作并进样分析,结果低,中,高浓 度(1.4,15.0,60.0gg/mL)布洛芬的RSD值分别 为2.23,2.03和1.45(一4). 2.3实验结果 2.3.1血药浓度18名健康受试者口服两种布洛 芬颗粒后的平均血药浓度一时间曲线见图2. 2.3.2药动学参数根据平均血药浓度一时问曲线 计算有关药动学参数,以梯形法求算血药浓度一时间 曲线下面积(AuC).根据tl/2一(1n2)k求算消除 半衰期(./),峰浓度(c)和达峰时间(.)用实测 值表示,得到主要药动学参数见表l.将AUC和 皇 ? \ Q 蠖 0123456.789l0lll2131415 时间(t/h) 图218名健康志愿者口服布洛芬颗粒600mg 后的平均血药浓度一时问曲线 Fig2Meanplasmaconcentration-timecurves ofibuprofenafteroraladministrationof600mg ibuprofengranulesin18healthyvolunteers 0:参比制剂;?:受试制剂;z?S,一18 c对数转换后进行方差分析,并采用双单侧t检验 和(1—2a)置信区间法进行生物等效性评价,对受试 制剂和参比制剂的主要药动学参数进行分析. 表118名健康志愿者口服布洛芬受试制剂和参比制剂后的主要药动学参数 Table1Mainpharmaeokineticparametersafteroraladministrationof ibuprofenreferenceortestformulationsin18healthyvolunteers 2.3.3生物等效性评价受试制剂和参比制剂的 f,,AUC0,和AUG—.在剂型间,个体间和 周期间均无显着差异.双单侧t检验法和(1—2a)置 信区间法计算结果表明,两种制剂单剂量交叉口服给 药的,,,AUG~l5和AUG一的t,t(其中1代 表受试制剂,2代表参比制剂)值均大于t1...,X (厨表示lnAUC)落在(1—2a)置信区间内,并且受试 制剂的AUG,和AuC0,..的9O可信限在参比制 剂的80,125%,Cma在参比制剂的70,143, 因此认为受试制剂与参比制剂生物等效.受试制剂 的相对生物利用度为(99.29?4.66)%. 3讨论 采用HPLC法测定血浆中布洛芬浓度并进行 药动学研究的报道[5I已有不少,但多是关于片剂, 缓释片剂,缓释胶囊和混悬液等剂型.本研究测定 了两种布洛芬颗粒剂的生物等效性和体内药动学参 数,为全面研究不同剂型的布洛芬制剂提供了参考. 很多文献采用内标法进行布洛芬定量分析_7],在 筛选内标过程中工作量很大.本研究建立的HPLC 法,采用紫外检测器,方法简单,结果准确可靠,而且 采用外标法定量,大大减少了工作量.在所建立的 色谱条件下,布洛芬与血浆中杂质实现良好分离, 回收率,精密度和稳定性好,适用于布洛芬颗粒剂 的药动学研究. [参考文献] [1]杜智敏,张波,黄丽军,等.布洛芬缓释胶囊相对生物利用度 研究I-J].中国药房,2002,13(11):671—672. DuZhi—min,ZhangBo,HuangLi-jun,eta1.Relativebioavail— abilityofibuprofensustained—'releasecapsuleinhealthyvolun—' teers[J].ChinaPharmacy,2002,13(11):671—672.Chiaesewith abstractinEnglish. [2]王本杰,倪梅媛,郭瑞臣.布洛芬混悬液与片剂人体生物等效性 研究EJ3.中国临床药学杂志,2002,11(1):32—35. WangBen-jie,NiMei—yuan,GuoRuithen.Bioavailabilityof ibuprofensuspensionandtabletsinhealthyvolunteers[J]. ChinJClinPharm,2002,l1(1):32—35.Chinesewithabstract inEnglish. [3]吴琳华,赵红光,樊宏伟,等.多剂量口服复方布洛芬缓释片与 印们?{寻加0 药学服务与研究PharmCare&Res2009Dec;9(6) 杜震,等.布洛芬颗粒的人体药动学及生物等效性研究?439? 普通片的药代动力学及相对生物利用度EJt.中国临床药理学 杂志.2001,17(2):129—132. WuLin—hua,ZhaoHong—guang.FanHong—wei,eta1.Pharma— cokineticsandrelativebioavailabilityaftermultipleoraldoses ofsustainedreleaseandconventionaltabletsofibuprofenin malevoluntersEJ].ChinjClinPharmaeol,2001,17(2):129 132.ChinesewithabstractinEnglish. E4]钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题 [J].药物分析杂志,1996,16(5):343—346. ZhongDa—fang.Someproblemsaboutestablishmentofstand— ardcurveforbiologicalanalysisbyweightedleastsquare method[J1.ChinJPharmAnal,1996,16(5):343346.Chinese. [51赵侠,孙培红,周颖,等.高效液相色谱法测定人血清中布 洛芬浓度[J1.中国临床药理学杂志,2004,20(4):295—298. ZhaoXia+SunPei—hong,ZhouYing.eta1.Determinationof ibuprofeninhumanserumbyHPIC[J].ChinJClinPharma— col,2004,20(4):295—298.ChinesewithabstractinEnglish. [6]张玉,马力,张嵩安,等.右旋布洛芬混悬剂人体相对生物 ? +-+一——卜一—一--卜---卜"?'一 (上接第435页) 置100mI量瓶中,加甲醇溶解,摇匀,制成含大黄酸 83.0t*g/mL,大黄素37.0gg/mL的混合溶液,摇匀,置冰箱 保存,作为对照品贮备液.精密吸取该对照品混合贮备液 0.5,1,2,3,4,5,1OmL分别置10mL量瓶中,加甲醇至刻 ,作为对照品稀释液备用. 度,摇匀 2.3供试品溶液制备精密量取复方大黄黄柏洗剂2mL 置lOmL量瓶中,加2mol/IH2SO1.2mL,置水浴加热 1h,加甲醇至刻度,超声20min,放冷,加甲醇至刻度摇匀. 用0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液,进样 2OL进行HPLC分析.色谱图见图1. 024680246810121402468 时间(t/min) 图l各样品溶液的HPLC谱图 A:大黄酸,大黄素对照品混合液;B:复方大黄黄柏洗剂 C:阴性对照品溶液;l:大黄酸;2:大黄素 2.4阴性对照品溶液制备按复方大黄黄柏洗剂配方除去 大黄后,按2,3项下方法制备阴性对照品溶液.备用. 2.5线性范围精密取2.2项下方法配制的系列浓度的对 照品稀释液2OI注入色谱仪,按上述色谱条件进行测定, 所得峰面积(A)与样品浓度(c)进行线性回归,得线性方程 为大黄酸A:2.1912×10f+1752.8,r=0.9998("=7), 大黄素A一2.5149×10c+1681.2,r=0.9997(=7) 结果表明大黄酸在4.15,83.0Fg/mI,大黄素在l_85, 利用度[J].中国医院药学杂志.2006.26(10):1236一l238. ZhangYu.MaLi.ZhangSong-an.ela1.Relativebioavailability of()一(+)一ibuprofensuspensioninhumansubjects[J1.ChinJ HospPharm,2006,26(10):1236—1238.Chinesewithabstract inEnglish. [7]刘蕾.李可欣,张贵军,等.布洛芬缓释胶囊生物利用度研究 [J].中国药房,1998,9(3):121122. IiuLei,LiKe—xin.ZhangGui—jun,ela1.Relativebioavailability ofthesustained—releasecapsuleofibuprofen[J].ChinaPhar— macy,1998,9(3):121-122.ChinesewithabstractinEnglish. [8]万元胜,陈华庭,陈东生.布洛芬颗粒剂的人体生物等效性研究 [J].中国药师.2008,11(5):508510. WanYuan—sheng.ChenHua—ting,ChenDong—sheng.Studyon bioequivalanceofibuprofengranulesinhealthyvolunteers[J]. ChinaPharmacist,2008,11(15):508—510.Chinesewithab— stractinEnglish. [收稿日期]2009—05—05[修回日期]2009—08—20 [本文编辑]兰芬姚春芳 37.0/,g/mL浓度范围内均具有良好的线性关系. 2.6稳定性和精密度实验取供试品溶液,在0,4,8,24, 48h分别进样2OL,记录峰面积.结果大黄酸RSD一 2.O1%,大黄素RSD=l_31(":5).精密度实验:取对照 品混合液,重复进样5次,每次进样20L,记录峰面积.结 果,大黄酸RSD=1.Ol,大黄素RSD=0.62(一5).由 图1可知,大黄酸tR约为4.8min,大黄素tR约为6.6min. 由图lC可见,在本实验条件下,阴性制剂中未检出大黄酸和 大黄素. 2.7样品测定取3批样品,按2.3项下同法操作测定含 量,按外标法计算得到批号分别为070605,070608,070609 的复方大黄黄柏洗剂中大黄酸含量为81_39,8O.38和 78.79,大黄素的含量为24.33,26.O5和29.81"g/mL. 2.8重复性实验和加样回收率实验精密吸取同一批号 (070605)复方大黄黄柏洗剂2mL(5份),按2.7项下方法同 法操作,结果测得大黄酸平均含量为8l_39ttg/mL,大黄素 为24.33/~g/mL,大黄酸RSD为0.39,大黄索为0.71 ("一5).精密吸取已知浓度的样品2mL(5份),分别精密 加入对照品溶液1mI,按样品测定项下方法操作,测得大黄 酸平均回收率为(98.1?1.78),大黄素为(96.6?1.2o) (n一5) 3讨论 根据文献Eel报道,本实验在254nrn波长处测得最大吸 收,但是此处大黄素与大黄酸两峰分离度不好,杂质吸收较 强,故选择434nITl作为检测波长,取得较好效果.以甲醇 水一磷酸(85:15:0.1)为流动相,调节pH值为3.3,结果复 方大黄黄柏洗剂中的大黄酸和大黄素得到了有效分离混 合对照品中大黄酸和大黄素峰的分离度分别为2.07和 1.72,理论塔板数均>6.5×10,拖尾因子均<1.O5.实验 (下转第443页)