实验九 维生素C的含量测定

实验九 维生素C的含量测定 实验九 维生素C含量测定 一、实验目的和要求 1、学习并掌握定量测定维生素C的原理。 2、熟悉掌握蔬菜或水果等食物中维生素C含量的定量测定。 二、实验基本原理 维生素C是一种水溶性的维生素，广泛存在于绿色植物和各种水果中，是人类必需的维生素之一。缺乏维生素C会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。维生素C属于不饱和的多羟基化合物，具有很强的还原性，极易被氧化而遭到破坏。在酸性条件下，抗坏血酸能将氧化型的2,6-二氯酚靛酚(酸性条件下为红色)还原为还原型的2,6-二氯酚靛酚(酸性条件下为无色)，同时抗坏血酸被氧化为脱氢抗坏血酸。反应如下: 利用上述反应可以定量测定抗坏血酸。当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即被还原为无色。但当溶液中的抗坏血酸被氧化完全时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色，此时即为滴定的终点。根据滴定时消耗的2,6-二氯酚靛酚标准溶液的量，即可求出样品中抗坏血酸的含量。 三、试剂和仪器 1.试剂 (1) 1%草酸溶液、2%草酸溶液。 (2) 2,6-二氯酚靛酚溶液 将50mg2,6-二氯酚靛酚溶解于约200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中。冷却后，稀释至250ml。装入棕色瓶中于冰箱中保存。使用前按下列方法进行标定。 取5ml标准抗坏血酸溶液，加5ml 1%草酸，以上述2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至呈红色，并在15s钟内不褪色为终点。计算2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度。最后将2,6-二氯酚靛酚溶液调节至每毫升相当于抗坏血酸0.088mg。 (3) 标准抗坏血酸溶液 溶解100g纯抗坏血酸粉状结晶于1%草酸中，然后稀释到500ml。需在使用前临时配制。 2.仪器 三角瓶(500ml)、吸量管(10ml)、微量滴定管(5ml)、容量瓶(50ml)、漏斗、量筒、研钵、滤纸。 四、实验步骤 ?含抗坏血酸样液的制备。用分析天平准确称取富含抗坏血酸的干净样品约4g，放入研钵中，加入2%草酸5~10ml，研磨后放置片刻，将提取液过滤入50ml容量瓶中。如此反复2~3次，最后用2%草酸稀释到刻度，并摇匀，每次量取5~10ml放入锥形瓶中进行滴定。 ?用微量滴定管，以2,6-二氯酚靛酚溶液(蓝色)迅速滴定至提取液呈淡粉红色，并保持15~30s不褪色。消耗2,6-二氯酚靛酚溶液的体积记为V。 1 另取5ml或10ml 2%草酸溶液做空白实验，消耗2,6-二氯酚靛酚溶液的体积记为V。 2 样品提取液和空白实验各做3份，滴定结果取平均值进行计算。 五、实验结果处理 维生素C含量(mg/100g样品)= 式中 V—滴定样品提取液消耗2,6-二氯酚靛酚溶液的体积，ml; 1 V—滴定空白对照消耗2,6-二氯酚靛酚溶液的体积，ml; 2 V —样品提取液的总体积，ml; D —一次滴定所取的样品提取液的体积，ml; W —被测样品的质量，g; 0.088——1ml 2,6-二氯酚靛酚溶液相当于0.088mg维生素C。 六、说明 (1) 2,6-二氯酚靛酚不稳定，易被氧化。而且较贵，配制试剂时应一次少配，每周必须重新配制。 (2)提取的样液如果颜色太重，滴定时终点不易观察，应在滴定前用白陶土进行脱色。 (3)滴定速度要应快，一般不能超过2min，因为在本实验滴定条件下，一些非维生素C的还原性物质的还原作用较迟缓，快速滴定可以避免或减少它们的干扰。 (4)要使滴定结果准确，滴定使用的2,6-二氯酚靛酚溶液应在1~4ml，若滴定结果超出此范围，则必须增减样品用量或将提取液适当稀释。 (5)此法简单易行，但存在如下缺点。 ? 在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。后两者同样具有维生素C的生理作用，但不能将2,6-二氯酚靛酚还原脱色。 ?生物组织的提取物和生物体液中常含有其他物质。在这些物质里，有的也可以在同样实验条件下，使2,6-二氯酚靛酚还原脱色。 ?在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，影响滴定终点观察。 (6)本方法使用于果蔬中还原型维生素C含量的测定。 (7)2%草酸可抑制抗坏血酸氧化酶，1%草酸因浓度太低无此作用。若样品含有大量铁离子，可用8%草酸提取。 七、思考题 1、影响维生素C测定结果的因素有哪些, 2、指出本实验测定维生素C方法有何优缺点,