【doc】胰岛素对酚妥拉明及妥拉苏林拮抗去甲肾上腺素作用的影响

【doc】胰岛素对酚妥拉明及妥拉苏林拮抗去甲肾上腺素作用的影响 胰岛素对酚妥拉明及妥拉苏林拮抗去甲肾 上腺素作用的影响 军总医院1996年第12卷第2期 胰岛素对酚妥拉明及妥拉苏林拮抗 去甲肾上腺素作用的影响 药剂科王峰吕敏吉小莉卢才义 摘要本研究在含40~IU/ml胰岛素的生理溶液环境中,用正常血压大鼠动脉血管研究在高胰岛素 环境中,酚妥拉明及妥拉苏林拮抗去甲肾上腺素(NE)的缩血管作用.实验结果表明,在高胰岛素环境 中,a受体阻断剂酚妥拉明和妥拉苏林拮抗NE缩血管作用明显减弱.药效动力学参数表明,高胰岛素环 境中酚妥拉明和妥拉苏林作用亲和力指数和作用强度明显减小.实验结果提示高胰岛素能降低a受体 阻断剂拮抗NE的缩血管的效能. 主题词胰岛素高血压去甲肾上腺素血管舒张药 目前认为原发性高血压(EH)不是单因性 疾病,胰岛素抗性(IR)和高胰岛素血症(hy— perinsulinmia,HIS)可能是引起EH的重要病 因之一_1j.以往对于IR,HIS和EH的研究多 集中于临床和流行病学调查,已证实IR,HIS 与EH发病有相关关系.针对IR,HIS在高血压 的发病中存在的相关关系,本文在胰岛素存在 与否的离体环境中,用a.肾上腺素受体阻断剂 酚妥拉明(Phen)及妥拉苏林(To1)拮抗去甲.肾 上腺素(NE)缩血管作用进行探讨.目的在于了 解HIS对于血管活性物质的作用. 1材料与方法 1.1离体大鼠胸主动脉环灌流雄性成年 Wistar大鼠,体重250?50g,快速开胸摘取主 动脉,分离脂肪和结缔组织后将其剪成2,3 mm的血管环,垂直悬挂于浴缸中,灌以95%O +5CO2氧合kreb—henseleit液(K—H氏液). 保持温度37?0.5C,经预激,平衡,稳定后,调 节基础张力1.0g,经张力换能器联结台式 仪(上海大华仪表厂),加入10.mol/LNE(天 津氨基酸公司产品)后再分别加入不同浓度的 Phen(Ciba—Geigy公司产品,瑞士)和Tol(上海 第十三制药厂产品),观察在单纯K—H氏液和 含40tdU/ml胰岛素K—H氏液中二种药物对血 管的收缩与舒张作用. 1.2数据处理用,一检验(美国STATEPAK 统计软件),结果用均数?差(--+5)表示. 药效动力学计算程序为《实用药理学计算程 序》,由中科院数学所计算中心张文贵提供. 2结果 2.1有无胰岛素存在时Tol对NE的作用 在高胰岛素K—H氏液中,Tol拮抗NE的 缩血管作用明显小于无胰岛素的K—H氏液(尸 <0.05);表明在离体条件下,胰岛素可以降低 Tol的作用. 2.2有无胰岛素存在时Phen对NE的作用 胰岛素存在时,各个剂量组Phen拮抗NE 缩血管作用的能力明显降低(尸<0.05). 2.3Phen和Tol拮抗NE的药效动力学 用效应动力学分析方法对有无胰岛素存在 时Phen和Tol拮抗NE缩血管作用的药物效 应进行动力学分析,所得效应动力学参数表明, 有胰岛素存在时,二药的亲和力指数pD2均小 于无胰岛素存在时的亲和力指数.由于亲和力 指数的大小与药效的强弱有相关性,亲和力指 数大则药物效应强,可见在高胰岛素环境中 Tol和Phen拮抗NE缩血管能力减弱. 心内科 空军总医院1996年第l2卷第2期 表1Phen和Tol拮抗NE药效动力学参数 尸>0.05;尸<0.05 3讨论 IR和HIS引起高血压的机制,从文献报道 大致有以下几个方面:(1)胰岛素促进肾小管钠 的重吸收;(2)兴奋交感神经系统增加心脏排血 量及收缩血管;(3)胰岛素过多直接通过类胰 岛素生长因子刺激动脉壁平滑肌细胞增生和肥 大,使小动脉管腔狭窄;(4)影响细胞膜内外离 子转运,使细胞内Na和Ca"浓度升高从而提 高小动脉平滑肌对血管加压物质的反应J. 胰岛素本身没有收缩血管的作用,但有增 加体内交感活性的功能_7].本实验在高于正常 生理浓度的胰岛素环境中,Phen和Tol拮抗 NE缩血管作用时发现,虽然胰岛素在体外本 身没有缩血管作用,但其能降低a受体阻断剂 对抗NE的缩血管效应.本试验在离体的条件 下,探讨了高胰岛素对于受体阻断剂拮抗NE 缩血管作用的影响,但在临床中是否具有相似 的作用有待进一步的研究. 参考文献 lFrankHJ,eta1.InsulinStimulatesendothelinbindingand actiononeulturedvascular—smoothmusclecells.En— docrinology1993,Sept;133(3):l092 2HallJE,eta1.Obesity—associatedhypertension,hyperin— sulinmiaandrenalmechanisms.Hypertension1992Jan;19 (1suppl1):I45 3LindL.LithellH,PollareT.Itishyperinsulinmiaorin— sulinresistancethatisrelatedtohypertensionandother metaboliccardiovascu1arriskfactors?JHypertensSuppl l993Jun;ll(4):Sll 4PrichardBN,eta1.Hypertensionandinsulinresistance.J CardiovascPharmacoll992;20Supplll:S77 5全国高血压,冠心病与糖尿病专题研讨会纪要.中华心血管 病杂志,1993;21(5):260 6PassaP.Hyperinsulinmia.insulinresistanceandessential hypertension.HormRes1992;38(1—2):33—8 7JuliusS,GudbrandssonT.Earlyassociationofsympathet— icoveractivity,hypertension,insulinresistance,andcoro— naryrisk.JCardiovascPharmacol1992;20Suppl8:840 TheInfluenceofInsulinonPhentolaminand TolasulineagainstN0rbepinephrineContractileEffects WangFeng,Min,JiXiaoliand,Caiyt With40/dU/mlinsulinKreb—Henseiletsolution,normotensive(Wis)andspontannouslv hypertensiverats(SHR)aorticringswereusedtoinvestigatenorepinephrinecontractileand phentolamin,Tolasulineantagonismnorepinephrineactions.Theexperementalresultssho wed thatWKYandSHRaorticringsconductedcontractileforcewithinsulinmorethanwithoutin — sulin(P<0.05),phentolaminandtolasulineeffectsonvasodilationantagonismnorepinep hrine thinsulinmorethanwithoutinsulin?Kineticsparamertersprovedthataffinitivedateandactiv e potancywithinsulinweremorethanwithoutinsulin. KeyWordsInsulinHypertensiOnNOrepinephrineVasodilatoragents 空军总医院1996年第12卷第2期 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达 临床实验科蔡庆朱美财陈友纯李文占志 提要本研究通过反转录PCR得到人GM—CSF基因片段后,通过重组插人pBV220载体质粒的 EcoRI,BarnHI之间,构建了重组表达质粒phGM91.借助计算机分析,优化了构建质粒的转译起始 区,采取定点诱变以消除SD序列和ATG区的强二级结构,提高了表达水平.将GM—CSF基因进行序列 测定,与文献报导完全一致,所对应的氨基酸序列与天然氨基酸序列一致.将带有表达质粒phGM91的 DH5a菌在42?诱导,表达了预期的15KD的蛋白,约占菌体总蛋白的2O,并探讨了不同菌株对表达 水平的影响.用MTT法测定所表达的GM—CSF生物活性,比活性可达到1×10IU/mg,表明所表达的 GM—CSF具有生物学作用. 主题词粒细胞巨噬细胞集落刺激因子大肠杆菌聚合酶链反应碱基序列基因表达 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(Granu— locyte—-Macrophage—-ColonyStimulatingFac—- tor,GM—CSF)是一种能刺激机体造血祖细胞 增殖并分化为粒细胞,单核一一巨噬细胞和嗜 酸性粒细胞的细胞因子.它对成熟的粒细胞, 巨噬细胞有延长其生存期,促进其吞噬功能和 释放活性物质的作用.因而GM—CSF是治疗包 括癌症放化疗,骨髓移植(BMT),AIDS等各种 原因引起的白细胞减少症,提高患者抗感染能 力的有效药物u].天然GM—CSF虽是一种糖 蛋白,但已有文献表明未经糖基化和用大 肠杆菌合成的重组GM-CSF也同样具有天然 GM—CSF所具有的诸多生物活性.本研究构建 了人GM—CSF重组表达质粒,获得人GM—CSF 在大肠杆菌中的高效表达.并对GM—CSF进行 DNA序列测定和生物学活性检测. 1材料和方法 1.1主要试剂和菌株限制性内切酶EcoR I,BamHI,ApaI和BglI及T4DNA连接 酶均购自Promega公司,PCR产物纯化试剂 盒MagicTMPCRPrepsDNAPurification System购自Promega公司,反转录PCR扩增 试剂盒GeneAmp(R)RNAPCR为Perkin ElmerCetus公司产品,T7核酸序列测定试剂 盒购自Pharmacia公司.表达质粒pBV220及 菌株EcoliJM103,HB101和DH5a系本室保 存. 1.2人GM—CSFcDNA的来源和鉴定 1.2.1人外周血单核细胞总RNA的提取 健康人抗凝外周血,用淋巴细胞分离液分离出 单个核细胞.在含2O小牛血清,10mol/L TPA和2~g/ulPHA的1640培养液中.在 37?和含5CO.的饱和湿度条件下培养2O h,收集贴壁的单核细胞.参考Chomczynski 等一的异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA. 1.2.2寡核苷酸引物的与合成:上游引物 以天然GMCSFcDNA5'端6个密码子为蓝 本,前面引入了限制性内切酶EcoRI位点和起 始密码子ATG,其序列为:5'-GGAATTCATG— GCACCAGCTCGTTCTCCA..3.下游引物中含 天然GM—CSFcDNA3'端非编码区中部分序 列,后面引入限制性内切酶BamHI位点,其 序列为:5'CTGGATCCCGATCGGGAT— CATGAGAGAGCAGCTC..3.用计算机PCR引物 分析设计软件验证,上下游引物均符合引物设 计一般原则.引物用ABI391型DNA合成仪 合成并用OPC柱纯化. 1.2.3反转录与PCR扩增:用PerkinElmer