不脱钙的牙齿骨骼塑料包埋制片技术及方法探讨

不脱钙的牙齿骨骼塑料包埋制片技术及探讨 华 西 口腔 医 学 杂志 第 , , ,年 , ,卷 第 ,期 , , ,月 , , , , ,, , ,, , , ( ; ,, , , , ,, , , , , , , , , , , , , , ,, , , , ,, (, ,,, ,, , , ， , ,【 章 编号 】,, , ,,, , ) , , ,, ,文 ,, ,, (, ,, , ,, , ? 方法介绍 ? 不 脱钙 的牙 齿 骨 骼塑 料 包埋 制 片技 术 及 方法 探 讨 ，李成库 吴 哲 ，马冬丽 ，洪丽华 ，孙宏晨。 ,吉林大学口腔医院 修复科; ( (( ,牙体牙髓科;,病理学教研室，吉林 长春 ,,, ) ( ,, , 中图分类号】 , , ( 【【 , , , 文献标识码】 , 牙 齿 和 骨 骼 中 含 有 大 量 无 机 钙 盐 ， 硬 脆 致 密 ，难 切 易 ,, ( 包 埋 聚 合 碎 。常 规 的牙 齿 骨 骼 石 蜡 切 片 方 法 需 脱 钙 后 变 软 才 能 切 片 ， 将 经 固 定 、 脱 水 、浸 透 后 的 标 本 置 入 平 底 、 薄 壁 、 洁 这种切片不能对钙 的分布等矿化程度进行观察研究 。塑料包 净 、干燥和 大 小相适 宜 的小玻 璃瓶 内 ，切 面朝 下 ，标 ，能保 留矿化结构进行组 织病 理形 号 。然记编 埋是一种新兴的制 片技术 后加包埋剂 ，盖上胶 盖，盖上插入针头 ，放在真空干 ,, , ,,;,, 态 学 观 察 。 本 文 介 绍 甲 基 丙 烯 酸 甲酯 ( ,, , ,,,,,， , , ，,?冰 箱放 置, , ,, 燥器 内连接 真 空泵抽,, , , 。为防止标 ,,, 包 埋 制 片 技 术 并对 其方 法 进 行 探 讨 。 ) 本 漂 浮 移 用 针 头 或 牙 签 穿 过 瓶 盖 顶 住 标 本 ， 移 置 ,?温 箱 聚 动 ， 合 。 当 包 埋 剂 呈 半 聚 合 状 态 ，但 还 未 完全 凝 固 ,, 方 法 时取 出 固定 标 本 的针 头 或 牙 签 ，再 次 加 包 埋 剂 至 标 本 上 方 约 ,, 标 本 及 固 定 ( , ,处 ，盖上带针头 的胶 盖再抽真空, 左右 ，移 回, , ,, , , ,?温 ?因正畸需要拔除 的人牙 、不能保 留的龋 齿、恶性肿瘤 , , 箱聚 合 。, , 即可凝 固成 透 明的,,,包埋 的组织块 。用玻 手 术 切 除 的 含 牙 的颌 骨 ， 按 唇 舌 方 向 将 牙 及 牙 周 组 织 锯 成 璃 刀或钻石 笔或 小砂轮片划割玻璃瓶 后，敲碎 玻璃 瓶取 出标 ,厚片，,,甲醛固 定。?大 鼠及犬等 动物实验标本 ，经 ,,, , 本包 埋 块 即可 进 行 切 、锯 或 磨 片 。,,多聚 甲醛 血 管 灌注 固 定 后取 材 。 ,, ( 切 片 、伸 展 、 裱 贴 及 染 色 , 脱 水 ( , 先用 平 板 金 属 锉 或 电动 砂 轮 锉 磨 包 埋 块 面 至 露 出 组 织 先采 用, , 乙醇 一 水 乙 醇 和 正 丁 醇 等 量 混 合 剂 逐 级 脱 , 无 平面 。组织 周 围包 埋剂 过 宽部分 ，用钢 锯或 电动 砂轮锯 磨 水 ， 最后 正丁 醇 彻 底 脱 水 。 具 体方 法 见 参 考 文 献 〔】 ,。 掉 ， 以减 少 切 片 机 和 切 片 刀 的 磨 损 。将 修 整 好 的 组 织 包 埋 块 ,( 浸 透 , , ,, , 固 定 在, , ,硬 组 织 切 片 机 上 ，用 ,型 钨 钢 刀 削 平 切 全 后 ， 依 次进 行 以下 浸透 :? ,, ,,,和 无 水 乙醇 , ; :的 ,, ,，慢 切慢退, 片。为防 改用手动开关 ，并调整 厚度 为, 次, , 止 切 片卷 曲或 皱 褶 不 易 展平 ， 用 经 , ,乙 醇 湿 润 后 的 载 玻 片 ,, , , :? , , ,,,和 邻 苯 二 甲 酸 二 丁 酯 ? , , , ,, :的 包装盒 内的薄纸片贴在组织 包埋块表面 ，手持纸片 的另一端 ,, ,,,, ,,，,, ) , , :() (,,,, ,, ,, ,,,、,, ,,, , , , ,, , ,,, , ,, 随 切 片 机 同步 移 动 ，切 出 的 切 片 即 贴 在 纸 片 上 。将 组 织 切 片 ,,,, ,,, ，, , ,, ,和 无 水 过 氧 化 苯 甲酰 ,, ,, ,,,, , ) ， 于 磁 力搅 向上纸 片朝 下平放 在,,?温 水表 面上 ，轻轻 抽动纸 片 ，借 , ，充 分 溶 解 混 合 均 匀 后 ， 浸 透 , , ,, 每 天 拌 器 搅 拌 , ,, , , ， 助 乙醇与水混合反 应所产 生的表面张力 ，使切 片与纸片分离 , ,抽真空,, 。 并漂浮在水面上 。接着将切 片捞贴在涂粘贴剂 的洁净载玻 片 (, , 配 制包 埋剂 上 ，再往切片上贴一塑料薄 膜 ，用圆玻璃瓶或其他 圆柱体 从 :的 和 ,氢 先 去 除,,,中的 阻 聚 剂 ， 方法 是 :将 ,, ,,, , 切片 中间向两侧滚压 ，驱赶 出水和气泡 ，使切 片与载玻 片紧 氧 化 钠 水 溶液 加入 分液 漏 斗 ，充 分 震 荡 混 合均 匀 ，静 止 分 层 ,? 密 地 裱 贴 在 一 起 。 将 数 张 裱 贴 好 的 载 玻 片 夹 在 一 起 ，, 次 次 后 漏 弃 下 层 。如 此 反 ，再 用 蒸 馏 水 以 同 样 方 法 洗 , ， 以下 温 度 烤 干 。去除复 , 氢氧化钠 ，然后往分液漏斗 内加无水 氯化钙 ，震荡混合 :的 将 组 织 切 片 上 的 塑 料 薄 膜 取 下 ， 用 , , 甘 油 和 后放置数分钟，吸除水 ，滤纸过滤除氯化钙 。 (, , 的, , , , , , ( ，荧 光 显 微 镜 检 查 。用 于 光 , ,, , , , 封 片 (, , , ) ,,, , 包 的 配制 方 法 :取 去 除 阻 聚 剂 的,,, , ，, , 镜 检 查 的埋 剂 切 片 ，需 经 乙 二 醇 乙醚 乙酸 酯 脱 塑后 再用 甲苯 胺 蓝 ,, ，无 水, , ,,, , , 放入 烧杯 中 。,,?恒温 磁 力搅拌 器搅 , ,, 特 或 改 良的, , , 殊 染 色法 染 色 。 , 或 ,拌 , ,, 更 长时 间 至 较 粘 稠 ，密 封 存 于 ,?冰 箱 。 使用 前 , ( , , 锯 片及 磨 片 ,,配制 ，使用 前取 出待 升至室温 后再 启封用 ， 以免空 气中 对于不 能制 作切片的标本 ，如带金属种植 体及 其他 口腔 潮 湿 的 气 体 流 入 带 进水 。 材料 的标本等 ，经,,,包埋后种植 体等与组织 凝固在一起 ， 可做 锯 片 或 磨 片 。 用 低 速 金 刚 石 切 割 机 安 装 上 超 薄 金 刚 石锯 【收稿 日期 】, , , , , ; 【 回 日期 】, , — , , , , ,’ , , 修 ,,,—, 片 ，将标 本连 同金 属种 植体 锯成 ,,, , ,厚 的薄片 ，用 落射 ，【作者 简 介 】吴 哲 (,, ) ,, 一 ，女 ， 吉 林 人 ， 副 教 授 ， 博 士研 究 生 光偏 光显微镜 及扫 描电镜进行观察和研究 。锯 片厚 ，细胞重 通 , , , , ,, , , 【 讯 作 者 】孙 宏 晨 ， ,:,, — , , , 叠，应用范 围有 限。如果需要进行细胞 学观 察研 究，可将锯 华 西 口腔 医 学 杂 志 第 , , ,年 , ,卷 第 ,期 ,, ,月 , ,,,, ,,,, ,, , , ,, , , ,, ,,,, ,,, ( , , , ,, ,,;, , ,,,,,, ,,,(,; , ,, 箜 : : 片 磨 至 , , 右 。无 锯 片 机 可 采 取 磨 片 法 ，手 工 磨 片 的方 , 左 ,, 时间充分搅拌，待 完全溶解后再存放, 才 能使用 。为此使 法 是 先 用 砂 轮 机 磨 至 , ,厚 ，再 将 其 中 一 面 依 次 用 粗 油 石 , , 配 用时须提 前 ,,, 制 。? 配制 浸透剂 和包埋剂 的温度不宜 加 液 体 石 蜡 、, , 、,,目、 ,,目及 , , , 目 , , , ,目的 砂 纸 及 细 油 超过,,?，高温 可 引发爆 聚成 废 品，另外聚 合 时的温 度 高 石 加 液 体 石 蜡 逐 级 磨 平 ， 细 白绸 布 上 磨 光 ，洗 涤 精 清 水 漂 会导致包 埋块硬脆不 易切 片。?浸透 和包埋前减压抽真 空 ，洗 ，滤 纸 吸 干 表 面 水 ，无 水 酒 精 脱 水 并 洗 除液 体 石 蜡 片 刻 ， 可 使浸透 比较充 分 以避免 或减 少气泡 ，提 高包埋 质量 。? 氯仿数分钟 置换 出酒精 。玻璃板上放一滤纸 ，已磨好 的标 本 ,,,易挥 发 ，对 健康有 害 ，操作 时应注 意防护 ，尤其 是减 :的市 售 , ,面 向上放在 滤纸 上 ，往 组织 片上 滴加 ,, , 胶和 氯 压抽真 空应在通风橱 内进 行 。?,,, 包埋剂溶 解塑料制 品，仿 ，立即将洁净 的载玻片放在组织片上 ，夹子夹 住压平 ，数 ? 故要用玻璃容器 、量具 和包埋模具 。 包埋块遇高温则变软 分 钟 后 粘 贴 牢 固 ，接 着 手 持 载 玻 片用 上 述 方 法 磨 另 一 面 至 所 甚至熔化 ，紫 外线 、超 声波 、辐 射等能影 响包埋块 的性质 。需 厚度 。 故 应 将包 埋 块 置 入 干燥 器 内 闭光 存 放 。 ( ,, 染 色 , 讨 论 ， 经 浸 透 、 包 埋 、 聚 合 密 封 进 入 组 织 和 细 胞 内 的 ,,, 与 组 许 多 口腔 医 学研 究 都 需 要 制 作 不 脱 钙 的 牙 齿 和 骨 骼 的 切 织 和 细 胞 的 分 子 结 合 形 成 共 价 键 ， 阻碍 组织 和 细 胞 与 染 料 结 片、锯 片或磨片 ，以观察研 究牙齿骨骼 的矿化程度 、成骨情 .