应用RT-PCR技术鉴别软组织小圆细胞恶性肿瘤

应用RT-PCR技术鉴别软组织小圆细胞恶性肿瘤 应用RT-PCR技术鉴别软组织小圆细胞恶 性肿瘤 床与窖验病理学杂志JClinExpPrahol2(X)6Fl1_卫 应JI1RT-PCR技术刖软组织'bI~l细胞恶性肿瘤 鹿而娟.李锋.陈云昭.常彬,陆天才,胡文浩,李洪安.蒋金芳.部王琴 关键词:种经外f榴.nn?谢.J转录聚台嘶镀厦 懂.鼬川 H7j【中图分娄号:]264:l{73g7文献标识码B 文章编号:I呻I7399f2@16)c】】OI? 卦1,【胞l十甫址『目,甩始冲终外胚 匿料fw】储纹肌肉痂低分化滑膜f自辔等大多Ih ?,啦成H的小圳胞所'I墟ii'细织脏意多样『l 小咖刿j抱多腻高度出rld~J忡啼墒情世l畦匹主生预聒较 器近'米研究u武.止多数,b}l制胞}r存特开性 乜件研他融JlL匹这些朴件r,色体埽恤和融J 圈同娄小?细胞艏III特什丹,为茸诊断和 竹奘提r轴晌仆】{h. I材料与方法 Il临床资料俐I电性25qB皑艇现盐也块】 个爿余^院X线I_示"懈均匀的川影B :盐}q1In~?illx7R?低『声. 声j'缘小地址f示fI)右肺-l】?{内 占伸悱晡竖(21而肺多发转#州双删胸腔概液.(3jr nIIq州段J自?4肺,张霉骑宦榆奇:CEAI9fu】. AFP(20l1mIF624F,?IBGI8SO"e/l?JCA, 99u一一r"仃毓雌呵缘木阶组织瞧病榆倒2.异 性.2,般蚍I腋下包扎3^^眦f检:/r腋下3L:iii 4irlL也块扞清.f1师叫幢"L{,能抬举滔础曼 线片示:I删呲下轼,n织JI'I'JJE.束n包垃肋旨锁忖 朱肄常穿刺:恶[~klJ,fJ瘤细胞求f1蜡_1后选 呲会诊随J忠JL于IIJ』地r I2方法 12I也疽蛆化'法抗体向I:g川nftl『_n?tml n,in…l】lrlt~'lig(:llhls'^NSECD99s100蛋白.均匀 mk"蛰 I22一}法RTT'{f蚶也埋【RNA抽捉步 RTPCI{&鞋式Plt恒廊怍系址史R'I'l(:I{反应条 F{州cH),_I)216忙…ll2005E)524 ?『I:H.#m5I)#fr'帆f:舒 llj 扦?":新蟠地MI-痫忡jE畦鞘青j寓? r#理}戢f事.r832~2 件打葡:眨?(Ig78)女叶 #锌cIu^}攫十师m?I件扦: c《l12D57125m~11[u【I_?sf,mall'i,inl~ 件:51}3D…,9515l?l?.94130s坦儿45sl退火黼 世盟引物见文l械)72?6()一.4(}德环,7210n~irt 终术延伸Pcn产物2%琼脂销毹腔电泳.BI(I-R^【】鞋幢 图像成慷仪坦察结 J23序PCR』物…f坶LI工或墟牛物挫术刊纯 化仆址行H-』删序 2结果 21病理栓查倒I后脚暇肿瘤15—111…201敞益 噼帖连哪!嗬地细腻.龌红暗红镜1盘:1n啦状凡小 敛的小形瘤细胞组成自细胞被纤维管j}剂戍' ?核阿孵或卵l形.髂惟楚,眦质少】】境界下清f罔I) 饱疫袁型:CKvlmcnlinNil均悱.CgA弱NSE, CI)9刚恼岬硷断:(腹惟)小细胞嚆 倒2艇质软衅堆,5洲j"1.x2?_表而机 糙厦帷.切血脏红部抒岍.结址镜椅细胞弥漫 南且尉绕杼r放射状排州.束婀J1曲.晰『_『胞杖 多为形f墒幢舒裂案胞质丰富部抒淡,郫竹 |嚆髓喝罹(2}龟痤衰型:ntm?,…1刚性…l? 瓶m,rr1)t,lJll—1)45HMB45CKLk…-J外院饱瘫 -~EfP,聚:SynNSE{:1399j肚Imlll_I?盟白川rF特 睛钺船也银纤I增多.凡部舒阿绕m管罔瘸钏啮均 南芹银玎堆乜缆l1AS船包性病理诊断(腋下}肉 嗬f顷恶血恃外胜埔排际黼洲_【f自瘤外鸵会诊结 (fI)小细胞蓝刖l.顺PNET 22一步法RT—P(结果2删均衍I'NET特异融台 ?1fEw-EHI.的榆删驶腺泡状惜垃肌『瘤 EWS-I l'Ax3,]FKHR础?榴帆I槛,FuI融啬 目I例I【蚍#像?蝣胞被m?"荆* 'R.胞棒f或即… 06?#床验病理学杂志,ClinExl,,,/21Xl6一:22 目22悖:】*?.?小.胞臃? .jt细胞碴 旧(罔3)州2愉…PAx7F'KHH(J4) 目3I~-acII.,EWS-I11RT-PCR产自泳结 j1j{』t小234}-f?262IM?LIk?|,.IItl性"m,: EKSF1j【!. irl 23DNA到序结果EWFIlIfilP'tX7?KIIRH:l{f物 均羟"删坫与…,kST【L刈卟f唰选9897 234hD I54bD 目4actin,pAX7-FKHRRT?PCR电泳 增&^23dmj54hp?:Mk:Hf'l IAX7Jk}{H2:H?n 3讨论 横纹肌峒(nMS),I'NE3l司属小悔??肿瘤.太多数 情况l惜』1:0免疰组化和电镜茸下毁可以将其制忸些 嘛制则是外利病诊断铷域rf一曲大难点圆帅 咆rlLl'!~i类型下旧.1珠表础L物行为和等而也, l? 31临床特征PNE~l发于儿少年,址f见于口腔, 雅1熳雌等部fiLMS墨IL市常见轼组{恶捕之 .常发n砸晋l;泌尿许道脏躯十等部RMS 工有胚腑(ERMS)隙池I~,RMS)和少的多形 【PRMS)3^RM5生仃率,足IOCk而ERMS5/I. ?}苷为70% 32病理特点PNETl学特山小形瘤细胞酞纤维 忤组织舒剖成讣状或结肯『.常-H-,n一\t~dghl嫡 目5IRr-I-CRw'njIgi,n~ankAI~3271166 J . 目^2RT-l('R产11AX7I'KIIl{(,X967,17 临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2006Feb;22(1)?107? 团和假菊形团.PNET瘤细胞核形不规则,染色深,胞质少或 无,也有胞质呈透亮状的区域.ARMS瘤细胞为纤维间隔分 割成不规则腺泡状或巢状,瘤细胞有时围绕血管呈放射状或 假菊花状排列,部分区域瘤细胞弥漫排列,部分几乎完全呈 实性排列而缺乏腺泡样排列结构,该型被称为实体状 ARMS,诊断尤其困难.例1可见到瘤细胞在血管周围呈血 管外皮瘤样的放射状排列,瘤细胞核形不规则,染色深,也有 胞质呈透亮状的区域.例2不具有腺泡样结构,为实体状 ARMS.细胞小圆形,胞质少而淡染,部分胞质透亮. 3.3免疫表型特征骨外EWS/PNET的诊断基本上是靠 免疫组化,CD99为其诊断及鉴别诊断相对特异性的指标. 目前的研究表明,PNET肿瘤细胞对CD99,NSE常呈强阳性 表达,对一些神经标记及间叶标记可呈现不同程度的阳性反 应,也可局灶性地表达上皮标记.诊断RMS的免疫组化指 标为间叶和肌源性标记如vimentin,desmin,S-actin,myoD1, myogenin等.例1CK,vimentin,NB阴性,CgA弱阳性,NSE, CD99阳性,与文献报道基本一致.例2vimentin,S—actin, NSE,CD99阳性,desmin,S一100蛋白,myoD1阴性,myogenin 质阳性.最初认为CD99对PNET的诊断具有较高敏感性和 滑膜 特异性,后来的研究发现CD99在ARMS,粒细胞肉瘤,肉瘤等肿瘤中也可表达.所以CD99的相对特异性,需结合 病理组织学特点,免疫组化,电镜和分子生物学手段综合考 虑. 3.4分子生物学特征研究发现一些软组织肉瘤中存在特 异性染色体易位及其融合基因的表达,这不仅与肿瘤的发 生,发展密切相关,而且有助于肿瘤的分类,分型,也为其生 物学行为和预后的判断提供了分子指标. 研究表明80%一90%的EWS/PNET中存在特异性的染 色体易位t(11;12)(q24;q12)并形成融合基因EWS—FLI1. 另有5%一10%的EWS/PNET肉瘤存在t(21;22)(q22; q12)形成融合基因EWS.ERG,其他还有t(7;22)(p22; q12),t(17;22)(q21;q12)等染色体易位.应用RT—PCR方 法在部分的EWS/PNET中可检测到EWS—FLll或EWS—ERG 融合基因的表达,并且不同融合基因亚型的EWS/PNET具 有不同的预后,因而EWS/FLI1融合基因的检测具有诊断和 评价预后的意义. 研究发现,55%一90%的ARMS存在t(2;13)(q35; q14)染色体易位,另有10%一20%存在t(1;13)(p36;q14) 染色体易位并分别形成PAX3一FKHR和PAX7一FKHR融合基 因].而ERMS无这两种染色体易位.因此,检测染色体易 位或融合基因有助于RMS的诊断和分型,尤其是对小样本 的活检组织和实体状ARMS具有重要的诊断价值.确定易 位类型有助于判断ARMS的预后并指导治疗,具有PAX7一 FKHR融合基因的患者一般较年轻,病灶较局限,而具有 PAX3.FKHR融合基因的患者较易转移,PAX7一FKHR阳性的 患者生存率高于PAX3-FKHR阳性患者. 因此,肿瘤的病理诊断应结合组织学观察,免疫组化,特 染,电镜和分子生物学手段综合判断,以提高诊断的正确性, 减少误诊率,同时为临床治疗提供可靠的信息. 参考文献: [1]LandanyiM.Translocation—basedmoleculardiagnosisofsarcomas [J].AmJSurgPathol,2003,27(3):414—416. 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(上接第100页) 性病变及上皮内瘤变等),也可行次连续(指完整全层连续 切片)大切片或必要时多层取材(相距0.3—0.5cm,多层平 面取材)大切片,可从不同切面观察整个病灶(镜检),对早 期癌变,导管原位癌,浸润性导管癌的正确判断,对甲状腺微 小癌,隐匿癌的发现亦具有重要意义.同样也适用于肝癌, 肺癌,胃癌,前列腺癌,子宫颈癌标本的诊断和研究】.通过 大切片"地毯式"扫描观察,可网罗病变的全貌及其切缘或 周边病灶.多个剖面大组织块大切片将观察到病变的连续 性浸润性生长的全貌,得到更多动态观察的信息,具有更充 分的依据来分析病变的发生,发展,结局与预后.采用全层, 多层,次连续等不同方式大切片在病理诊断,形态研究方面 无疑是一项重要的切实可行的手段和可靠而简易的方法. 以上大组织块,大蜡块,大切片的制作(大肿块,亦可采 用全层组合式大组织块,大蜡块制作切片),一般不需增添特 殊设备,简便易行,能为病理诊断,科学研究提供更为全面客 观的方法,基层病理科亦可开展,值得推广应用. 参考文献: [1]RasaiJ.阿克曼外科病理学:上册[M].回允中,主译.沈阳: 辽宁教育出版社,1999:26. [21傅西林.乳腺肿瘤[M].北京:科学技术文献出版社,2003:171 — 173.