细胞内碱性磷酸酶的显示

细胞内碱性磷酸酶的显示 实验七 细胞内碱性磷酸酶的显示 【 目的要求 】 1、掌握显示细胞中碱性磷酸酶的方法。 2、观察碱性磷酸酶在细胞中的一般分布状况。 【 实验原理 】 磷酸酯酶可分解磷酸酯，释放出磷酸基团，在pH9.2~9.8时，磷酸基与钙盐起作用，形成磷酸钙(无色)，而磷酸钙则可与硫化氢(HS)起反应生成硫化钴(CoS)黑色沉淀。2 【 器材与试剂 】 、器材:显微镜、擦镜纸、染色缸、盖玻片、载玻片、镊子、刀片、吸水纸。1 2、材料:家兔。 3、试剂:碱性磷酸酶作用液、2%甘油磷酸钠、2%巴比妥钠、2%硝酸钙、蒸馏水、1%硝酸钙、1%硝酸钴、1%硫化铵(临用时配)、甘油明胶封固剂。 【 内容与方法 】 一、肠(或小肠)组织切片标本的制备 1、固定脱水:取3mm左右厚的兔肾或小肠组织，用纯丙酮固定24小时(固定时换丙酮两次)，也可用中性甲醛(1%)固定液。 2、包埋:将组织块从丙酮中取出，立即浸入56~60:C蜡中0.5~1小时(或减压包埋20~30分钟)，蜡块保存于冰箱中(保存时间一般不超过24小时) 3、切片:切片厚度10,m左右，于蒸馏水中脱蜡。 4、在碱性磷酸酶作用液(pH9.2~9.8)中作用2小时(碱性磷酸酶作用液用前置37:C ,, 温箱预温30分钟)。 5、1%硝酸钙(2分钟)?1%硝酸钴(2分钟)?蒸馏水洗2次(每次1分钟)?1%硫化铵(1分钟)?自来水冲洗(5~6分钟)。 6、脱水、透明、封片。 二、对照切片 操作同上述步骤，但碱性酶作用液中不加甘油磷酸钠。 三、观察 油镜下可见细胞中的碱性磷酸酶呈浅灰、灰黄、灰黑到黑色(颜色深则表示多)。对照切片无酶反应。 【 作业与思考 】 ,,