【doc】蚕蛹虫草与冬虫草化学成份的比较

【doc】蚕蛹虫草与冬虫草化学成份的比较 蚕蛹虫草与冬虫草化学成份的比较 :中同盎用萤EDTELEFqOFlcHt 蚕蛹虫草与冬虫夏草化学成份的比较 闰求恩医科大学星鲨丑何玲张甲生 吉林省蚕业科学研究腮.望皇苑贵华罗曼逸事并洛陈丹 籀要本文报道T辑蚤蝇虫革,桌叠蛹虫草和冬虫夏 草中甚掊牡脂砖,缸蛋白质,1婷毒氨基照,水解最基醢, 廿嚣醇,靶脂酸丑3'一去氧啄苷等畸台量测定结栗比较 了己醚和己辞提且特中时主要托学矗夯;提纯井鉴定T廿 露肄和3'一去袁隙苷 关键词蛹虫革冬虫夏苹哉基&寸露醇 T_—=:—一一, 蛹虫J为麦角苗科虫草.它具有滋补作用与 多种药觳,受到匈l旬外重视,但野生资源稀步,急 需人工培养.我们研究的蚕蛹虫草为吉林省蚕韭科 学研究所人工培育而戚,人工培育菌与自然苗形态 一 致,经鉴定学名为Cordycegsf?r坩(L.) Link.我们将培育时寄主为柞蚕的,称为柞蚕蛔虫 草(Antheraeapernyi);寄主为桑蚕的,称为桑蚕 蛹虫草(Bombyxmori).冬虫耍草C.sf邸(Berk) Sacc-与蛹虫草的同届,是我国特产的名贵中药材 '之一. 本研究的目柏在于探索用人工培育舶蚕蛹虫草 代替冬虫夏草的可龆性,为此对柞,桑蚕蛹虫草和 冬虫夏草的当韩化学成分进行了对比分析,以期肌 化学成分方面找到依据. 器材和药品 1.搜器Beckman121MB型和日立835—50 型氨基酸自动分析议;FinnganMAT4510型气 棚一质谱联用仪'SE4石英毛细管柱,NOVA4 计算机检索数据系统;WATERS高效液相色谱 仪,840型数据处理机,B10一RAD1706型紫外检 测器lWB—IW型原子荧光计l"l型高坡极诺仪l ZdssI型火焰光度计;东德产渊微光度计,美国 产22道高频耦合等离子光度计j显微熔点测定器. 2-药材诈,桑蚕蛹虫草由吉林省叠业科学研 究所培育,菌种经沈阳农业大学自叠镗教授鉴定为 蛹虫草苗}冬虫夏草购自长春市中药材批发站,经 赢北师范太学李茹光教授鉴定为正品. 5.标堆品3'一去氧腺苷为美国产品,屎墙啶 为l山西省压药研究所橱宏度同志惠赠,屎昔为上海 试剂=厂出品,腺嘌呤为生物化学研究所产品,腺 营为英国出品. 4.试锕各种有机溶劫,,显色劫和其他化学药 品为分析纯或化学纯,高效液用乙腈为一较色谱纯, 水为四馏水 实验方法与结果 1.碗试验将柞蚕蛹虫草,桑蚕蛹虫草和冬虫 夏草三种样品分别配成水,%乙醇和乙醚9种.. 蒲.按文献所列方法进行了约4O硪定性检查实验 绪果生物硷氨基酸,多肽或蛋白质,糖类,甾体 挥发油和油脂等几类化告物,各有三项以上检查实 验呈船性反应,而且三种样品的实验结果基率一致, 明它们均含雨这些类别的化学成分. 2.兰大营养素的含量测定 三种样品分另加盐酸水解,再用NaOH中和, 甩乙醇沉淀蛋自质后,溶液用裴林试触滴定袂I 定总含糖量,结果见表1. 表i各样品中三太营养素的含量 从表中可知,柞,桑蚕蛹虫草的总古糖量远低于冬 虫夏草. 将样品置索氏提取器中,加乙醚提取,回收乙 称量得粗脂肪量,结果列入上表.柞蚕 醚后,精确 蛹虫草中粗脂肪量为冬虫夏草的兰分之一}桑蚕蛹 虫草舶粗脂肪量亦较冬虫夏草为低. 粗蛋白?含量是根据微量凯氏定氨法测得的总 含氨量推算而得,结果觅表l两种蚕螭虫草曲楹 蛋白质含量相差不多,但均超过冬虫夏草的量一倍 以上. 5.I【基麓分析精确称取样品.2.5g左右,甩 蒸馏水多次提取至茚三酮试荆检壹为阴性.提取掖 减压浓缩后,加无水乙醇,离心除蛋白质.溶液再 浓缩,定客,取一定量加等体积lO磺基水杨酸, 再离心,上清渡加缓冲溶液稀释后,上氨基酸分析 仪自动测试,赫离氨基酸含量见表2柞蚕螭虫草 与冬虫夏萃的游离氨基酸含量比较接近,大约为桑 蚕螭虫草柏漓量韵=分之一. 称敢样箭韧耪喜lO0.Omg,分别置水解营中, 加Hcl,11?下水解2l小时J开管并定害至100.oml. 霉3岳第?时中每'Et兰FrOFcHfA35 取2?00ml在60?下减压蒹干,甩重蒸馏水洗后并燕 千,加稀释掖2.00ml,用氨基酸自动分析仪分析, 结果列入表2中.兰种样品所含水解氨基酿总量近 高于冬虫夏草,其中天冬氨酸,谷氨酸,亮氨酸, 精氨酸和脯氨酸的古量都很高,而胱氮酸和色氨酿 含量都很低.在柞蚕师虫草,桑蚕蛹虫草和冬虫夏 草中,9种必需氨基酸的古量分剐为d1%,41和 42,数量相近. 4.甘?尊的分折(1)甘露醇的分离与鉴定 将柞桑蚕蛹虫草和冬虫夏草三种样品的95乙醇 提取掖浓晡,析出的黄色固体溶于乙醇,活性炭脱色,乙醇重结晶,均得白色针状晶体.针晶均易辫 于水,略溶于乙醇,不溶于乙醚和氧仿.它们的饱 遗 射 盅 谴数 匿1甘露醇的红外光谱图 和溶液对强碱和三氯忧铁的作用雌及碱性硝酸银的 反应均和甘露醇标准品的一致.'显微熔点仪测熔 点,三种样品的针品均与甘露醇标准品的熔点 (166,167?)相同.而且它们的红外光潜也与甘 露醇的完全一样,见图i. 将三样品所得的针晶溶于乙醇,进行硅胶G薄 层分析和纸层析.展开荆;丙酮一水(9:1); 正丁醇一醋酸一永(4:1:6);1醇一乙醇一 永(4:1:5);乙酸乙酯一毗睫一永(7:2 :1):正r酵一乙酸乙哺一东(7:2:1)等 显色;1KMnO}Na10.联苯胺混合救.所 有针晶的层析结果,均与1J1错酵标准品的一致. 取柞,桑蚕蛹虫革针晶和甘露醇标准品,分剐 加乙酰氯制备D一甘露醇的^乙酸酯衍生物,乙醚 重结晶后,均得鳞片状结晶,熔点都是122~124? 与文献记载相同. 综上实验结果衰明,柞,集蚕蛹虫草和冬虫夏 草一样,均含有D一甘露醇. (2)露醇的古量测定:精确称取柞,桑蚕 蛹虫草和冬虫夏草粉各1匹,分别置索氏提取器中, ,q~95乙醇提取至无色,浓缩提取赦,过滤并定 容.吸取滤液5.00m!,按中国药典所载的方法测 定,结果柞,桑蚕蛹虫草和冬虫夏草中甘露醇古量 分别为5.704.71%和6.49.蚕蜘虫草中甘露 醇量略低于冬虫夏草. 中圈童带菌,-EDIBL~-HJ~G'I:=OF幻对rN氯-l_v0靠i3,_ND^ 2 A柞蚕蛹虫草 C冬虫夏草 晦:1?蒜略跪2?碌管3?辟礤砖4?臁肯 5?3'一去氧腺苷 圆2三种样品的高效液相色谱图 5.z醴提取铂的成分分新分别置柞,桑蚕蛹 虫草和冬虫夏革于肃氏提取器中,用乙醚提取,提 取液室温放置挥去乙醚后,用所得的浓稠波上气相 笆谱柱分离,拍各组分的质谱凰,经计算机检索, 结果柞,桑蚕蛹虫草和冬虫夏草中各有76和8 种亿台物,其栅对台量在10以上,而相对古量的 和占0T%以上的化台物见表3. 柞蚕蛹虫草中斯脂酸和软脂酸乙酯与磐虫夏革 的成分相同.桑蚕蛹虫草的主要成分亚油酸和软脂 艘也是冬虫夏草的重要成分. 6.有机碱和壤苷冀化台物的分折取柞,桑蚕 蛹虫草和冬虫夏草磐5000《,先后用乙醚和95己 醇提取,乙醇提取液浓缩后,过滤并离心,用澄清 B桑蚕蛹虫草 离心渡上高教液相柱.各样品溶液的色谱国如图2 所示. 采用保留时问对比法确定了样品中5种化台物 的色谱蜂,各化台物的保留时问见表4. 表3蚕蛹虫草与冬虫夏草乙醚提取物中主要化学成分 表^备已知化台物的保留时问 3',击氧腺昔采用标准曲线法定量,其回 归方程式为jm=一0.0184十4?782×l0_.A,m为 3'一去乳腺昔的质量IA表示峰面积,相关系敛为 0,g05.根据计算柞桑蚕丽虫草中3'一去氧腺苷 含嚣分别较冬虫夏草高大约6倍和3倍.其余几种 已档化台_枷柏定量,都是采用直接比较法进行的, 在离心澄清液中,柞桑蚕蛐虫草的这些化合物古 量相当接近,其中尿嘧啶,腺曝峰和腺昔含量都较 冬虫夏草高,只尿苷较低. 7.无机元jI}测定同时测定丁柞,桑蚕蛔虫草 ^革4期中鲴噎f嗍?l阻lBFUH匹rPc}件黜3 衷中一衰示未控出 和冬虫夏草中30种无机元素的含量.砷汞采用荧光 法,硒采用高波扳谱法,Na,K采用火焰光度法, 镓铬采用发射光谱法.其他元素则是采用ICP法测定的.结果见袁5. 从上表可知,样品中均含24种以上相同的无机 元素,人体必需微量元素Fe,Zn,Mn,Cu,Sr,V, Cr,Ni,Co,S,Sn,含量和}虫草>柞蚕蛹虫草>桑 蚕蛹虫草.柞,桑蚕蛹虫草和冬虫夏草的Se含量, 比富硒抗癌中药黄芪的含量0.~8ppm高数倍.值得 指出的是只在蚕蛹虫草中检捌出Mo和Be,而仅在 冬虫夏草中检测出痕量元素La,Ga和Sn,且L8含 量较高. 8.蚕蛹虫草培葬基中3'.去氧臃苷的分离与鉴定 将培养基的乙醇提取液,通过离子交换树脂, 从浓缩洗脱液中得白色晶体.用显微熔点测定器测 得熔点为225~227?(未校正)与文献报道3'一去 氧腺苷的熔点相同.以水为展开剂,所得结晶的纸 层析Rf值与3'一去氧腺苷标准品的完全一致.桉磁 共振'H谱(CDsDD),8l8.40(S,1H,2,H), 2.19<S,1H,8--I-I),5.85(d,1H,N1'一H), 4.66(m,1H,4'一H),4.52(m,1H.2'一H),388 <d,1H,一H),388(d,1H,5'一H),3.71(d, 1H,5'一H),2.32(m,1H3'一H),2.09(m,1H, 8'一H)质谱m/z:251(M),234(M+一CHN), 82l(M—CH20).178(M一73),164<B+30),135 (100),108,8l,59,54,45,d3.3l.221,178 和164为3'一去氧腺苷的特征峰.高效液相磐法 中3'一去氧腺苷的保留时间与所提针晶的件甜问 一 致根据以上实验结果认为,从培养基中提樽的 晶体为3'一去氧腺苷(虫草索). ,桑蚕蛹虫草和冬虫夏草的化学成分 总之.柞 对比研究表明,它们所含化台物的种类大体相同, 各类化台物的台量虽不完全一样,但有的数值相当 接近,这就为蚕蛹虫草代替冬虫夏草从化学成分方 面提供了参为考. (参考文献略) 郑重声明 近一年多来,由于腐败之风的严重干扰 和领导不力,使本刊编辑部困难重重,难于 正常工作,刊物差错频繁,质量下降,严重 误期,(1994年1—3期误期)致使广大读 者,作者不能按时收到刊物,其责任不在邮 局,而在于本单位本部门,为此,本刊编辑 部向广大读者,作者和发行工作者表示深刻 的反省和歉意I "沉舟侧畔千帆过,病树前头万术春". 我们正在致力于排除干扰,力争从今年第四 期正点出刊,敬请上级主管部门和国内外同 仁在道义上给予支持,帮助我们渡过难关, 再创辉煌I《中国食用茸》编辑部