维生素C的测定

维生素C的测定 维生素C的测定 发布日期:2010-09-01 浏览次数:9051 维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新鲜 维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条件下又是一种抗氧化剂。 维生素C(还原型)纯品为白色无臭结晶，熔点190,192?，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸(有生理作用)。如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。 根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有 (1)2，6-二氯靛酚法 (还原型V) C (2)2，4-二硝基苯肼法 (总V) C (3)碘酸法 (4)碘量法 (5)荧光分光光度法 一、2，6-二氯靛酚滴定法 1、原理: 还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色， 被还原后红色消失。还原型 抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没 有杂质干扰时，一定量的样 品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成 正比。 2、试剂 ? 1%草酸溶液:称取10g草酸，加水至1000ml; ? 2%草酸溶液:称20g草酸，加水至1000ml; ? 维生素C标准液:准确称20mgV溶于1%草酸中，并稀释至100ml，C 吸5ml于50ml容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有0.02mgV; C ? 0.02%2，6-二氯靛酚溶液:称取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250ml，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。 标定一:吸标液(V)5ml于三角瓶?加6%KI溶液0.5ml?加1%淀粉C 3滴?用0.001N KIO标液滴定到淡兰色。 3 计算: 抗坏血酸浓度(mg/ml)= (V × 0.088)/ V 12 V - 滴定时消耗0.001N KIO标液的体积(ml) 13 V -维生素C重量(g) 2 0.088 -1ml0.001N KIO标液?维生素C的量(mg/ml) 3 标定二:吸5ml已知浓度V标液 ? 加5ml1%草酸 ? 用染料2，6- C 二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点 计算:每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度(T) T= (C × V)/ V 12 C - 维生素C的浓度(mg/ml) V -维生素C的体积(ml) 1 V -消耗2，6-二氯靛酚的体积(ml) 2 ? 0.001N KIO标液:吸0.1N KIO溶液5ml?于500ml容量瓶内?33加水至刻度，每毫升相当于V0.008mg; C ? 0.5%淀粉溶液; ? 6%KI溶液; 3、操作方法 ? 提取:称样50g?加2%草酸100ml?到入捣碎机中?处理?过滤 ?颜色若深可加白陶土 ? 滴定:吸5ml样液?于三角瓶?用染料滴定至粉红色?15秒内不 褪色 计算: V(mg/100g)=(V × T)/ W × 100 C V -消耗染料体积(ml) T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数 W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数 4、 ? 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水; ? 滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色变化的参考; ? 样品进入实验室后，应浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，损失维生素C; 2+? 贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子(Fe)，要用8%的醋酸代替2%草酸。这时如用草酸，低铁离子可以还原2，6-二氯靛酚，使测定数字增高，使用醋酸可以避免这种情况的发生; ? 整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化; ? 在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇消除; ? 测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。 二、2，4-二硝基苯肼法 可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2，4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总V。 C1、原理: 用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，在 继续氧化为二酮古乐糖酸。 二酮古乐糖酸与2，4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎，其成色的强度 与二酮古乐糖酸浓度呈正 比，可以比色定量。 2、步骤 ? 样品处理与 称一定样 ? 加等量2%草酸 ? 于高速捣碎机捣碎 ? 取匀浆20g ? 用1%草酸定容100ml ? 过滤 ? 取滤液10ml ? 加1%草酸10ml ? 加少量活性炭 ? 摇1分钟 ? 静置过滤 ? 各取滤液2ml于样品管和样品空白管 ? 各管加入1滴硫脲溶液 ? 于样品管中加入2，4-二硝基苯肼0.5ml ? 分别于两个管加盖 ? 于37?保温箱3小时 ? 取出后样品管放入冰水中 ? 样品空白管取出后冷至室温 ? 在样品空白管加入2，4-二硝基苯肼 ? 0.5ml ? 样品管和空白管都于冰浴中 ? 滴加85%HSO2ml于各管中 ? 边滴边摇 ? 防止24 温度升高炭化后呈黑色 ? 冰浴中30分钟后取出 ? 室温下放置30分钟后，在540nm测消光值，从标准曲线上查出相应的含量 ? 标准曲线的绘制 取5个50ml容量瓶编号 1 2 3 4 5 加V标液0.2mg/ml 10 20 30 40 50ml C 取5个比色管取相 应 2 2 2 2 2 加硫脲溶液(滴) 1 1 1 1 1 2，4-二硝基苯肼(ml)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 于37?保温箱3,4小时，取出于冰浴中，然后滴加85%硫酸2.5ml?取出放30分钟?在540nm下测各消光值绘标准曲线，同时做空白。 计算:每百克食品中抗坏血酸的毫克数=C/W *100