芦丁的提取及鉴定

芦丁的提取及鉴定 实验二 芦丁的提取及鉴定 (一)概述 芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米(为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔为葡萄糖(Glucose)与鼠李糖(Rhamnose)组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178?，无水物188~190?。溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 实验目的和要求 实验目的 ? 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ? 通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ? 了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求 ? 要拿到以下三个化合物:芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ? 能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。 试验方法 芦丁的提取与分离(见下图) 芦丁的鉴定 ? 芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验: A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ? 芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱 并初步判断其结构。 芦丁的NMR波谱解析 A. 芦丁的三甲基硅醚NMR谱的解析 B. 十乙酰化芦丁的NMR光谱解析 ? 芦丁水解后糖与苷元的鉴定 A. 水解方法:精密称取芦丁1g(?0.01g)，加1%硫酸100ml，加热40min， 放冷静置，过滤。所得沉淀用少许水洗除酸，干燥称重，计算苷元与糖的重量比。 然后用乙醇(95%大约10ml)进行重结晶，即得苷元。 B. 苷元的鉴定:用纸色谱法与对照品对照。 槐花米粗粉(20g) 置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石 灰乳(1~1.5g)，调至PH8~9，加热至微沸， 保持30min，趁热抽滤。 残渣滤液 在60~70?下用浓盐酸调至 PH4~5，精置1hr,抽滤。 沉淀(粗制芦丁)滤液 重结晶 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热 煮沸15min，趁热过滤 残渣滤液 充分静置后过滤，60~70?下干燥 芦丁(精制品) 芦丁的提取与分离流程图 (四)实验指导 1(本实验讲解要点及注意事项 ? 芦丁提取方法，重点介绍碱-酸法的原理及注意事项。 ? 定性实验的目的、意义及注意事项。 ? UV及NMR光谱在芦丁结构检识中的应用。 2(实验要求 ? 碱-酸法提取芦丁的原理 ? 定性反应的反应机理 ? 黄酮类UV和NMR的特点 ? 详细记录定性反应结果 ? 绘制色谱结果模拟图，并计算Rf值 3(思考题 ? 苷类结构的检识大体程序如何, ? 苷类水解有几种催化方法, ? 怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素3-O-上, ? 怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖基一个鼠李糖, ? 苷元的结构是怎样确定的, ? 怎样确定苷键的构型, ? 芦丁的全乙酰化物的制备与苷元乙酰化物(槲皮素)的制备有何不同,为 什么,