【doc】喹赛多对仔猪产肠毒素大肠杆菌感染的预防效果

【doc】喹赛多对仔猪产肠毒素大肠杆菌感染的预防效果 喹赛多对仔猪产肠毒素大肠杆菌感染的预 防效果 中国兽医2005年11月第25卷第6ChinJVetSciNov.2005Vo[.25No.6643 喹赛多对仔猪产肠毒素大肠杆菌感染的预防效果 丁明星,袁宗辉,王玉莲,朱惠玲,范盛先(ep中农业大学兽药研究所,农业部食品安全评价重点开放实验室, 农业部兽药残留检测基准实验室,湖北武汉430070) 摘要:150只去势长大仔猪随机分为6组,I和?组饲喂不舍抗茵药的基础日粮,l和V组基础日粮中添加喹乙醇100 mg/kg,?和?组基础日粮中添加喹赛多100mg/kg.?,V和?组仔猪灌服10CFU产肠毒索性大肠杆茵(0l3g: K),I,?和?组仅灌服肉汤.结果表明,喹赛多饲喂猪直肠粪便中大肠杆茵总数和接种的血清型大肠杆茵数与喹乙 醇饲喂猪均无显着差异(P>O.05),喹赛多和喹乙醇饲喂猪直肠粪便中接种的血清型大肠杆茵数均低于非药物饲喂 猪(P<0.05).?组仔猪感染率为68;V和?组感染率均为l6.药物饲喂猪平均日增重显着改善(P<0.05),喹赛 多饲喂猪平均日增重高于喹乙醇饲喂猪(P<0.05).?组仔猪平均日增重和饲料转化率分别下降9.6和8.4,? 组仔猪日增重和饲料转化率分别提高l19和7.9,均高于V组(4.2和1.5%).可见喹赛多不仅对断奶仔猪产肠 毒素大肠杆茵感染有显着预防作用,而且还有较好的促进生长和提高饲料转化率作用. 关键词:喹赛多;产毒素性大肠杆茵;预防;生长性能;猪 中图分类号:$855.12;$854.5文献标识码:A文章编号:1005—4545(2005)06—0643—03 喹乙醇等喹喔啉药物能促进仔猪生长和提高饲料效率, 同时对仔猪大肠杆菌等感染有预防作用,能降低断奶仔猪腹 泻和死亡率_l.].喹赛多属于喹喔啉药物.研究表明,喹赛多比 喹乙醇毒性低,对猪促生长作用效果好E4];在体外对大肠杆菌 等多种细菌有较强的抑制作用_5J.但喹赛多在体内对猪大肠 杆菌是否有作用迄今国内外尚未见报道.本试验研究喹赛多 对仔猪产肠毒索性大肠杆菌感染的预防效果,为其临床应用 提供理论依据. 1材料与方法 1.1药物喹赛多,华中农业大学兽药研究所合成,含量 99,批号021008;喹乙醇,湖北中牧安达药业有限公司生 产,含量98,批号为0209002. 1.2供试菌株猪大肠埃希氏菌,血清型():K,LT, STb,中国兽医药物监察所购买;抗()血清,中国兽医药物监 察所购买. '1.3动物及分组35日龄断奶健康长大去势公猪,体质量 (10.3士1.6)kg,从湖北省品种改良站猪场购入.试验仔猪未 曾发生腹泻,也未进行大肠杆菌菌苗免疫.对其同窝仔猪采用 供试大肠杆菌体外小肠上皮纹状缘粘附试验调查表明,该猪 群对大肠杆菌()m:K存在敏感性].购回仔猪直肠粪便中 未分离出试验接种的血清型大肠杆菌.猪舍温度控制在18, 2O(:. 150只仔猪随机分为6组,每组25头.经过7d适应期, I和?组饲喂不含抗菌药的基础日粮(NRC,1998),I和v 组基础日粮中添加喹乙醇100mg/kg,?和?组基础日粮中 添加喹赛多100mg/kg.于药物饲喂7d,?,V,?组每头仔 猪灌服5OmI大肠杆菌肉汤(10,oCFU,加有1.2碳酸氢 钠),I,?和?组每头仔猪仅灌服碱性肉汤.接种仔猪与非接 种仔锗分隔饲养. 收稿日期:2004—12-03 基金项目:国家自然科学基金资助项目(39870596);教育部骨干 教师培养计訇j资助项目(2000年) 作者简介:丁明星(1961一).男.副教授,博士. *通讯作者 1.4临床观察每天仔细观察和记录试验猪的采食量,腹泻 等情况.分别于接种后0,7,14和21d早饲前空腹称重,计算 各组的平均日增重和饲料转化率.对死亡仔猪及时剖检,刮取 空,回肠粘膜接种于血液琼脂平皿,并作病原菌的分离和鉴 定. 1.5细菌学检查于细菌接种后每隔日,无菌取直肠粪样1 g,用PBS作5个连续1O倍稀释(根据预试验确定稀释浓 度),分别取lOL倾注于鲜血琼脂平皿和麦康凯琼脂平皿, 37C培养24h.挑选血液琼脂平皿上的溶血菌落,用抗0...血 清作平板凝集反应鉴定是否为接种的血清型大肠杆菌;根据 麦康凯琼脂平皿上的菌落形态,计数大肠杆菌总数.最后.分 别计算出每克直肠粪便中接种的血清型大肠杆菌数和大肠杆 菌总数的对数值. 试验仔猪若出现明显腹泻,且在接种后4,7d的直肠粪 便中能检出接种的血清型大肠杆菌数超过10.CFU/g.则认 为被感染. 1.6数据采用SAS(1999)软件进行统计分析. 2结果 2.1临床症状仔猪在接种大肠杆菌2,3d后出现腹泻. ?组仔猪腹泻粪便主要为灰色,灰黄色,黄色稀糊状或水样, 个别腹泻严重的仔猪出现精神不振.食欲下降.甚至血样粪 便.1头猪因腹泻严重站立不起,死亡.V和?组部分仔猪出 现腹泻,但食欲和精神未见异常.I,I和I组仅偶见腹泻,粪 便混有未消化饲料. 2.2剖检变化死亡仔猪外观消瘦.眼眶下陷,胃底区粘膜 充血,小肠扩张,血管充血,肠内充满稀水样物,肠系膜血 管充血,淋巴结肿胀. 2.3病原分离取死亡仔猪肠粘膜.检出接种的血清型大肠 杆菌.l\『组多数腹泻仔猪在接种后4,7d直肠粪样中均能检 出大量溶血菌落,用抗o血清鉴定为接种的血清型菌.v和 ?组部分腹泻仔猪在接种后4,7d粪样中能检出接种的血 清型大肠杆菌.I,I和I组腹泻猪直肠粪检,未发现接种的 血清型大肠杆菌. 2.4直肠粪便中大肠杆菌数直肠粪便中大肠杆菌总数见 644中国兽医2005年11月第25卷第6期Chi.d.VetSciNov?2005Vo1.!:! 图1a.未接种猪直肠粪便中大肠杆菌总数较为恒定,?组大 肠杆菌总数在接种后迅速增加,5d时达到高峰,9d时接近 未接种猪水平(,)>(1.05);?组大肠杆菌总数与V组接近(尸 一 = 辍 翘 龌 >0.05),但2组大肠杆菌总数在接种后3,7d均低于1V组 (P<0.O1). 一 : 辍 掘 龌 楚 窨 靠 图1大肠杆菌数a.直肠粪便中犬肠}r汹敛:I组与?,m组直肠粪恒中大肠杆菌总数均差异不显着',】>O.05);?组大肠杆菌总数在1 ,7d高吁l组(1'({.<《).01;7d.,,<u.05);V组大肠杆菌总数与,JI缉差异不显着(,)>0.05),但2组在3,7d均低于?组(P< 0.05);*袁示,组久肠}r菌总数l组差异显着(,)<O.()5);**Iv组大肠杆菌总数与1组差异极显着(P<O.01)b直肠粪便中接 种的血清型大肠杆菌(土s):,组卣肠凑便中接种的血清型大肠忏菌数在3,7d高于?组(3d和7dtP<0.05;5dt,)<0-01)t而在5 d高于v组(P=0.03);V组与?组直肠粪便中接种的血清型大肠杆菌数差异不砬着(,)>0.05);?组接种的血清型大肠杆菌数与V 组和?组差异显着(P<O.05);**n组接种的血清型犬肠杆菌数与组和u组差异极显着(P-<~O.叭)为I组t口为I1组t口为? 组.?为?组,?为V组,?为?组 ?,V和?组直肠粪便中接种的血泊型大肠杆菌数变化 类型相似于大肠杆菌总数(图lb).A组接种的血清型大肠杆 菌数在3,7d大于?组,而在5d时大于\组(P<O.05).喹 乙醇饲喂猪与喹赛多饲喂猪直肠粪便中拔种的血清型菌效无 显着差异(P>0.O5) 2.5感染率Jv组感染率为C,8.\和lI组感染率均为 16,V和?组感染率均低于n组(,\t,.【】1);n组1头仔堵 死亡,其他各组均尤死亡.r见表j 2.6生长性能?组仔猪平均日增重(J\IJ()和饲料转化率 (FCR)分别提高2O%和l6.?组仔猪AI)G和FCR分剩下 降9.6%和8.4.?组仔堵AI)(和FCR分别提高l1.9 和7.9.m组仔猪ADG和FCR分别比?组提高10.5和 7.7%;V1组仔猪AI)G和FCR分别高于,组7.5和5.5 (图2.3).统计分析表明.试验期间夫肠fF菌接种与药物对 lj班I= 磐 Z 露 刖 ADG存在交互作用(P<0.05);大肠杆菌接种在0,l4d降 低AIX;(P<0.05);药饲猪ADG和FCR显着提高(P< 【1.05);喹赛多饲喂猪ADG高于喹乙醇饲喂猪(P<O.05). 表l喹赛多对断奶仔猪大肠杆菌感染率的影响 注:※每克直肠粪便中接种的大肠杆菌数大于10CFU的仔猪 数;表示?组感染率高于V和u组(,)<0.01) 25 2.0 磷 I.5 歪'.0 I)5 0 组别 图2平均日增重'十SE)"【左).锄料转化事L十SE),右)m夫肠ff菌接种一药物互作f{】(,<0-{)jJ;IJl久始}l:菌接种效应(P<0.05); c.药物效应(P<O.05);d.喹赛多阔喂猪平均日增重商于喹乙醇饲喂猪(,)<cJ.05) ^===且? ==j 卜[=========Un ^===========], 一 中国兽医2005年l1月第25卷第6期Chin,VetSciNov.2005Vo1.25No?6645 3讨论 大肠杆菌感染模型复制Ijlc功与荐是进行药效评价的关 键.新生仔猪灌服产肠毒素胜大肠杆菌.较容易诱发腹泻.因 而,一些研究人员多采用新生仔猪大畅打菌感洳模型进行药 效评价.对于断奶仔猪.曾振灵等"按每干克体质量静脉注射 致病性大肠杆菌诱发猪大扦荫病.此法与按每头猪接种固 定量的细菌诱发疾病相比,更能悍持-一批试验猪发病的一致, 且个体差异较小,有利于进药效观察.然而.静脉注射大肠 杆菌虽可使断仔猪发病.但不能建立大肠抒菌肠道感染模型. Sarmiento等将10CFU产肠毒紊大肠轩菌(0?:K88ac :H,)加入胰蛋白酶分解的碱性大豆溶液中.然后通过胃导 管灌人21日龄断奶仔猪胃内.建立J太肠杆菌肠道感染模 型.本试验给49日龄(包括适直期7d和接种前7d)仔猪灌 服10CFU大肠杆菌(0:K).也成功地超制出该模型. 随着仔猪日龄的增长.产毒,肠杆甚染模型的建立就越 困难.本试验在仔猪产肠毒素性大订菌接种时,对猪遗传抗 性,免疫状态,胃内pH等有关因素进行了控制. 产肠毒素大肠杆菌感染断奶仔猪的主要症状是腹泻.由 于其他非感染因素也可弓l起仔猪腹泻,大肠轩菌感染是否成 功还需要结合接种的血清型菌检出确定Bertschinger等f认 为猪粪便中至少连续2d排出接种菌超过10CFU/g,则可认 为感染成功.粪便排菌数至少受到2种因素影响:(1)粪便排 出的细菌可能是那些没有粘附于小肠却在大肠大量繁殖的细 菌;(2)结肠对水分的吸收可使进人大肠的细菌浓缩.粪排菌 数量的增加.尽管喹乙醇和喹赛多在体外显示抗菌活性],其 在体内的抗菌作用还不清楚.喹乙醇用作断奶仔猪的饲料添 加剂能使常规饲养下的仔猪腹泻率和死亡率降低,肠炎症状 减轻,同时十二指肠和空肠:fl溶血性大肠杆菌粒目减少?.由 于断奶仔猪腹泻的病因复杂.这些结果并不能反映其预防致 病性大肠杆菌的真实情况.喹赛多对仔猪大肠杆菌感染的预 防研究未见报道.本试验中,大畅杆菌在肠道的定殖通过直畅 粪便中的大肠杆菌数间接评价.由于木给饲药物的接种猪直 肠粪便中大肠杆菌总数增多(P<0.O1)t喹乙醇或喹赛多饲 喂猪直肠粪便中大肠杆菌总数变化不明显(尸>0,05).但接 种的血清型大肠杆菌数均低于未添加药物猪(P<0.05).这 些结果显示喹赛多对肠道内接种的大肠杆菌有抑制作用. Spierenburg等]根据喹赛多和喹乙醇在畅道内的浓度 分度和其对肠道病原菌的MIC值估算猪饲料中100mg/kg 喹赛多和100mg/kg喹乙醇的抑菌浓度可分别到达空肠中 段和空肠人口.这种肠道内浓度分布上的差异可能解释了本 试验中的结果.即喹赛多饲喂猪直肠大肠杆菌总数和接种的 血清型大肠杆菌数低于喹乙醇饲喂猪 抗菌药促进动物生长的机制仍不清楚.现多认为主要是 其改变了肠道徽菌群.特别是对肠道病啄徽牛物(如致病性大 肠轩菌)的抑制仆_:用".本试验证实喹赛多对体内大肠杆菌 有抑制作用:lOOmg/kg喹赛多提高平均日增重2O,这与 Broz等报道的结果相似喹赛多对猪的促生长作用可能与 其抑制肠道痫性太肠杆菌.或阻止其对肠上皮细胞的粘附 有. 参睾文献 ]VorakM.Herzig1,Carbadoxincombinationwithfurazo|idone inthepreventionofenteralandgrowthdisordersinweaned pglets~_lj.VetMed(Prague).1978.23(2):65—76. ?jYenJ'I.NienaberJA.PondWG,elal,Effectofcarbdoxon growth.fastingmetabolism.thyroidfunctionandgastroin— testinaltractinyoungpigs[J].JNutr,1985,115(8):970—979. [3]李同洲.李德发.谯仕彦.等.喹乙醇在不同蛋白水平下对仔猪生 产性能的影响[J].饲料研究,2000,4:11—12. [4]王玉莲,袁宗辉.朱惠玲,等,喹赛多对断奶仔猪生长性能和胴体 品质的影响[A].湖北省牧兽医文集[c3.武汉.湖北科学技术 出版社,2002,690—694, [5]范盛先,袁宗辉.王大菊,等.喹赛多体外抑菌试验[J3,华中农业 大学,2000.19:51-54. {slSarmientoJI.CaseyTA,MoonHW,Postweaningdiarrheain swine:Expweimentalmodelofenter0t0xigenicEscherichiacoli infection[J].AmJVetRes,1988,49(7):1154—1159. [7]曾振灵.陈杖榴.冯淇辉,等.沙拉沙星对实验性感染猪链球菌病 及大肠杆菌病的药效学[J],中国兽医,2000,20(1)70— 73, [83BertschingerHU.BachmannM,MettlerC,eta1.Adhesivefire— briaeproducedinvivobyEscherichiacoli0l39:Kl2(B):Hlas. sociatedwithenterotoxaemiainpigs[J].VetMicrobio1.1990. 25:267—281 r — qlSpierenburgTJ,JagerIP.GraafGJ.ela1.Concentrationpro— filesofcarhadox,olaq'findoxandcyadoxalongthegutofyoung pigs[A].Veterinarypharmacology.toxicologyandtherapyin foodproducinganimals[C].4thcongressofEuropeanAssocia— tionforveterinarypharmacologyandtoxicology.Hungary. 1988,30. [101]VisekWJ.Themodeofgrowthpromotionbyantibiotics[J].J Animsci.1978,46:】447—1469. [11]HenryP.Effectofantibioticsontissuetracemineralconcentr ationandin*estinaltractweightinbroilerchicks[J],PouhSci, 1987,66:l014. L12]SarmientojI.MoonHW.Postweaningdiarrheainswine:Ef— fectsofoxytetracyc!ineonenterotoxigenicEscherichiacoliin— fection[J].AmJVetRes.1988.149(7)t116O一1163. [13]BrozJ,SevcikB.Determinationoftheoptimumeffectivedose ofthestimulatorcyadoxinpigletfattening[J],BiolChem Ziv,')cisneVyzobyVet.1979.15(4):319-325. (下转648页) 648中国兽医2005年11月第25卷第6期ChinJVetSciNov.2005Vol?25o.6 [2] [3] [4] ofbenofloxatin,danofloxacin,enrofloxacinandofloxacinin chickentissuebyhigh—per(ormanceliquidchromatography[J]. ChromatogrBBiomedApp[.1994.653(1):69—76. DelepineB,Hurtaud—PesselD.SandersP.Simultaneousdeter— minationofsixquinolonesinpigmusclebyliquidchromatogra— phy—atmosphericpressurechemicalionisationmassspectrome— tryl'J].Analyst,1998,123(12):2743—2747. HaremerP.MilchvissenschaftWH.Quantitationofnine quinolonesinchickentissuesbyhigh—-per(ormanceliquidchro- matographywithfluorescencedetection[J].ChromatogrA, 2000,882(1—2)t63—77. HobtzappleCK,BuckleySA,StankerIH.Practiceandtheo— ryofenzymeimmunoassaysEJ].AgriFoodChem?1997,45 1984. I-s]李君璎,黄憔让.免疫生物学概论[M].北京:高等教育出版社? 1992.55—78. [6] [7] [8] [-93 TijissenP.Practiceandthearyo(enzymeimmunoassaysi'Mj. Lsevier:Amsterdam,1985.83—285. 陈新建,陈梅英.免疫学技术在植物学中的应用I-M].北京;中 国农业出版社,1998.54—58. HourwitzF.Thechemistryandfunctionofproteini'M].New York:AcademicPressInc,1963.19O. 张启元.放射免疫测定[M].天津:天津人民出版社,1989. PreparationofImmuneAntigenandDetectionAntigenonEnrofloxacin LINBen—fu.ZHANGNai—sheng',YANGZheng—tao,YUANLi—hong,GUOChang —ming(Collegeof AnimalScienceandVeterinaryMedicine,JilinUniversity.Changchun130062,China) Abstract:Enrofloxaein(Enro)asflsemiantigenwascoupledwithcarrierproteinbovineserumalbumtopreparetheim— muneantigenEnro—BSAby?一 hydroxysuccinimideester(NHS)method.Enrowascoupledwithcarrierproteinovalbumin (0VA)andusedforthepreparationofthedetectionantigenEnro— OVAbythesamemethod.WiththeUVscanningandani— malexperiment.theresuhindicatedthatthecompleteantigensweresuccessfullyobtainedandthenthemonoclonalantibodyfl— gainstEnrowithimmuneantigenEnro—BSAanddetectionantigenEnro— OVAwerealsopreparedlately. Keywords:enrofloxacin;bovineserumalbum(BSA);ovalbumin(0VA);UVscanningspectrum (上接645页) ProphylacticEffectofCyadoxonExperimentalEnterOtOxigenicEscherichiacoli InfectioninPiglets DINGMing—xing.YUANZong—hui.,WANGYu—lian,ZHUHui—ling,FANSheng— xian(MOAKey LaboratoryofFoodSafetyEvaluationandMOAReferenceLaboratoryfortheTestofVeterinary DrugResidues,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070,China) Abstract:OnehundredandfiftyLandrace×Large— Whitegeldpigletswererandomlyallottedtosixgroupsof25each.Pigs ingroup1andgroup4weregivenbasaldietwithoutanymedicine.pigsingroup3and6beingfedbasaldietsupplementedwith 100mg/kgcyadox,andpigsingroup2and5beingfedbasaldietsupplementedwith100mg/kgolaquindox.Pigsingroup4,5 and6wereorallygiven10'.CFUofEscherichiacoli(E.coli.0l39:K88)whilepigsingroup1.2and3weregivenequalvolume ofalkalinebrothasflplacebo.Therewerenodifferences(P>0.05)inthefeealsheddingoftotalE.coliortheinoeulatedE.coli betweenolaquindox—supplementedpigsandcyadox— supplementedpigs.However.thefecalsheddingoftheinoculatedE.coliin theolaquindox—orcyadox— supplementedwaslower(P<0.05)thanthatintheinoculatedeoptro1.TheincidencesofEscherichia coliinfectioningroup6and5wereboth16,lower(P<O.01)thanthatingroup4(68).Averagedailygain(ADG)wasim— provedbytheadditives(Pd0.05).ADGinthecyadox— supplementedwashigherthanthatintheolaquindox—supplemented. ADGandfeedconversionratio(FCR)ingroup6wereimprovedby11.9%and7.9respectively,higherthanthoseingroup5 (4.2and1.50A),whereasADGandFCRingroup4weredecreasedby9.6and8.4.Theseresultsindicatedthatcyadox cannotonlypreventEscherichiacoliinfectionefficiently.butalsoimproveADGandFCRsignificantly. Keywords:eyadox;enterotoxigenicEscherichiacoli;prophylacticeffect;piglets *Correspondingauthor