日本血吸虫尾蚴经口腔黏膜感染小鼠的研究

日本血吸虫尾蚴经口腔黏膜感染小鼠的研究 日本血吸虫尾蚴经口腔黏膜感染小鼠的研 究 2004年第2卷第3期JournalofTropicalDiseasesandParasitology2004.Vol2.No3 日本血吸虫尾蚴经口腔黏膜感染小鼠的研究 李伟 在寄生虫与寄生虫病的科学研究与教学活动 中,经常使用家兔和小白鼠做Et本血吸虫病的动 物模型,过去通常用直接经腹壁皮肤或经腹腔注 射尾蚴的方法感染动物}1,-3】,但用尾蚴经El腔黏膜 感染动物模型的方法未见文献报道,笔者经过数 年的摸索,进行了经口腔黏膜感染的观察研究. 材料与方法 一 ,日本血吸虫尾蚴 由湖南省寄生虫病防治研究所提供的阳性钉 螺,以2,4只/管分别放人指管内,管内注满冷开 水,置于25?有光照的温箱内孵育4,12h,待尾蚴 逸出后备用. 二,实验动物 体重18,22g的雄性昆明种健康小白鼠(由本 院动物管理科提供)240只,随机分成三组,分别用 口腔黏膜法,皮肤法,腹腔注射法感染尾蚴后,分 笼常规饲料喂养. 三,方法 1.口腔黏膜感染:一操作者握持小鼠,用眼科 镊置于鼠舌上将其El腔扩开,另一操作者用接种 环挑取约30,40条尾蚴直接送人小鼠口腔后咽部 并轻轻涂抹即可,5min后方能喂水喂食. 2.经腹壁皮肤感染:用特制木板固定小鼠,按 每只小鼠30,40条尾蚴常规方法感染,15,20min 后移去盖玻片. 3.经腹腔感染:用卡介苗注射器抽取含约30, 40条尾蚴的尾蚴逸出液直接注射于小鼠腹腔. 结果 小鼠感染日本血吸虫尾蚴后45d,解剖小鼠检 查肝脏,肠壁虫卵沉积及肠系膜血管内成虫寄生 情况,感染率均超过90%.感染情况结果详见表1, 表2. 作者单位:671000夫理市,大理学院基础医学部 ? 163? ? 研究报告? 表l旰脏,肠壁虫卵检查结果 注:感染率比较x=1.92,P>0.25 表2肠系膜血管成虫检查结果 注:感染率比较x=0.96,P>0.5 讨论 研究结果表明,用日本血吸虫尾蚴经口腔黏 膜感染小鼠与传统的经腹壁皮肤感染和经腹腔注 射感染,感染率均超过90%.这三种途径感染小鼠 建立日本血吸虫病动物模型的效果差异无显着意 义.在实践中,经皮肤感染法,因所用动物需被较 长时间(15,20min)的固定,容易造成其四肢的损 伤,尤其是小白鼠,在一定程度上影响其存活率; 剪毛操作不当极易造成皮肤的感染;同时,在操作 过程中容易造成尾蚴污染.腹腔注射法虽具有简 便,快速,无须固定动物等优点,但因尾蚴多集中 于液面,用注射器抽取较难,注射时尾蚴易堵塞于 注射器乳头部,穿过针管时脱尾部者较多,因此本 法对尾蚴损伤较大,不易计数,且尾蚴浪费多[41.而 用经El腔黏膜感染的方法,可避免长时间固定动 物,最大限度地减少了对实验动物及尾蚴的人为 因素损伤,操作最简便,快捷,安全可靠性高.因 此,在用小鼠建立日本血吸虫病动物模型时,建议 使用,推广经口腔黏膜法.操作时,应将阳性钉螺 以每指管2,3只分别加冷开水逸尾蚴,而不宜集 中于一窄El三角瓶内,这样各管液面尾蚴密度较 一 致,用接种环挑取时便于计数;小鼠在感染前 (下转第187页) 热带病与寄生虫学2004年第鲞蔓icalDiseasesandParasitol 可能得到错误的结果.表型检测法是直接测定 HIV在药物存在的情况下生长的能力,用IC50和 IC90表示.一般是将病人血浆HIVRNA的pol基 因序列(含蛋白酶和逆转录酶的编码基因)进行 RT—PCR扩增,扩增产物继而插入pol基因缺失型 HIV—l载体以形成重组病毒,因此重组病毒保持 了病人体内病毒对药物的敏感性.通过药物剂 量一反应曲线,表型检测法能够直接检测HIV分 离株对药物的敏感性,而且具有化,自动化的 特点,是药物敏感性测定的"金标准".但此种方法 费用高,耗时,技术难度大,更重要的是须要进行 HIV的培养. 六,预防HIV耐药性产生的对策 任何一种高效抗病毒药物均可导致HIV产生 耐药性.预防HIV耐药性出现的最佳策略就是尽 可能抑制病毒复制,使之达到不能测出水平,并尽 可能将这种状态维持较长时间.为了达到这一目 的,目前推荐的最佳是采用HAART治疗.一 般临床上选用2种NRTIs和1种PIs联合;也可以 选2种NRTIs和1种NNRTIs联合,但后者抗病毒 效力往往不如前者强.在我国已经开始HAART治 疗,初步显示部分患者在治疗后其临床症状 被迅速地控制,病毒载量呈稳定下降趋势,免疫功 能得以重建[10】.值得注意的是,在HAART治疗的 初期阶段,更需要统一的治疗指南,对有关人员严 格培训,做好治疗前和治疗期间的咨询和随防观 察,及时掌握疗效和病毒变异情况.阻止耐药株的 迅猛升 参考文献 1DewolfF,LangeJM,GoudsmitJ,eta1.Effectofzidovudine onserumhumanimmunodmciencyvirusantigenlevelsin symptomfreesubjects.Lancet,1988,1(8582):373—376. (上接第163页) 30min应禁饮食.该方法理论上也可用于建立日本 血吸虫病的家兔等模型,但尚待进一步研究. 参考文献 l赵慰先主编.人体寄生虫学.北京:人民卫生出版社, l983:278. 2004.Vol2.No3?187? 2曾庆平主编.人类艾滋病.第l版.人民卫生出版社, 2001年8月.209. 3SchooleyRT,Ramirez—RondaC,LangeJMA,eta1.Virologic andimmunologicbenefitsofinitialcombinationtherapy withzidovu—dineandzalcitabineordidanosinecompared withzidovudinemonotherapy.JInfectDis,1996,173:1354- l366. 4WeinstockH,RespessR,HeneineW,eta1.Prevalenceof mutationsassociatedwithreducedantiretroviraldrugSUS— ceptibili~amonghumanimmunodeficiencyvirustype—l seroconvertersintheUnitedStates,1993—1998.JInfect Dis,2000,l82(1):330-333. 5HertogsK,BloorS,KempSDeta1.Phenotypicandgenotypic analysisofclinicalHIV—lisolatesrevealsextensivepro— teaseinhibitorcross-resistanee:asurveyofover6000 samples.AIDS.2000;14:l203一l210. 6CoakleyEP,GillisJMandHammerSM.Phenotypicand genotypieresistancepatternsofHIV—lisolatesderived fromindividualstreatedwithdidanosineandstavudine. AIDS.2000;14:F9一l5. 7MaguireM,GartlandM,MooreS,eta1.Absenceofzidovu- dineresistanceinantiretrovlral——naivepatientsfollowingzi— dovudine/lamivudine/proteaseinhibitorcombinationthera. py:virologicalevaluationoftheAVANTI2andAVANTI3 studies.AIDS.2000;l4:l195一l201. 8Casado儿,HertogsK,RuizL,eta1.Non—nueleOsidereverse transcriptaseinhibitorresistanceamongpatientsfailinga nevirapinepiusproteaseinhibitor—containingregimen. AIDS.2000;l4:Fl一7. 9TheEuroGuidelinesGroupforHIVresistance.Clinical andlaboratoryguidelinesfortheuseofHIV-ldrugresis— tancetestingaspartottreatmentmanagement:recommenda— tionsfortheEuropeansetting.AIDS,200l;15:309—320. 10曹韵贞,张福杰,梅珊,等.第一个临床治疗组双汰芝联 合佳息患治疗l5例感染者一年第一届中国艾滋 病性病防治大会论文集(中国艾滋病性病防治增刊) 2001年l1月558—563. (收稿日期2003—10—27编辑李启扬) 2詹希美主编.人体寄生虫学.第5版.北京:人民卫生出 版社,200l:321. 3陈佩惠主编.人体寄生虫学实验技术.北京:科学出版 社.l988:102. 4樊中丽,杜幼芹,望西玉.日本血吸虫尾蚴不同途径感染 小鼠的比较.热带医学杂志,2001,l(2):l51. (收稿日期2004—1—15编辑李启扬)