糖核苷酸的酶法合成与唾液酸糖肽的分离制备
分类号:,,, 单位代码:,,,,,密级: 学 号:,,,,,,,,, ?‖鬃办雪 硕士学位论文 (专业学位) 论文
目: 糖核苷酸的酶法合成与唾液酸糖肽的分 离制备 ,,,,,—,,,,,,,,; ,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,;,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,;,,, ,,,,,;,,,, ,, ,,,,,,,,;,,,,,,,,, 合作 导 师 ,,,,年,月,,日 关于学位论文使用授权的声明 本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此
)论文作者签名:鞯导师签名: 骆丛日 期:细至~堕:,望 ,(,糖蛋白及其糖链…………………………………………………………………(, ,(,(,糖蛋白的结构……………………………………………………………((, ,(,(,糖蛋白及其糖链的生物学功能…………………………………………((, ,(,(,糖蛋白和糖肽的体内合成途径…………………………………………一, ,(,(,均一化糖蛋白的合成策略………………………………………………,, ,(,(,内切糖苷酶法合成均一化糖蛋白研究进展……………………………,, ,(,(,唾液酸糖肽的研究进展…………………………………………………,, ,(,(,唾液酸糖肽在糖苷内切酶法中的应用…………………………………, ,第二章葡萄
,, 糖(,(,和半乳糖(,(,及其结构类似物的化学酶法合成…………………,(,引
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糖(,(,………………………………………………………(,, ,(,(,糖(,(,的结构鉴定………………………………………………………,, ,(,结果与讨论………………………………………………………………………,, ,(,(,半乳糖激酶蛋白表达和纯化……………………………………………,, ,(,(,半乳糖激酶酶活检测……………………………………………………, , ,(,(,各种糖(,(,的合成及定性检测…………………………………………,, ,(,(, ,,,法定量测定各种糖(,(,的产率……………………………………,, ,(,(,几种糖(,(,的大量合成及纯
化…………………………………………,, ,(,本章小
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法合成,,),(,,,,,,,及其结构类似物……………………………………,, ,(,引
言………………………………………………………………………………,, ,(,实验材料…………………………………………………………………………,, ,(,(,菌株和载体………………………………………………………………,, ,(,(,酶、试剂和耗材…………………………………………………………,, ,(,(,培养基和缓冲液…………………………………………………………,, ,(,(,主要仪器…………………………………………………………………,, ,(,实验方法…………………………………………………………………………,, ,(,(, ,,,,重组质粒的转化和蛋白的表达与纯
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测…………………………………………………………………………………((,, ,(,(,一锅法合成,,,(,,,和,,,(,,
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,(,(, ,论………………………………………………………………………,,,,,的蛋白表达和纯化…………………………………………………,, ,(,(,活性炭脱盐纯化…………………………………………………………,, ,(,(, ,,,的结构测定…………………………………………………………(,, ,(,(,反向,,,,检测,,,纯
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论………………………………………………………………………,, ,(,(,从鸡蛋卵黄中分离,,,…………………………………………………,, ,(,(, ,,,结构
……………………………………………………………(,, ,(,(, ,,,纯度测定……………………………………………………………(,, ,(,本章
…………………………………………………………………………,,全文总
结…………………………………………………………………………………(,,参考文献…………………………………………………………………………………(,,攻读学位期间发表的学术论文目
录……………………………………………………(,,致
谢………………………………………………………………………………………(,,附
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,……………………………………………………………………………,,, 山东大学硕士学位论文 中文摘要 糖类(包括单糖、寡糖和多糖)和糖缀合物广泛存在于生物体内,作为重要的结构组分和信息分子,在许多生物学过程中都发挥着重要的作用。糖链的结构与其功能有着密切的联系,有些糖链的改变会引起特定的生理反应,因此,糖链的结构与功能研究是糖生物学和生物医药领域的关注热点。 本论文主要分为两个主要部分:一是合成多种糖核苷酸(第二章和第三章),作为糖基转移酶合成糖缀合物的糖基供体;二是分离制备唾液酸糖肽,作为内切糖苷酶合成糖缀合物的糖基供体。 在糖核菅酸的体外合成中,最为简便的方法是利用补救途径中的糖激酶和焦磷酸化酶进行合成。单糖首先在糖激酶的催化下合成糖(,(,,再利用焦磷酸化酶合成相应的糖核苷酸。因此,糖(,(,的合成是糖核苷酸合成的第一步。 本论文的目标之一是解决酶法合成,,,,,,;(,(,及其结构类似物的问题,进而实现,,,(,,,,,,;及其结构类似物的酶法合成。本文第二章首先对肺炎链球菌来源的半乳糖激酶(,,,,,,,,)进行了体外的表达及纯化,然后,我们选用了,,种单糖(包括,,,,,,;及其结构类似物和
,种,型糖)与半乳糖激酶进行反应,并对产物和产率进行了检测。半乳糖激酶具有较宽的底物适应性,它能够利用,,种单糖中的,,种作为底物,对于,(,、,(,、,(,位的变化都有较强的适应性,但是其催化活性会随着,(,位空间位阻的变大而逐渐降低,并且若在半乳糖结构中有两个位置同时变化,,,,,,,,,则无法利用。另外,,型和,型对于,,,,,,,,的识别也是十分重要。相比之前报道过的半乳糖激酶,它可以较为高效的合成,,;(,(,(,,,)、,,,,,;(,(,(,,,),同时还具备合成从未报道过的,(,,,(,(,(,,,)的能力,这也是对半乳糖激酶研究的一个重大发现。同时,我们对几种糖(,(,进行了大量合成,并对其进行了纯化和结构鉴定,建立了一套完整的合成(纯化(鉴定糖(,(,的制备体系。 本文第三章在第二章研究的基础上,又对大肠杆菌来源的,,,(,,;焦磷酸化酶进行了表达和纯化,然后以第二章中半乳糖激酶能够利用的单糖为底物,利用半乳糖激酶和,,,(,,;焦磷酸化酶,一锅法合成各种糖核苷酸,并对产物的结构和产率进行了测定。实验结果表明,在,,种单糖中,其中,种单糖可以通过,锅法直接合成相应关键词: 糖(,(磷酸;糖核苷酸;半乳糖激酶;,,,(葡萄糖焦磷酸化酶;酶法合成;唾液酸糖肽;分离制备; 山东大学硕士学位论文 ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,(,,;,,,,,, ,,,,,,;;,,,,,,,,,,,,,,,;;,,,,,,, ,,, ,,,,,,;;,,,,,,,),,,,,,;,;,
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