【doc】小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤效应

【doc】小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤效应 小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤 效应 136 的理论依据. 参考文献 1AngelP,GiJbuaEBoneNIRITOW-gelleFdteddendriticceils pulsedwithacLas~1-restrictedpeotidepolentthducer~of cyt~tuxieTlyrephncyte~JExpMed./995,182(1):255 2张义国,董子明,橱洪艳,等小鼠骨髓来源树突状细胞 与NS1骨髓瘤细胞的融台瘤苗研制河南医科大学, I999.34(1):26 3SnlitaK,ShelleyH,DorisC,etalInductionof ,m?brnantigen(CEA)一specificcytotoxJcT-]','mphncve respondsin?tn】usingautologousdendriticeelIsloadedwith CEApeptideorCEARNAinpatientswithmetastatk mallgnan(iesexp~sionCEAlntJCancer,1999,82(1);l21 4Gabrilo~iehDI,lshidaT.NadafSeta1.Antibodiestt)?ular enduthelialgro~hfactorenh~eetheeNcae)ofc~cer JnmmnotherapybyimprovingendogenullsdendriticcelIfunction dinCancerRes.1999.5(10)2963 郏州大学(医学版)2002年3月第37卷第2期 5杨洪艳,张义国,董子明,等小鼠骨髓和脾来源树突状 细胞的分离与扩增培养河南医科大学,1999.34 '1):I9 6DavidB,SnutaK,Jong-HeeN,etalInductionoftumor immunit~andcytotoxicTlph0yresponsesusingdendritic cellstrat~feetedwIthnles~rRNAamplifiedfromttlmOr cells.CancerRes200060(4):l028 7Ka0},SumieTKazushigeM,etalEslablishmentand Charaeterlzationofcachexia—inducingdnon—inducingelon~of IntlrJneeo]ott26jlntJCancer,1995.61(4):522 8MitaniH,Katay~ma^,AraklH,etalAetMtyintedeukin 6inthedifferentmtionofmonocyt~st0macmphagesand dendr/ticceils.BrJHaematol,20(30,】09(2):288 9MenetrierC,Mo~tmainCG,DieuMC.etalInhibitionofthe differentiationofdendriticcellsfromCD34progenitorsby tumor(:ells:taleofinterleukin一6andmacrophagecolony- sthntdatingfactor+Blo[哪,l998,92(I2):4778 l2001—12—20收稿编辑徐春燕) 小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤效应 赵明耀黄幼田扬洪艳郑智敏陈宁汤黎明董千明 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 关键讨村突状细胞;噬细胞;I122肝细胞癌;CT26结肠腺癌;肿瘤免疫;小鼠 中图分类R392;11730.3;R7305 摘要目的:观察巨噬细胞fM)与树突杖细胞(dendrllicecil,Dcj对H22肝细胞瘤,CT26结肠腺癌小鼠协同抗 肿瘤免疫作用:腹腔荷H22(1×106)昆明鼠随机均分成:?H22组,@H22+M组 ?H22.DC组?1-122+ M牛Dc组,按组别腹腔分别注人M牛和(或)Iq22脉冲致敏Dc:腹腔茼CT26(1× 104)BALB/C小鼠以双向有序二因 素检测(9格方格表)设计,治疗鼠同时注射相应数量的M和CT26脉冲致敏DC每 鼠的M和DC呈不同组合.1 后均强化1次所注人数量同第1欢结果:H22组小鼠38c』内均死亡,死f=的中位 时问为29d;而H22十M?组 和H22十Dc组均死亡3只,死亡的中位时间分别为37d.36d;H22+十Dc组在实验 观察60d内,未出现腹水,无 一 死;荷瘤段时l1日J后,前3组小鼠静脉血粒细胞/淋巴细胞比值进行性增大,免疫 细胞数量减少.荷CT26小鼠 生存时间行免疫治疗比未免疫治疗延长,单用DC或M呈疗效一剂量依赖性,高剂 量M和Dc合用与Dc或M?单 用疔技差异无显着性.结论:?c,M牛细胞均能提高机体抗瘤能力和生存期.有明确 的量效关系;DC抗原递呈功能 明显大于M;DC,Mqc的协同扰瘤作用随不同瘤细胞株而有差异 Synacticantitumoreffectsofperitonealmacrophagesanddendriticcellsinmice ZllAOMingyao,HL':4NGYOutian.E4NGttongyan,ZHENGZhimin,CHEP~Nin,TANGLiming,DONG Ziming DepaamantofPathophysiology.BasicMedicalCollege,ZhengzhouUniversityZhengzhou450052 *耐南省重点科技攻曼基金资助项目031170209.河南省自然科学基础研究基盘资 助项月994020500 JoumalofZhengzhoullnlve~lty(Medical~fienees)Mar2002Vo]37No2137 KeywordsdendriticceHtraacrophage;H22hepatocellularc~vlnoma;CT26colonadenocateinoma;tumorimmtmit. vmice Abst~ctAim:Toob~,ethesynactlcantitumoreffec~ofperitonealumcrophagesanddendriticcellsinmiceagainstH22 hepat~'ellularcarcinomaandC髓6colonadeno~'aroinomaMethod:H22cells【】× In.)wereinoculatedintoabdominal…ib'of Kunmlngmiceandthemicewereallocatedatrandominto4gruups,thatis,groupH22,H22+M币,H22+DC,川ld1422+M+ I)CM,for/andDCepulsedbyH22cellsCT26cell(1xl旷jbeatingBALB/Cmicew盯 edesignedthroughtwofactork( 9panetable)andthemicele时 edwithdill~ventdosesofMmandDCpulsedbyC6atthesa[7]etime,M'teraweek,【he procedurewasrepeatedtoconsolidatetheeffec~Result:micein1422groupalldiedwithin38 d.andthemediantimeof death? s29dtbut3miceingroup1422+MandgroupH22+DCdied,andthemediantimeofdeathw璐 37dand36d, respectively;nomiceingroupH22+Me/+DCdiedwithin6Odandnoasci【esoccuredttheratioofbloodgnanulocyteto lymphocyteincreased~adnallyinthefirst3groupsafterperiodoft~mr-bearlngThesu~,ivalti meofCT26一bearingmicetreated byimmunetherapywaslongerthanthoseuntreatedThetreatmenteffectsotDCorM【.a]onedependedo13thedosageThere?s nosignJficamdifferencebetweenusingandDCathighdosesynaefic]y川 ldusingDcorMaloneConclusion:BothDCand Mcouldenhaneetheantitumorability'andsu~'ivaltime.andtheeffectsados~dependeat;thea ntigenpresetttingabilityofDC issignifieandystrongerthanthatotM;thesynactlc~tltumoreffectsofDCdMaredifferentacc orditrgtodifferettttum.rcell nes 树突状细胞(dendriticcell,DC)与巨噬细胞 (M)同属抗原递呈细胞(antigenpresentingcell, APC),但二者对抗原提呈功能的强弱和机制有所不 同:DC是功能最强的APC.是唯一能激活初始T淋 巴细胞(nativeTcel1)的APC;激活后的M具有很强 的吞噬功能,随后其抗原递呈能力增强,吞噬能力减 弱,DC的吞噬能力较弱,抗原递呈能力强...在 抗肿瘤免疫中M.与Dc之间是否有协同作用未见 报道.作者在本实验中重点观察它们在这方面的相 互影响. 1与方法 1.1培养基与试剂RPMI1640为美国GIBCO产 品.Hepes为USB产品,谷氨酰胺(glutamlne)为E. Me~cK产品,rrI】IL一4和rrrtGM—CSF均为R&DS,~stems 产品.抗鼠CD4,C1),B220单抗均为美国耶鲁大学 皮肤系细胞免疫室赠送.淋巴细胞分离液为 Callard—Sxhlesinger产品:H22购自河南省医学科学 研究所;CT26瘤细胞株由第二军医大学免疫学教研 室曹雪涛博士惠赠.本教研窜常规传代培养= 1.2动物与分组 1.2.1MTDC协同抗H22作用:封闭群昆明鼠购 自河南省实验动物Lf]心,20只,雄性.(22?2)g.随机 均分成4组,5只/组=?组:腹腔注射H22;?组:腹 腔注射H22+M;?组:腹腔注射H22+Dc;?组: 腹腔注射H224-M?+Dc.剂量:H22腹水加生理 盐水共200l,含H22细胞1x10;M取自同种昆 明小鼠腹腔,每只2xl,200l;Dc按本室常规方 法提取,培养并用冻融H22细胞冲击后用胰蛋白酶 消化,磷酸盐缓冲液PBS洗涤3次,每只腹腔注射 4x1,200{l,分别注人小鼠腹腔内;?,?,?组1 周后重复1次,分别注人DC,Mop.?组注入等量的 生理盐水和PBS.隔日称重并观察. 1.22MmDC协同抗CT26作用:BALB/C小鼠购 自河南省实验动物中心,9只,雄性,(20?2)g,以双 向有序二因素检测(9格方格表)设计,DC以0, 2.5x105×10数量,M以0,9xl05,1.8x1数 量注射;每鼠均腹腔注射C1"261xl.复制荷瘤动 物模型;治疗鼠同时注射相应数量的M和Dc,每 鼠的MV,和DC数量呈不同组合;1周后强化1次,所 注八数量同第1次. 1.3粒细胞/淋巴细胞计数隔周从茼H,,各组昆 明小鼠尾静脉采取微量静脉血做血涂片,ae一和 苏木精染色,光镜下数100个白细胞做分类计数. 以粒细胞/淋巴细胞比值计为结果. 1.4统计学处理实验数据用j?表示,组问方 差,检验,显着眭水准为0.05: 2结果 2.1M与DC协同抗H22瘤细胞株效应行免 疫治疗和非免疫治疗荷瘤小鼠的病死率和死亡时间 差异有显着性,H22组小鼠38d内均死亡,死亡的中 位时间29d;而H22+M(D组和H22+Dc组均死亡3 只,死亡的中位时间分别为37d,36d,免疫治疗鼠 的生存期明显太于非免疫治疗鼠;H224-M(D+DC组 在实验观察印d内,未出现腹水,无一死亡. 2.2M与Dc协同抗CT26效应见表1.由 表1可见,A—C方向,随Dc细胞数量增多,荷CT26 小鼠的生存期延长;A—G方向,随M增多,荷CT26 小鼠的生存期亦延长;E,F,H,I为不同数量DC与^ 138 表1鼠腹腔M与DC协同抗CT26效应d 表内A,I为每鼠的编号,括孤内栏目项数字为所对应的纵 横列行内所注射的细胞数.括弧内数字为小鼠自荷瘤后的死 一 时l曰 的合用,小鼠生存时间虽然比术免疫治疗延长,与单 郑州大学(医学版)2002年3月第37卷第2期 用Dc或M相比D—F,B,H方向略有延长,总体 看,细胞数量大的如,I,H,lDc和Me,合用与 C,G单用疗效无明显差别. 2.3荷1F122小鼠M,DC免疫治疗和非免疫治疗 状态下粒细胞/淋巴细胞比动态改变见表2:正 常小鼠静脉血粒细胞/淋巴细胞比值小于1,荷瘤一 段时间后,该比值进行性增大:荷瘤第28d时,? ??组荷瘤鼠比值趋向大于3,而M与Dc协同治 疗的?组,比值仍小于1(062?0.21),???组与 ?组相比P<0.05= 表2荷1422小鼠MDC免疫治疗和非免疫治疗状态下粒细胞/淋巴细胞比值动态 改变 H22组小鼠凼死亡,第21cJ,月=4:第28d,=3;*@组与?组相比P<005 3讨论 H22瘤细胞株为肝细胞组织起源,本实验在腹 腔荷H22瘤的同时给了:Dc和(或)M.,可以明确观 察到小鼠抗瘤负荷冲击能力提高.表现为粒细胞/淋 巴细胞比值无明显改变,生存期明显延长.因所用 Dc数量为每只4×10,而M【D数量为每只2×10 【DC:M:1:50),DC的抗原递呈效应明显大于M 联台使用效果更明显,这可能M与Dc对抗原的 处理和递旱不同有黄.DC在细胞毒性T淋巴细 胞(CTI】中免疫介导是依赖主要组相容胜复合体 (MHC)发挥作用;M与肿瘤靶细胞识别及结合 是以非MHC限制方式进行.此外粘附分子ICAM一1 (CD),Mac.1(CD)在这2类细胞的表达,对于其 有效地诱导免疫功能起主要的影响作用一DC 与M的合用可协同提高抗瘤效应: CT26为结肠癌腺瘤株,可分泌多种免疫抑制物 如TGF一口,IL.10,VEGF,胰岛素生长因子.1等l6J,这 些免疫抑制物不仅町抑制T淋巴细胞的增殖和功 能,而且同时也抑制Dc,M细胞的增殖和功能,使 这些APC细胞的抗原递旱效应降低或丧失,机体的 免疫监视清除功能降低.实验中,虽然接种CT26数 量很低,每只仅注1x104,远低于荷H22瘤(每只 Ix10.).但由于CT26高度恶性,高分泌免疫抑制 物,使对荷CT26鼠免疫疗效远不如对荷H22鼠. 荷CT26鼠最终均是以极度消瘦,恶液质而死亡.与 荷H22鼠有明显不同.如何拮抗这些活性物质,提 高生存率和生存质量,值得更深入研究.本实验还 观察到5×10个DC注入荷CT26鼠腹腔内,小鼠 生存期延长10d,而Mp需以1.8×10.个才达到同 样效果,2者数量比为1:36;M与Dc协同抗CT26 的救应不明显,大剂量台用未见小鼠生存时间延长, 但2者之间无相互抑制. 综E所述,DC,Mq:均能提高机体抗瘤能力和生 存期,有明确的量教关系;从抗原递呈角度看,DC, Mq:同属APC类细胞,Dc此种功能明显大于_?. Dc,的协同抗瘤作用随不同瘤细胞株而有差异, 其确切机制有待深A研究 参考文献 I董子明,张义国树突状细胞的特征与功能河南医学研 究,1999,8(1j;77 2JlH.RobitrsonWE,LewRUInterferon一7andlnterleukin一2 stimulateproduc6onofasolublefhetorbyL[210attdP815 tumortargetstop~motemaerophageactivationlnununobiol, 1996:195(I):91 3杨洪艳,张义国,董子明等肿瘤抗原脉冲致敏的树突状 细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究河南医科大学, 1999,34(1);23 4吉家祥.马宝骊苯乙酸钠降低肿瘤细胞产生免疫抑制 因子.中国肿瘤生物治疗杂志1997,4'1):54 5牛春波,谭岩.贾飞勇,等活化巨噬细胞的细胞毒作用 特性.中国免疫学杂志,2000.16(I2):649 6谢蜀生,龙振舟.肿瘤微环境与肿瘤疫苗国外医学-免 疫学分册,L90518(5);225 (2001—12-2fI收稿责任编辑镣春燕】