绿豆甘草汤降低乌头毒性的试验研究

绿豆甘草汤降低乌头毒性的试验研究 安徽科技学院 食品药品学院 本科#毕业# 绿豆甘草汤降低乌头毒性的试验研究 食品药品学院，中药学专业:孙扬美，学号:2006274117 指导老师:时维静 摘要: 目的:绿豆甘草汤降低乌头毒性的试验研究。:比较不同浓度绿豆甘草汤组 -1-1-1,1g?mL、2g?mL、 3 g?mL,、生理盐水组、阿托品和利多卡因合剂组对小鼠的中毒 时间、死亡时间的影响。绿豆甘草汤对中毒小鼠的救治～小鼠恢复情况。结果:绿豆甘 草汤各剂量组能延长小鼠的中毒时间～死亡时间～与中毒对照组差异有统计学意义 ,P<0.05,,与阿托品和利多卡因合剂组相比差异无统计学意义。结论:绿豆甘草汤对轻 度中毒有明显的解毒作用。 关键词:绿豆甘草汤～乌头中毒～阿托品 引言 绿豆又叫青小豆，古名菉豆、植豆。性味甘凉，有清热解毒之功。绿豆含丰富胰蛋白酶抑制剂，可以保护肝脏，减少蛋白分解，减少氮质血症，因而保护肾脏。本品，为附子、巴豆、砒霜等辛热毒烈之剂中毒及食物中毒等的解毒良药。可用生品研末加冷开水滤汁顿服，或浓煎频服，或配伍黄连、葛根、甘草同用，如绿豆饮(《证治准绳》)。 乌头为散寒止痛要药，既可祛经络之寒，又可散脏腑之寒。乌头碱中毒对心脏的损害主要是通过兴奋迷走神经和对心肌的直接毒害所致。乌头碱对中枢神经有强烈兴奋作用。直接作用于心肌，先兴奋，后抑制，用量过大可导致心肌麻痹而死亡。用之宜[1-4]慎。 中药乌头在临床中运用非常普遍，但是其含有剧毒，故此次试验初步探讨的是常用剂量的绿豆甘草汤对乌头毒性降解的效果，并其作用时间，作用强度。为今后更深的研究打下基础。 1 材料与方法 1.1材料 绿豆Vigna radiate(L.)R.Wilczak 豆科菜豆属绿豆种子，甘草Glycyrrhiza ura lensis fisch. 豆科甘草根茎，草乌A.Kusnezoffii Reichb.毛茛科植物北乌头的块根(亳州药材市场购买)。硫酸阿托品注射液，河南华利药业有限公司(产品批号:061207)。盐酸利多卡因注射液，北京托毕西药业有限公司 (产品批号:071119)。氨水，乙醚等试剂均为纯。 动物:健康昆明纯种小鼠(由本校动科院试验动物中心提供),体重23.0?2.0(g)100只，雌雄兼用。 1 安徽科技学院 食品药品学院 本科毕业论文 1.2方法 1.2.1 绿豆甘草汤的制备方法 ，生甘草10g，放入250mL的烧把甘草洗净润透，切片;绿豆洗净，去杂质。绿豆20g 杯中，加水150mL，保持微沸30分钟，用脱脂棉过滤，取滤液。滤渣加水150mL，继续加热，微沸30分钟，用脱脂棉过滤，取滤液。合并两次滤液，浓缩至30mL，其含药量为1g -1-1生药?mL。用相同的方法，制备浓缩液15mL、10mL，其含药量分别为2g生药?mL、 -13g生药?mL。 1.2.2 乌头总生物碱的提取 称取生草乌20g于带塞锥形瓶中，加40mL10,氨水,再加300mL乙醚，振荡5min，冷浸6h，取乙醚层，沉淀物用乙醚洗2次，合并乙醚层，蒸干。得率为0.9%。 1.2.3 小鼠中毒模型的制作 准确称取草乌总生物碱45.0mg，加入到10mL5%的乙醇溶液，充分溶解，摇匀，贴上标签备用。随机取16只体重23.0?2.0(g)小鼠，均分为4组。给药草乌生物总碱剂量 -10.1mL?10g体重 。 第1组:灌胃给药草乌生物总碱，观察中毒反映。 -1 第2组:灌胃给药草乌生物总碱同时腹腔注射阿托品与利多卡因合剂0.1mL?10g体重。 准确称取草乌总生物碱45.0mg，加入到20mL5%的乙醇溶液，充分溶解，摇匀，贴上标签备用。做第3，第4组试验。 第3组:灌胃给药草乌生物总碱，观察中毒反映。 -1第4组:灌胃给药草乌生物总碱同时腹腔注射阿托品与利多卡因合剂0.1mL?10g体重。观察中毒反映。 表1 小鼠的中毒现象 Table1 toxicity in mice 组别 现象 第1组 后腿软弱无力，呼吸困难，大量流涎，剧烈挣扎，间或跳跃，呼吸重度困难，迅速死亡。眼球暴突， 成黑色。 第2组 后腿无力，呼吸稍促，流涎，随后安详，活动停止，不久死亡。眼球暴突黑色。 第3组 后腿麻痹瘫痪，呼吸急促，流涎，呼吸稍加重，一段时间，小鼠活动自如。 第4组 小鼠无中毒症状。 乌头碱属于剧毒物质，解救小鼠时必须及时迅速且用药量要大。小鼠无法静脉给药，制作中毒小鼠模型的时候剂量要合适，否则会出现小鼠全部死亡的现象。由第1组和第2组的试验现象可知，即使使用化学特效药也不能救治小鼠，故此时的小鼠模型，可以做重症中毒小鼠。由第3组现象得知，小鼠出现中毒情况但没有死亡，而第4组更是没有中毒的任 [5-8]何迹象，故此剂量时的小鼠模型，为轻度中毒小鼠。 2 安徽科技学院 食品药品学院 本科毕业论文 1.2.4重症中毒小鼠解救试验 选取体重为23.0?2.0(g)的小鼠25只，制作成重症中毒模型，分5个小组,每组5只。 -1化药组:腹腔注射阿托品与利多卡因合剂0.1mL?10g体重。 -1 生理盐水组:灌胃给药生理盐水0.1mL?10g体重。 -1-1-1中药组:分3组，分别灌胃给药绿豆甘草汤1g生药?mL、2g生药?mL、3g生药?mLL， -10.1mL?10g体重。 1.2.5轻症中毒小鼠解救试验 选取23.0?2.0(g)体重的小鼠35只，制作成轻症中毒模型分5个小组，每组7只。 -1化药组:腹腔注射阿托品与利多卡因合剂0.1mL?10g体重。 -1生理盐水组:灌胃给药生理盐水0.1mL?10g体重。 -1-1-1中药组:分3组，分别灌胃给药绿豆甘草汤1g生药?mL、2g生药?mL、3g生药?mLL， -10.1mL?10g体重。 2. 结果与分析 2.1重症中毒小鼠解救结果 表2 化药组重症中毒小鼠解救结果 Table 2 groups of drug intoxication in mice results 组别 小鼠 小鼠中毒时间(min) 小鼠死亡时间(min) 1 6 9 2 无 63 化药组(阿托品与利多 卡因的合剂) 3 无 7 4 8 10 5 8 12 表3 生理盐水组重症中毒小鼠解救结果 Table 3 Results saline group mice with severe poisoningation in mice results 组别 小鼠 小鼠中毒时间(min) 亡时间(min) 1 5 6 2 4 60 生理盐水组 3 4 27 4 2 5 5 1 34 使用统计软件spss 13.0处理数据P<0.05, 表2化药组与表3生理盐水组差异有统计学意义。化药组小鼠的中毒时间与死亡时间明显比生理盐水组时间长，但由于小鼠中毒剂量过大，化药组与生理盐水组的小鼠全部死亡。 3 安徽科技学院 食品药品学院 本科毕业论文 表4 中药各剂量组重症中毒小鼠解救结果 Table 4 dose of medicine the result of severe intoxication in mice 组别 小鼠 小鼠中毒时间(min) 小鼠死亡时间(min) 1 5 17 中药1组(绿豆甘草汤2 5 7 -11 g?mL) 3 4 7 4 4 8 5 5 33 1 4 9 2 6 9 中药2组(绿豆甘草汤3 4 10 -12 g?mL) 4 3 12 5 5 8 1 6 81 2 5 14 中药3组(绿豆甘草汤3 4 9 -13 g?mL) 4 5 11 5 7 24 软件spss 13.0处理数据,P<0.05, 表4各剂量组与表3中毒对照组差异有统计学意义。 [9-11]绿豆甘草汤可以延长小鼠的死亡时间。绿豆甘草汤具有缓解毒性的作用。 2.2轻症中毒小鼠解救结果 表5化药组轻症中毒小鼠解救结果 Table V groups of drug poisoning in mice results in mild 组别 小鼠 小鼠中毒时间(min) 小鼠死亡时间(min) 1 无 无 2 无 无 3 无 无 化药组(阿托品与利多4 无 无 卡因的合剂组) 5 无 无 6 无 无 7 无 无 引起的轻微中毒症状小鼠有明显的缓解作用，而且随着剂量的加大缓解效果越加明显。 3讨论 4 安徽科技学院 食品药品学院 本科毕业论文 乌头碱为一种植物毒素，具有温中散寒、回阳救逆、祛风除湿等功效。乌头是常用中药，但其治疗量与中毒量接近，故容易造成中毒事件，甚至危及生命。其毒理作用主要是:?兴奋迷走神经，表现为出汗、流涎、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、心动过缓、血压下降、瞳孔缩小、大小便失禁及肺水肿等;?对周围神经的损害，临床表现为口、舌及全身麻木、紧束感，痛温觉减腿或过敏，严重者运动失灵;?通过兴奋迷走神经降低窦房结自律性异位起搏点的自律性升高而引起各种心律失常; 头的时候，立即喝一碗热浓的绿豆甘草汤。绿豆甘草汤对轻度中毒可明显缓解呼吸麻痹，缩短流涎时间，解除后腿无力的症状。阿托品作为解毒特效药有其无可争辩的优势， [14]但阿托品本身的副作用对机体的损害也大。可以在用化药治疗的同时喝些绿豆甘草汤。 4 结论 绿豆甘草汤对重症中毒小鼠解救的效果不明显，仅有缓解作用。而对轻度中毒小鼠有很好的解救效果。 致谢 :本次试验得到了时维静老师的悉心指导，俞浩老师的倾心帮助以及药学实验室老师同学们的支持，特此感谢。 参考文献 [1] 吕圭源.药理学[M].中国中医药出版社，2008，65-67 [2] 龚千锋.中药炮制学[M].中国中医药出版社，2008，312-13 [3] 黄兆胜.中药学[M].人民卫生出版社，2007,120 [4] 杨宝峰.药理学[M].人民卫生出版社，2005，125-127 [5] 刘瑶，彭成.草乌煎煮时间、给药剂量与毒性的相关性研究[J].成都中医药大学学报，2008，23(4):34-36 [6] 吴修红，孙晖，王喜军.草乌毒性及解毒方法研究进展[J].中医药学报,2009，53(4):67-70 [7] 邱启雄.乌头药材的炮制研究进展[J].海峡药学,2009, 21(12):45-46 [8] 李志勇，李彦文，孙建宁，等.乌头类植物药三种双酯型生物碱研究进展[J].中央民族大学学报(自然科学版)，2009,77(3):453-456 [9] 吴先福，王盛库.绿豆甘草汤治疗猪有机磷中毒[J].养殖技术顾问，2004，32(5):45-48 [10] 雷怀成，宋道江，易建华，等.大鼠乌头碱中毒心肌细胞凋亡的研究[J].中国工业医学杂志，2004，4(6):11-12 [11] 高文韬，王壮，王新波，等.乌头的研究进展[J]. 北华大学学报(自然科学版)，2009，34(2):75-76 [12] Feng Gao.Dong-Lin Chen.and Feng-Peng Wang. 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